乳酸对肌酸激酶活性抑制作用的研究

应用酶活测定的方法分析了肌酸激酶在不同浓度乳酸中的活性变化．实验结果说明在失活过程中没有蛋白质的聚沉；肌酸激酶的失活遵循一级反应的一相过程；失活与乳酸浓度和作用时间呈正相关．通过对比实验结果显示，乳酸是通过其解离状态的H^ 改变了机体PH值而影响肌酸激酶活性的，并且就乳酸对肌酸激酶影响及其意义进行探讨．     

丙酮酸、乳酸对体外肌酸激酶活性的抑制作用

 应用酶活测定的方法分析了肌酸激酶在不同浓度的乳酸、丙酮酸中的活性变化.实验结果说明在失活过程中没有蛋白质的聚沉,失活与乳酸浓度、丙酮酸的浓度呈正相关.通过对比实验结果提示,丙酮酸离子、乳酸离子对肌酸激酶没有明显影响,丙酮酸、乳酸是通过其解离状态的H⁺改变了机体pH值而影响肌酸激酶活性的,作者就丙酮酸、乳酸对肌酸激酶影响及其意义进行探讨.     

孔扩散阻力对多孔催化剂失活动力学的影响(英文)

目前,在强扩散区城中,失活催化反应的分离型动力学方程式仅能用于1级反应和1级独立失活系统。本文把此类方程式扩展应用于各种1,2级反应和1,2级独立失活系统,同时针对气-固相反应器中气相流动呈活塞流或全混流的情况,讨论了如何由实验求取有关的动力学速率常数值。研究结果表明,过程存在孔扩散阻力时,反应转化率随着反应时间降低的速率比无孔扩散阻力的情况要慢。此外,对浓度独立失活和分离型动力学方程的特征也作了论述。     

疏水吸附分离酵母 S.Cerevisiae 中的 L-天门冬氨酸酶的研究(英文)

研究了疏水柱吸附分离工业酵母（Ｓ．Ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）中的Ｌ－天门冬氨酸酶．考察了三种疏水吸附剂ＴｓｋｇｅｌＢｕｔｙ＿Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ,ＴｓｋｇｅｌＰｈｅｎｙｌ＿Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ和ＴｓＫｇｅｌＥｔｈｅｒ＿Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ６５０Ｃ的吸附性能．研究表明,通过选择控制流动相的ｐＨ值和离子强度,一次吸附过程中Ｌ－天门冬氨酸酶的分离纯化纯度可提高１４倍并保持较高的活性。实验还考察了吸附等温线类型和温度等因素的影响．结果表明,酵母中分子的电荷和疏水性是疏水柱吸附的重要影响因素．     

α－淀粉酶在脲变性过程中构象与活性的变化

本文利用蛋白质内源荧光和紫外吸收变化，研究了细菌α－淀粉酶在脲变性过程中的构象变化，并且与失活过程进行了比较．α－淀粉酶脲变性与失活的动力学数据表明，变性是单相过程过程，而失活是一个双相过程，快相失活的速度常数比变性速度常数至少大一个数量级．     

大分子拥挤试剂对人肌肌酸激酶折叠途径的影响作用研究

为研究大分子拥挤试剂对蛋白质折叠过程的影响作用及其机制提供有价值的依据,在大分子拥挤环境下进行了人肌肌酸激酶的折叠动力学研究,发现质量浓度高的大分子拥挤试剂(ρ=200 g·L-1的BSA、 Dextran 70与Ficoll 70)通过增进部分折叠中间体的错误聚集,使酶的复性产率显著降低.相对质量浓度较低的大分子拥挤试剂(ρ≤100 g·L-1)对酶的复性产率影响不大,但对酶复性的动力学过程有较大影响,一方面可使无活性单体的二聚化变为复性速率最慢的限速步骤,另一方面又加快了二聚化的折叠中间体到天然构象的复性过程.     

丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶突变体MEKK3的构建及功能鉴定

有丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶MEKK3(mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase kinase 3)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,属于MAP3K(Mitogen-activated protein kinase kinase kinase)家族,其在细胞增殖、凋亡、炎症反应、肿瘤的发生中发挥了重要的作用。本文利用分子克隆手段构建激酶功能失活(kinase inactive)型突变体MEKK3KI(391位赖氨酸突变为甲硫氨酸,K391→M391)的真核表达载体,并通过检测MEKK3KI对NudC的磷酸化作用及对细胞周期的影响以鉴定其激酶活性。根据GenBank提供的人源MEKK3的cDNA序列(NM_203351),扩增出野生型MEKK3(MEKK3WT)的目的基因,用重叠延伸PCR定点突变技术扩增激酶功能失活型MEKK3KI目的基因,并将其分别克隆至带有FLAG标签的真核表达载体pCMV-tag-2c和带有GFP标签的真核表达载体pEGFP-C1中。DNA序列分析结果显示,MEKK3KI基因序列成功将391位点的赖氨酸(K)突变为甲硫氨酸(M),表明突变体构建成功;免疫印迹分析显示,MEKK3WT、MEKK3KI重组体均在HeLa细胞中高效表达;体外模拟磷酸化实验结果显示,野生型MEKK3WT在体外可以磷酸化NudC,而激酶功能失活型突变体MEKK3KI无法将其磷酸化;激光共聚焦显微镜观察发现,野生型MEKK3转染HeLa细胞,细胞核形态异常,与凋亡细胞核形态相似,而失活型MEKK3过量表达不会导致细胞核明显变化。总之,本实验成功构建了野生型、失活型MEKK3的真核表达载体,为进一步揭示MEKK3生物学功能奠定了基础。     

从高分子构象与动力学到蛋白质折叠

针对作用在聚合物刷上的键拉力研究表明作用在接枝基面上的力随着聚合物刷接枝密度的增大反而减小,然而尾端单体上的拉伸张力并没有消失.高分子的构象和动力学转变决定了其物性和多种多样的应用,而生物大分子蛋白质作为由二十种不同属性的氨基酸构成的序列,更是具有由其序列所决定的特别的三维自然结构.本文就聚合物刷、聚合物纳米复合材料、聚合物网络等几种高分子体系的构象与动力学过程,及蛋白质构象和其折叠与去折叠的动力学过程做了介绍.特别是蛋白质的折叠与去折叠速率在单分子操纵实验中受到拉力的调控,通过测量这种拉力依赖的动力学过程、蛋白质的自由能曲面和折叠去折叠路径可以得到系统全面的研究.本文以肌肉蛋白titin的免疫球蛋白结构域I27为例对蛋白质折叠研究进行了阐述.     

萘氧化制苯酐钒钾硅催化剂的失活

通过化学分析、ESR、TG、DTA、XRD、SEM以及压汞法等手段,研究了萘氧化制苯酐钒钾硅系催化剂的失活原因。实验结果表明:失活催化剂中生成稳定非活性的KV(SO_4)_2、K_4(VO)_3(SO_4)_5晶体化合物,使低价钒增多,高价钒减少,以及由于新相的生成降低了活性物质的分散度等是造成催化剂失活的主要原因;比表面积的减少和平均孔径的增加也是不可忽视的因素。     

组氨酸残基在焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶催化功能中的作用

应用焦碳酸二乙酯(DEPC)对焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶(PFP)进行化学修饰时,酶的活性迅速丧失,呈拟一级动力学反应.羟胺的复活作用及修饰后酶的紫外光谱变化表明,酶失活的原因是DEPC与酶的组氨酸残基形成了乙酯基组氨酸复合物.失活动力学表明,酶的活性位点结合1分子DEPC即丧失活性.活性位点的组氨酸残基的完整性是酶活性的必要条件之一.底物F6P、产物果糖1,6-二磷酸(FBP)、P i及激活剂果糖2,6-二磷酸(F2,6BP)均可保护酶免被DEPC失活,底物PP i却没有保护作用.组氨酸残基在酶的催化功能中可能与F6P,FBP及P i的结合过程有关,而与PP i无关.     

