莪术醇抑制人结肠癌SW1116细胞增殖及相关机制的研究

观察莪术醇对人结肠癌SW1116细胞生长及肿瘤细胞凋亡的影响,以探讨其可能的机制.用不同浓度的莪术醇处理SW1116细胞,MTT检测莪术醇对SW1116细胞生长增殖的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;比色法测定Caspase-3酶活性;Western blot法检测Bcl-2、Bcl-XL的蛋白表达.莪术醇能以时间、剂量依赖性的关系抑制人结肠癌SW1116细胞的增殖,并诱导凋亡;莪术醇与SW1116细胞作用48 h和72 h后Caspase-3酶活性显著增强;同时,莪术醇处理SW1116细胞后,Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达下调.说明莪术醇可抑制人结肠癌SW1116的增殖,诱导其凋亡,机制可能与调节Caspase-3、Bcl-2/Bcl-XL表达水平有关.     

改良性柑橘果胶通过下调Galectin-3抑制膀胱癌细胞生长

目的 检测改良性柑橘(MCP)对人膀胱癌增殖和生长的抑制作用。方法 MTT检测膀胱癌细胞T24和J82细胞的活性。Western blot 检测T24和J82细胞中凋亡蛋白cv Caspase-3和cv PARP以及Galectin-3蛋白的表达水平。建立膀胱癌T24细胞皮下移植瘤裸鼠模型,灌胃MCP后,比较各组肿瘤重量和体积大小,免疫组化的方法检测各组别的增殖蛋白Ki67和凋亡蛋白cv Caspase-3以及Galectin-3蛋白表达水平的差异性。显微镜观察分析结果。结果 MTT结果证实MCP对人膀胱癌细胞T24和J82细胞活力有抑制作用(P<0.05)。Western blot证实浓度为2.0% 的MCP组别中膀胱癌细胞凋亡蛋白表达明显增高。灌胃MCP对 T24移植瘤荷瘤裸鼠的肿瘤体积和重量均有明显的抑制(P<0.05), 免疫组织化学染色定量分析表示700mg/kg组荷瘤鼠组织内Ki67和Caspase-3证实增殖指数降低(P<0.05), 其潜在靶点Galectin-3表达降低。结论 本课题研究显示MCP对膀胱癌细胞的增殖和存活的显著抑制作用,且Galectin-3表达降低。故MCP作为一种天然的膳食纤维,同样可以作为药物预防和治疗膀胱癌。     

白花蛇舌草中多糖抑制骨肉瘤的作用机制

为探讨白花蛇舌草(Hedyotis diffusa)活性成分对骨肉瘤的作用及其机制,对白花蛇舌草中分别提取的黄酮类、三萜酸类、香豆素类和多糖类化合物,用噻唑蓝(MTT)法检测不同提取物对MG-63细胞活性的影响;同时建立裸鼠骨肉瘤移植瘤模型,观察不同提取物对移植瘤生长的抑制作用;并通过流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化,蛋白质免疫印记(Western blot)检测Bax及Bcl-2蛋白表达水平.结果显示:4种提取物都对MG-63细胞的增殖具有明显抑制作用,并呈现明显的剂量依赖性,最优药物质量浓度为80μg/mL;在此质量浓度下4种提取物对裸鼠移植骨肉瘤均具有抑制作用,其中多糖类对MG-63细胞活性和移植瘤生长的抑制作用最强,明显促进MG-63细胞凋亡,阻滞细胞周期;Bax表达量在48h内随着白花蛇舌草多糖类提取物作用时间延长而增加,而Bcl-2表达量则降低.由上述结果可知,白花蛇舌草活性成分中多糖类的抗肿瘤活性最强,其作用机制可能是通过抑制骨肉瘤细胞增殖、促进细胞凋亡和阻滞细胞周期来达到抑瘤效果.     

