COPS3的稳定干涉细胞系建立及其在NLRP3炎症小体激活中的作用

COPS3(COP9 Signalosome Subunit 3)作为COP9信号复合体的第三个亚基,在多种恶性肿瘤中高表达。本实验室通过酵母双杂交系统筛选,发现COPS3与NLRP3 (NOD-like receptor family, pyrin domain containing 3)存在相互作用。目前关于COPS3与NLRP3炎症小体的相关性未见文献报道。为了研究COPS3对NLRP3炎症小体的影响,我们利用慢病毒感染系统建立了稳定干涉COPS3的THP1细胞系,首先将COPS3的不同干涉序列片段稳定整合到THP1细胞中,通过嘌呤霉素压力筛选,应用实时定量荧光PCR(Real time PCR)手段检测COPS3的干涉效果,最终确定成功建立干涉COPS3的稳定细胞株。在稳定敲低COPS3的细胞株中,我们发现NLRP3 炎症小体的激活受到明显抑制。综上提示,COPS3能够正向调节NLRP3炎症小体的激活。     

干涉UBXN1慢病毒颗粒制备及稳定细胞系的建立

构建并鉴定UBXN1-shRNA慢病毒表达载体,以便应用RNAi技术以及慢病毒感染系统建立稳定干涉细胞系并进一步研究UBXN1的功能。将携带不同特异性干涉序列的DNA片段插入PLKO.1载体中构建慢病毒表达载体,并制备慢病毒颗粒。将慢病毒颗粒感染U2OS细胞,建立稳定干涉细胞系,应用real-time PCR和western blot技术分别检测U2OS细胞中UBXN1 mRNA和蛋白质水平的表达差异。重组克隆经酶切证实shRNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确,western blot检测证实设计的五条shRNA干扰序列有效的敲低U2OS细胞中内源性UBXN1的表达。成功制备UBXN1的慢病毒干涉颗粒,并建立UBXN1稳定下调的U2OS细胞系。     

急性胰腺炎患者血清外泌体在NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡中的作用机制研究

为了探究急性胰腺炎血清外泌体对于NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡的作用机制.首先选取2021年1月至2023年1月苏州大学附属第一医院收治的85名急性胰腺炎患者为研究对象,根据急性生理与慢性健康状况II(APACHE-II)评分分为轻症组45例和重症组40例,两组患者外周血中NLRP3表达采用蛋白质印记检验,IL-1β和IL-18浓度采用ELISA检验,表面分子CD63和TSG101的水平采用流式法检验.结果表明:与轻症组相比,重症组患者APACHE-II评分显著升高,外周血NLRP3蛋白表达、IL-1β和IL-18浓度、CD63和TSG101水平均上升,且NLRP3蛋白表达与急性胰腺炎患者的APACHE-II评分呈正相关.在细胞层面,以AR42J细胞作为对照组,取急性胰腺炎重症组患者外周血分离后的外泌体与AR42J细胞共培育作为外泌体共培育组,比较两组细胞的NLRP3、caspase-1、caspase-4、caspase-5、Cleaved-Caspase11、GSDMD-FL和GSDMD-N表达、细胞上清中IL-1β和IL-18浓度.结果表明:与对照组相比,外泌体共培育组细胞的N...     

慢病毒介导MCF-7细胞中FOXP2基因沉默体系的建立

为了实现FOXP2基因在MCF-7细胞中稳定低表达,采用基因工程的方法构建pMAGic7.1-shFOXP2慢病毒干扰载体,并将其与辅助质粒共转染HEK293T细胞,包装shFOXP2干扰慢病毒,收取病毒上清加入到MCF-7细胞中,培养48h,荧光定量PCR检测FOXP2的基因mRNA表达水平,Western Blotting检测FOXP2蛋白表达水平.获得了pMAGic7.1-shFOXP2干扰载体,从而成功建立FOXP2基因稳定干扰的MCF-7细胞株,为进一步研究FOXP2在乳腺癌发生发展中的功能提供了研究材料.     