Activity and Structure Changes of Arginine Kinase from Shrimp Feneropenaeus chinensis Muscle in Trifluoroethanol Solutions

Trifluoroethanol has often been used in protein folding studies. The changes in activity and unfolding of arginine kinase from shrimp Feneropenaeus Ghinensis muscle during denaturation in different concentrations of trifuoroethanol were investigated using far-ultraviolet circular dichroism and fluorescence emission spectra. Arginine kinase was inactivated in trifluoroethanol solutions. The tertiary and secondary structures of arginine kinase were also destroyed in the trifluoroethanol solutions. The unfolding and inactivation courses were measured and compared. Inactivation occurred prior to unfolding, which suggests that the arginine kinase active site is more easily damaged by the denaturant than the enzyme as a whole. The result also indicates that the arginine kinase active site is situated in a limited and flexible region of the enzymemolecule.     

Effects of Glycerol in the Refolding and Unfolding of Creatine Kinase

IntroductionProtein folding is the process by which the aminoacid sequence of a protein determines the three-dimensional conformation of the functionalprotein[1 ] . The elucidation of the molecularmechanism of protein folding from a disorderedpolypeptide chain to the specific native stateremains one of the major challenges inbiochemistry[2 ,3] ,namely,deciphering the secondhalf of the genetic code[4 ] .Molecular chaperonesplay an importantrole in protein folding in vivo aswell asin vitro.A cha…     

Characteristics of Two Intermediates Trapped in the Unfolding Pathway of Arginine Kinase Induced by Guanidinium Chloride

Equilibrium guanidinium chloride （GdmCl）-induced unfolding of arginine kinase （AK） was investigated by enzymatic activity, intrinsic fluorescence, 8-anilinonaphthalene-1-sulfonic acid （ANS） fluorescence, circular dichroism （CD） spectrum, and size-exclusion chromatography. The measurements showed that AK unfolded through two equilibrium intermediates： the molten globule state and the partly folded state. Both intermediates have no enzyme activity. The molten globule state exists at 0.4-0.8 mol/L GdmCi, perhaps after the N-terminal domain has unfolded but the C-terminal domain is still intact. The partly folded state occurs at 1.1-1.5 mol/L GdmCI with a hydrodynamic volume no more than 1.6-fold larger than the native state and a pronounced far UV-CD signal. Its ANS fluorescence intensity is about 50% of the molten globule state. This partly folded state shares similarities with the “burst” kinetic intermediate of protein folding.     

锯缘青蟹精氨酸激酶基因的克隆与表达

通过分子生物学方法,克隆得到锯缘青蟹（Scylla serrata）精氨酸激酶（Arginine Kinase,AK）开放阅读框基因序列.测序结果显示：该开放阅读框基因的序列长度为1 071 bp,编码356个氨基酸残基;该序列登录Genbank（GQ：851626）,序列比对结果显示,锯缘青蟹精氨酸激酶与凡纳滨对虾（...     

鹰嘴豆发芽过程中部分营养成分的变化规律

采用国家标准规定的方法,研究鹰嘴豆发芽过程中蛋白质、氨基酸、核黄素、异黄酮、膳食纤维的变化规律。结果表明,鹰嘴豆在发芽过程中蛋白质含量不断下降,由未发芽时的18.42%降低至第9天的13.50%。鹰嘴豆氨基酸的组成中,天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸含量较多。在发芽过程中,谷氨酸和精氨酸含量有所下降,谷氨酸含量由未发芽时的3.50%下降为第9天的3.10%;精氨酸含量由未发芽时的2.25%下降为第9天的1.72%;天冬氨酸含量则不断上升,由最初的2.51%上升至第9天的4.73%。异黄酮在鹰嘴豆中含量丰富,在发芽过程,其含量由最初的106.44mg/100g,上升到第9天的806.00mg/100g;核黄素含量也由发芽前的1.44mg/100g上升至第7天的1.85mg/100g;可溶性膳食纤维含量显著提高,不溶性膳食纤维含量呈下降趋势。通过对鹰嘴豆发芽前后营养成分变化对比的研究,希望为鹰嘴豆功能食品的开发和利用提供理论依据。     