三种抗癌中草药单一提剂及其组合剂抑瘤率比较研究

探讨并比较了苦参、半枝莲、白花蛇舌草的单一提剂水/醇提物及其组合剂对人结肠癌细胞株SW620生长的抑制作用.通过体外培养SW620细胞,加入终浓度分别为1、3、5mg.mL-1的单一提剂及其组合剂,采用MTT法测定药物对SW620的增殖抑制率(IR).结果表明单一提剂对SW620体外增殖均有抑制作用,且呈浓度剂量依赖性;中草药醇提剂抑瘤作用均强于水提剂.组合剂中,除半枝莲与白花蛇舌草水提组合剂比单一提剂作用弱外,其余组合剂均强于单一提剂的抑瘤率,且呈浓度剂量依赖性;中草药醇提液组合剂抑瘤作用均强于水提液.说明苦参、半枝莲、白花蛇舌草水/醇提取物对SW620细胞的生长均有抑制作用,醇提剂抗肿瘤有效成分多于水提剂;三种中草药组合剂抗肿瘤效果优于单一提剂(除半枝莲与白花蛇舌草水提组合剂外).     

升阳十一味丸对胃癌细胞凋亡及细胞周期的影响

研究复方蒙药升阳十一味丸对体外培养的人胃癌MGC—803细胞凋亡及细胞周期的影响。以不同浓度的蒙药处理MGC—803细胞,通过MTT法检测药物作用后细胞的增殖情况,并计算生长抑制率。利用倒置光学显微镜、Hochest33342/PI荧光染色、流式细胞术,研究蒙药诱导细胞凋亡的作用及对细胞周期的影响。结果蒙药能抑制MGC—803细胞的增殖,并具有良好的量效关系。2.5 mg/mL药物作用MGC—803细胞48 h后,光镜下可见核固缩、核碎裂等凋亡细胞形态学变化。流式细胞仪检测到"亚G1峰",细胞周期分析表明S期细胞较对照组增多,G2/M期细胞下降,阻滞于S期。说明蒙药升阳可明显抑制胃癌MGC—803细胞的增殖,并在一定浓度范围内诱导细胞凋亡,这可能是其发挥抗肿瘤的作用主要途径之一。     

重楼活性单体PP-26抑制结肠癌SW620细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的:探讨重楼活性单体PP-26对人结肠癌SW620细胞增殖抑制作用及其机制.方法:采用噻唑蓝(MTT)法和克隆形成抑制实验观察不同浓度的重楼单体PP-26对人结肠癌SW620细胞增殖抑制作用;PI单染及Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡水平;Western blotting检测PP-26对细胞周期、细胞凋亡相关蛋白以及Akt和ERK蛋白的表达.结果:与正常肝LO2细胞相比,重楼单体PP-26能显著抑制SW620细胞的生长,作用呈剂量-效应关系;随着PP-26浓度的增加,细胞克隆形成逐渐减少,与细胞对照组相比有显著差异;不同浓度PP-26作用后,细胞阻滞于G1期;PP-26作用细胞24 h后,CDK4、CDK6表达下降,P15、cyclin D1表达增加;不同浓度PP-26作用后,细胞晚期凋亡率增加,随浓度增加有上升趋势;PP-26作用细胞24 h后,线粒体相关凋亡信号通路蛋白Caspase-9、Caspase-3表达下降,PARP切割条带增加,细胞促凋亡蛋白Bax的表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-x L减少,p-Akt和p-ERK蛋白表达均下降.结论:重楼活性单体PP-26通过上调p15促进结肠癌SW620细胞阻滞于G1期,通过抑制P13K/Akt信号通路及ERK信号通路,活化线粒体凋亡通路,诱导细胞凋亡.     