甘蓝型油菜BnBRI1基因过量表达载体和RNA干扰载体的构建及遗传转化

构建了含甘蓝型油菜BnBRI1基因过量表达载体pFGC5941-BnBRI1和RNA干扰载体pFGC5941-BnBRI1-Ri,以根癌农杆菌介导的方法转化甘蓝型油菜"W679"下胚轴外植体,经PCR鉴定,获得18株转基因阳性植株,其中1株为BnBRI1基因过量表达转基因植株,17株为BnBRI1基因RNA干扰转基因植株.经RT-PCR鉴定显示,在过表达转基因植株中BnBRI1基因表达量比野生型甘蓝型油菜高,而在RNA干扰转基因植株中表达量比野生型低,RNA干扰BnBRI1基因的表达导致了植株的矮化,矮化植株将可用于油菜株型的遗传改良,以培育适于机械化生产的中矮秆油菜新品种.     

番茄CDT2同源基因RNA干涉载体的构建及遗传转化研究

真核生物CDT2是CUL4-DDB1 E3泛素复合体的组成部分,在细胞周期调控、DNA复制与损伤修复中起到重要作用.本研究克隆了番茄CDT2同源基因片段并构建了CDT2基因RNA干涉植物表达载体pBI121-CDT2-RNAi.通过根癌农杆菌介导转入番茄子叶,经组织培养成功获得转基因植株.半定量RT-PCR分析显示,转基因植株叶片内CDT2的表达量明显低于野生型植株.转基因植株叶片叶绿素含量比野生型明显升高.该研究结果揭示番茄CDT2基因的功能做出了新的尝试.     

[0,1]区间上一种双正交小波的构造

先构造[0，1]区间上分片多项式初始小波空间，再利用Legendre正交多项式构造上双正交小波空间，文章最后对线性情形举出例子。     

IPSec及其在动态IP隧道协议L2TP中的应用

L2TP是虚拟专用网中常用的隧道协议,在隧道建立过程中,Responder可以动态选择IP地址。本文分析了L2TP中存在的安全性隐患,提出并描述了一种允许L2TP向IPSec过滤规则库中动态添加规则,实现IPSecESP为L2TP提供安全保护的方法。     

Construction and application of L929 cell model expressing human bcl-2 protein

Recombinant eucaryotic expression vector pLXSN/s-bcl-2 has been constructed by cloning human bcl-2 cDNA containing the full-length open reading frame into the vector pLXSN in sense orientation, and a mammalian cell model expressing human bcl-2 protein has been established by electroporating the recombinant vector into mouse L929 cells. bcl-2 expression in L929 cells has no effect on the cell growth and survival under normal culture conditions, but it can enhance the survival of the cell in the challenge of some apoptosis-inducing stimuli, including tumor necrosis factor α(TNF α) and staurosporine (STS).     

对外汉语专业古代文学课程建设之我见

古代文学课是对外汉语专业重要的专业基础课。结合对外汉语专业的业务培养目标,澄清人们对对外汉语专业古代文学课的认识误区。从教材的选择、教学内容的取舍与侧重及教学模式与教学方法的设想与改革等方面,提出对外汉语专业的古代文学课程建设的意见。     

Cd2+、Hg2+复合污染下金鱼藻的细胞膜脂过氧化和抗氧化酶活性的变化

研究了不同浓度Cd^2 、Hg^2 以及二者共同胁迫对金鱼藻O^-.、MDA含量和抗氧化酶系统的影响。实验结果表明：Cd^2 、Hg^2 共同作用所产生的毒性效应大于单一Cd^2 、Hg^2 ，表现为协同作用。随着Cd^2 、Hg^2 浓度的增加，O2^-.、MDA含量先升后降，MDA峰值较O2^-.滞后；SOD、POD活性先升后降，表现为植物的一种抗性机制；CAT活性持续下降，在清除活性氧自由基过程中作用不明显。     

Na2CO3胁迫对蚕豆幼苗几种生理生化指标的影响

用Na2CO3处理蚕豆幼苗,处理浓度为25,50,75,100mmol／L,胁迫6天后取样,测定植株鲜干重、肉质化程度、细胞膜透性、丙二醛含量、脯氨酸含量叶绿素含量等生理指标．结果表明,一定浓度的Na2CO3促进了蚕豆幼苗鲜干重、肉质化程度、叶绿素含量的增加,100mmol／LNa2CO3处理明显抑制了蚕豆幼苗的生长．Na2CO3浓度超过75mmol／L时,蚕豆幼苗MDA含量急剧上升,质膜透性也明显增加,脯氨酸含量增加明显．