黄姑鱼仔稚鱼发育过程中氨基酸和脂肪酸的变化

分别测定1、5、10、20、45日龄黄姑鱼仔稚鱼中的氨基酸、游离氨基酸、脂肪酸组成。结果表明黄姑鱼仔稚鱼的氨基酸组型和游离氨基酸组型是不断变化的。必需氨基酸中的精氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸5种氨基酸占必需氨基酸总量的70%左右。非必需氨基酸中的天冬氨酸、谷氨酸和丙氨酸占非必需氨基酸总量的60%左右。随着仔稚鱼的生长,游离氨基酸含量呈显著降低的趋势。1日龄仔鱼的游离氨基酸含量最高,为12.134 g/100 g;45日龄稚鱼的游离氨基酸含量最低,为1.497 g/100 g。黄姑鱼仔稚鱼的主要脂肪酸为:16:0、18:0、16:1、18:1和DHA。各日龄黄姑鱼仔稚鱼体脂肪酸含量差异较大,但仔稚鱼的必需脂肪酸DHA、EPA和ARA始终保持较高的含量。     

紫外-荧光分光光度法联用测定熊果酸对胰脂肪酶的抑制作用

在pH 8.0的Tris-HCl缓冲体系中,应用紫外-荧光分光度法作为研究手段,结合酶抑制动力学,研究了熊果酸对胰脂肪酶的抑制作用、抑制类型和抑制动力学常数,并探讨了熊果酸对胰脂肪酶表面疏水性的影响。结果表明,熊果酸是一种的竞争型胰脂肪酶抑制剂(半抑制率IC50为1.87±0.05 mg/mL,抑制常数Ki为0.68±0.03 mg/mL),且失活动力学时间进程能够证明熊果酸能很快的与胰脂肪酶发生作用并迅速的降低酶的活性;荧光光谱分析显示木犀草素能显著增强酪氨酸酶的表面疏水性,使胰脂肪酶活性位点的内部疏水性区域暴露出来,诱发了胰脂肪酶的解折叠,最终导致胰脂肪酶活性的降低。     

闽北3种人工林土壤游离氨基酸组成及其差异研究

3种人工林土壤游离氨基酸总含量表现出明显的垂直分布特征.针阔叶混交林和针叶林表层(0～20 cm)土壤游离氨基酸含量显著高于深层(20～40 cm)土壤的含量(P＜0.05);而阔叶林表层土壤游离氨基酸含量低于深层土壤的含量,但差异不显著.土壤游离氨基酸各组分均表现出显著的垂直分布特征,阔叶林表层土壤中天冬氨酸、谷氨酸、组氨酸、精氨酸和苯丙氨酸的含量显著高于深层土壤对应组分的含量,但苏氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸显著低于深层土壤对应组分的含量;针阔叶混交林表层土 壤中酪氨酸、组氨酸和脯氨酸低于深层土壤的含量,而其余组分均显著高于深层土壤的含量;而针叶林中除甲硫氨酸和赖氨酸外,其余15种氨基酸在表层土壤中的含量均高于深层土壤中对应组分的含量.3种人工林中无论是表层土壤还是深层土壤,游离氨基酸均以中性氨基酸含量为最高,碱性和酸性氨基酸含量次之,含硫氨基酸含量最低.表层土壤中天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬草氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和精氨酸的含量依次为:针叶林＜阔叶林＜针阔叶混交林,而赖氨酸和脯氨酸的含量则以针叶林为最高,针阔叶混交林次之,阔叶林最低;阔叶林表层土壤中络氨酸和胱氨酸含量最高.深层土壤中各组分氨基酸除赖氨酸之外均以针叶林中含量最低,针阔叶混交林次之,而阔叶林中含量最高.