MIR-187影响胃癌细胞恶性生物学行为的研究

探讨mir-187对胃癌细胞恶性生物学行为的影响;采用q PCR检测miR-187在胃癌SGC7901细胞、MKN45细胞和人永生化胃黏膜上皮细胞GES细胞中的表达,应用miR-187 mimics转染SGC7901细胞和MKN45细胞,通过MTT实验、流式细胞术和裸鼠成瘤实验检测miR-187对胃癌细胞增殖、凋亡的影响。结果 SGC7901、MKN45细胞中miR-187的表达明显高于GES细胞;与对照细胞相比,MTT实验显示转染miR-187 mimics后胃癌SGC7901细胞的增殖增快(P0.05),流式细胞检测表明miR-187mimics转染可以减少SGC7901细胞的凋亡(P0.05),裸鼠成瘤实验提示转染miR-187mimics可以促进SGC7901细胞成瘤(P0.05)。说明miR-187可以促进胃癌细胞生长、抑制凋亡和促进增殖,提示miR-187在胃癌恶性生物学行为中发挥重要作用,有可能成为诊断胃癌的新标志和治疗胃癌的新靶点。     

咪康唑通过抑制PI3K/Akt/NOX4通路诱导肺鳞癌H520细胞凋亡并增敏顺铂的机制

目的:探究唑类抗真菌药对肺鳞癌H520细胞的抑制作用和分子机制,以及其对顺铂敏感性的影响.方法:采用MTT法检测不同唑类抗真菌药对肺鳞癌H520细胞活性的影响,筛选出效果最佳的唑类抗真菌药.通过流式细胞术分析最佳唑类抗真菌药对肺鳞癌H520细胞凋亡及活性氧(ROS)的影响.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测最佳唑类抗真菌药对肺鳞癌H520细胞NADPH氧化酶-4(NOX4)mRNA表达的影响.Western blot法检测p-Akt、Akt及NOX4的蛋白表达.通过裸鼠体内肿瘤模型验证最佳唑类抗真菌药及其联用顺铂后的抑瘤效果.免疫组化法检测肿瘤组织中p-Akt和NOX4蛋白的表达情况.结果:14个唑类抗真菌药对肺鳞癌H520细胞活力均有抑制作用,且咪康唑半抑制浓度最低,选为最佳唑类抗真菌药.咪康唑能减少肺鳞癌H520细胞ROS的产生并诱导肺鳞癌H520细胞凋亡.咪康唑可抑制p-Akt及NOX4的表达,且咪康唑与PI3K/Akt通路抑制剂LY294002联用后,NOX4蛋白表达与LY294002单独给药组相比无统计学差异.咪康唑可削弱顺铂对肺鳞癌H520细胞p-Akt表达的促进作用,并可增加顺铂的敏感性.荷瘤裸鼠体内实验中,咪康唑可抑制肿瘤的生长,免疫组化结果显示,咪康唑可减少裸鼠肿瘤中NOX4和p-Akt的蛋白表达.结论:咪康唑可能通过抑制PI3K/Akt介导的NOX4的表达,诱导肺鳞癌H520细胞凋亡并增强顺铂抑制肺鳞癌H520细胞的作用.     

怀牛膝多糖对肺腺癌细胞系凋亡的调节

目的:研究怀牛膝多糖的抗肿瘤作用.方法:应用MTT法检测怀牛膝多糖在体外对肺腺癌细胞系(LTEP-a-2)增殖的调节,同时采用流式细胞术(FCM)检测其对LTEP-a-2细胞周期和凋亡的影响.结果:怀牛膝多糖对LTEP-a-2的增殖具有抑制作用,并可以诱导其凋亡.结论:怀牛膝多糖在体外能抑制肺癌细胞的生长,可作为一种抗肺癌药物.     

新型乳糖苯氮芥衍生物抑制肝癌细胞活性的研究

利用乙酰基保护的乳糖三氯乙酰亚胺酯作为糖基的供体,对硝基苯酚作为糖基的受体,合成了一种新型的乳糖苯氮芥衍生物,采用MTT、流式细胞术分析法探讨了其对肝癌7721细胞的生长抑制及其诱导凋亡的作用机制.结果表明,新合成的乳糖苯氮芥衍生物对正常细胞毒性较小,对7721细胞有明显的细胞毒性,能明显抑制肝癌细胞的生长;同时通过流式细胞术显示,诱导细胞凋亡是其抗肿瘤作用的主要机制之一.     

文殊兰弱碱性生物碱的抗肿瘤活性研究

研究文殊兰中弱碱性生物碱对不同肿瘤细胞的抑制作用,并筛选出敏感细胞株,观察凋亡形态;MCF-7细胞株、SMMC7721细胞株、SGC7901细胞株、HepG-2细胞株,MTT溶液,DMSO,Hoechst33258等;利用MTT法检测文殊兰弱碱性生物碱对上述肿瘤细胞的抑制作用以及Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态学变化;文殊兰弱碱性生物碱对上述细胞株均有明显的抑制作用,对HepG-2细胞的抑制作用更为明显,给药72 h后测定IC50=9.374 323μg/mL;Hoechst 33258染色法观察细胞出现凋亡小体,有凋亡现象发生.文殊兰弱碱性生物碱MCF-7细胞株、SMMC7721细胞株、SGC7901细胞株、HepG-2细胞株具有不同程度的抑制作用,且呈现一定的剂量依赖性,对HepG-2细胞的抑制作用最强,表现出良好的抗肿瘤活性.     

绿豆胰蛋白酶抑制剂BBI诱导肺腺癌A549细胞凋亡的研究

研究了绿豆胰蛋白酶抑制剂BBI对人肺腺癌A549细胞增殖抑制作用和对肺腺癌A549细胞凋亡的影响.采用MTT法检测绿豆BBI对人肺癌A549细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测和光镜观察绿豆BBI诱导A549细胞凋亡;Western-Blot检测凋亡蛋白Caspase3表达情况.结果显示:绿豆BBI对人肺腺癌A549细胞的增殖有明显抑制作用;绿豆BBI可以促使人肺腺癌A549细胞出现明显的染色质浓缩和凋亡小体,诱导人肺腺癌A549细胞的凋亡.说明绿豆BBI能抑制人肺腺癌A549细胞增殖、诱导人肺腺癌?A549细胞凋亡,实验为绿豆BBI抗肿瘤效应提供了依据.     

神经毒素MPP+诱发PC12细胞凋亡的实验研究

采用细胞体外培养、噻唑蓝(MTT)比色法、荧光染色技术、透射电镜、流式细胞技术结合的方法,研究了神经毒素MPP 对PC12细胞增殖和凋亡的影响,为进一步研究药物的神经保护作用提供实验模型.结果表明,MPP 对PC12细胞的诱导凋亡作用呈时间和剂量相关性.0.20mM的MPP 作用于PC12细胞48h后,细胞的存活率降低为60%,细胞核发生凝集和断裂,超微结构发生了一系列的变化,呈现出明显的凋亡特征.流式细胞技术的Annexin v-FTTC和PI双染法显示,活细胞占20.2%,晚期凋亡/坏死细胞占51%,早期凋亡细胞占6.75%.提示,MPP 能够诱导PC12细胞凋亡,是研究神经保护作用药物很好的体外实验模型.     

敬钊缨毛蛛蛛毒对人肝癌细胞BEL-7402细胞增殖、细胞周期和C-myc蛋白的影响

通过MTT方法可知敬钊缨毛蛛蛛毒对BEL 7402细胞增殖有较强的抑制作用(p<0.05),时效和量效关系良好.IC50为18mg/L.敬钊缨毛蛛蛛毒可以抑制BEL 7402细胞DNA的合成.流式细胞仪检测发现经过蛛毒作用的BEL 7402细胞凋亡率增加,细胞周期阻滞在G0/G1期.WesternBlot方法进一步检测到蛛毒作用BEL 7402细胞72h后,C myc蛋白表达减弱.实验结果表明,敬钊缨毛蛛蛛毒可以抑制人肝癌细胞BEL 7402的增殖和DNA的合成,其药理作用机理可能除了诱导凋亡外主要是使BEL 7402细胞周期相关蛋白C myc表达减弱,导致细胞周期的变化.     

GRIM-19基因对前列腺癌DU145细胞的促凋亡作用

目的探讨GRIM-19基因对前列腺癌DU145细胞的促凋亡作用,并分析相关机制.方法将构建成功的pGRIM-19重组质粒转染DU145细胞株,应用MTT法检测其对细胞增殖能力的影响,通过流式细胞术检测细胞周期及凋亡率,应用半定量RT-PCR检测GRIM-19及caspase-3 mRNA转录水平.结果流式细胞术结果显示:与对照组比较,pGRIM-19重组质粒明显抑制DU145细胞增殖,并使细胞周期发生改变,多数细胞抑制在G0/G1期,细胞凋亡率增加明显;通过RT-PCR电泳结果证实:pGRIM-19重组质粒明显促进GRIM-19的表达,同时激活caspase-3.结论重组质粒pGRIM-19可明显抑制DU145细胞增殖,并促进其凋亡,其凋亡的发生机制与激活caspase-3有关.     

Inhibition Mechanism of Emodin on Rabbit Vascular Smooth Muscle Cells Proliferation

ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＥｍｏｄｉｎｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓ[1] ,ｗｈｉｃｈｅｘｉｓｔｓｉｎｍａｎｙｍｅｄｉｃａｌｐｌａｎｔｓｓｕｃｈａｓｒａｄｉｘ ｐｏｌｙｇｏｎｉｍｕｌｔｉｆｌｏｒｉ,ｒｈｉｚｏｍａｐｏｌｙｇｏｎｉ,ｅｔｃ .Ｅｍｏｄｉｎｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｍｅｄｉｃｉｎｅ .Ｉｔｈａｓｍａｎｙｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｓｕｃｈａｓａｎｔｉ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ,ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇｂｌｏｏｄｌｉｐｉｄｓｃｏｎｔｅｎｔ ,ｅ…     

石蒜碱对人白血病细胞K562凋亡作用的研究

为了研究石蒜碱对人白血病细胞K562的凋亡作用,采用MTT法检测石蒜碱对K562细胞的细胞毒作用,数据表明石蒜碱对K562细胞的IC50为16.000μmol/L.流式细胞仪检测石蒜碱对K562细胞凋亡率的影响,数据表明给药剂量越大,其凋亡率越高,凋亡率与给药剂量呈依赖关系.激光共聚焦扫描显微镜检测石蒜碱对K562细胞膜电位的影响,数据表明随着给药剂量增大,膜电位逐渐降低,且成剂量依赖关系.结果显示石蒜碱能够诱导K562细胞凋亡并使其膜电位降低.     

重组绿豆胰蛋白酶抑制剂片段对肠癌细胞SW480迁移的影响

探讨重组胰蛋白酶抑制剂活性片段(LysGP33)的抗肠癌效应.大肠杆菌原核表达LysGP33活性片段,GST亲和层析柱对表达蛋白进行纯化.MTT比色和细胞划痕方法检测LysGP33活性片段对SW480细胞增殖和迁移的影响.结果表明:10 μmol/L LysGP33活性片段对SW480细胞的增殖活性无明显影响,但能够有效地抑制SW480细胞的迁移,并呈现时间依赖效应.绿豆胰蛋白酶抑制剂抑制了肠癌细胞的迁移,在抗肿瘤浸润和转移中具有一定的应用前景.     

依地福新抑制Jurkat细胞生长机制的研究

目的观察依地福新对体外培养的Jurkat细胞的生长抑制作用,并进一步探讨其作用机制。方法应用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞周期分布;Annexin V—FITC染色法检测细胞凋亡率。结果不同浓度依地福新处理Jurkat细胞24～96h后,细胞增殖显著受到抑制,并呈现浓度及时间依赖性;1．0μmol／L、5．0ymol／L、10．0μmol／L依地福新处理72h后,Jurkat细胞G0／G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著降低（P〈0．01）;各浓度组细胞凋亡率均显著增加（P〈0．01）。结论依地福新对Jurkat细胞具有生长抑制作用,其机制与阻滞细胞周期及诱导凋亡有关。