赤点石斑鱼群体遗传结构的微卫星分析

 赤点石斑鱼Epinephelus akaara作为我国南方海域的经济水产鱼类,已面临着种质资源匮乏,过度开发的局面。为了开展其保护生物学研究和促进养殖业的健康发展,开展了赤点石斑鱼群体的微卫星分析,对中国东南沿海7个赤点石斑鱼群体的遗传变异进行了研究,发现在不同渔场之间的种群存在着丰富的遗传多样性,并且具有明显的地理区域分布特征,这为赤点石斑鱼的种质资源研究和遗传育种提供了遗传学基础。     

赤点石斑鱼脑垂体超微结构的初步研究

 应用透射电镜技术观察不同时期的性成熟赤点石斑鱼（Epinephelus akaara）脑垂体的超微结构。结果表明,性成熟赤点石斑鱼脑垂体近椭圆形,由神经垂体和腺垂体两部分组成。神经垂体主要由神经纤维、脑垂体细胞和微血管组成。其中神经分泌纤维存在A(A1、A2)和B型神经分泌纤维。腺垂体中外侧部（PPD）腺细胞由嗜酸性的GH细胞和嗜碱性的TSH细胞及GTH细胞3类细胞构成。在不同的时期,GTH细胞内的分泌颗粒明显不同。     

赤点石斑鱼精子发生和形成的超微结构研究

用透射电镜研究了赤点石斑鱼Epinephelus妇精子发生和精子形成过程。结果表明，赤点石斑鱼精子发生经历了初级精原细胞、次级精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞阶段。精子细胞再经过精子形成过程成为精子。在初级精原细胞、次级精原细胞阶段，细胞核释放出拟染色体。拟染色体分布于精原细胞和前期Ⅰ的初级精母细胞的细胞质中。初级精母细胞减数分裂早期同源染色体配对明显可见，并形成联会复合体。精子细胞之间存在细胞联系（桥粒）。赤点石斑鱼成熟精子的特点是细胞核圆形，核内染色质致密，没有核泡（核空隙）。精子尾部细长，横切面为典型的“9＋2”轴丝结构。     

赤点石斑鱼♂与斜带石斑鱼♀杂交的初步研究

叙述了4批赤点石斑鱼♂与斜带石斑鱼♀杂交的初步结果。用人工授精的方法可以取得杂交受精卵,受精卵的受精率、孵化率和仔鱼的畸形率与雌鱼的卵质有关;杂交组与对照组的斜带石斑鱼相比,受精率、孵化率和畸形率无显著差异,但发育速度较快;杂交组仔鱼与对照组仔鱼在孵化后11 d内的生长速度差异不显著,但12 d后杂交组仔鱼增长显著;杂交组仔鱼的不投饵活力系数SAI和育苗成活率较对照组显著高,初步表现出杂交的优势。     

赤点石斑鱼LECT2基因的克隆与组织表达分析

基于LECT2的EST序列设计特异引物,采用RACE技术,成功克隆获得赤点石斑鱼LECT2 cDNA全序列,全长601 bp,包括了79 bp的3′UTR区、468 bp的开放阅读框(ORF)以及54 bp的5′UTR区,共编码155个氨基酸.通过与21个物种的氨基酸序列进行同源比对发现,所推导氨基酸序列与大黄鱼的相似性最高,为78%,与其他物种的相似性在40%～73%之间,表明LECT2氨基酸序列具有较高的保守性.基于LECT2基因的氨基酸序列构建的脊椎动物系统进化树与传统物种树基本吻合.同时,通过RT-PCR方法得出,LECT2在健康赤点石斑鱼多种组织中均有表达,肝组织表达量最高,感染哈维氏弧菌(Vibrio barveyi)后LECT2在脾、头肾、鳃等免疫器官中有较高表达量,而在肝脏中表达量上调最为显著,其结果证实了LECT2与赤点石斑鱼免疫应答相关,肝脏可能是赤点石斑鱼LCET2蛋白最主要的表达场所.     

赤点石斑鱼ICLP基因的克隆和序列分析

MHC class II invariant chain-like proteins(ICLP)因子与免疫反应密切相关,其参与对抗原的处理,保证多肽不被进一步降解为氨基酸.通过RACE反应获得赤点石斑鱼ICLP2cDNA全序列,全长1 837 bp,包括44 bp的5′UTR区,861 bp的开放阅读框以及932 bp的3′UTR区.编码286个氨基酸,推测的蛋白质分子量为31 878 u.对赤点石斑鱼10个组织的ICLP2基因进行PCR扩增和测序,结果表明赤点石斑鱼ICLP2基因的表达不存在组织特异性.此外,氨基酸序列同源比对的结果表明,赤点石斑鱼与其它16种脊椎动物ICLP2的相似度在25%～78%之间,与狼鲈和鳜鱼ICLP2因子的同源程度最高,分别为78%和74%.根据ICLP的氨基酸序列构建的脊椎动物系统进化树,表明了该分子的氨基酸序列可以作为研究鱼类物种间进化关系的良好指标.     

成都麻羊与7个山羊品种(群体)的AFLP遗传多样性研究

采用AFLP（Amplified Fragment Length Polymorphism AFLP）标记,研究成都麻羊与金堂黑山羊、乐至黑山羊、合江黑山羊、江安黑山羊、营山黑山羊、嘉陵黑山羊和白玉黑山羊等8个山羊品种（群体）,共261只个体的遗传多样性．结果表明,选用8对引物组合共获得174个标记,其中80个为多态性标记,标记多态频率为16．55％～38．62％,平均每对引物获得21．75条带．根据AFLP分析结果,用Shannon多样性指数公式计算获得,供试8个山羊品种（群体）的遗传多样性指数在0．0888～0．2289之间．其中营山黑山羊的遗传多样性指数最大（0．2289）,嘉陵黑山羊次之（0．2119）．白玉黑山羊最小（0．0888）、其余山羊品种（群体）介于其间．用Rogers遗传距离公式分析获得8个山羊品种（群体）间的遗传距离（DR）。根据DR值,采用Mega3．0软件以UPGMA法构建遗传系统树状图,聚类结果聚为三个大类,营山黑山羊和嘉陵黑山羊聚为一类,合江黑山羊和江安黑山羊为一类,这两类聚为一大类;成都麻羊和金堂黑山羊聚为一类后。再与乐至黑山羊聚为一大类;这两大类相聚后,再与单独为一大类的白玉黑山羊聚在一起．聚类结果与品种（群体）来源和生态地理分布相一致．AFLP标记很好的反映供试山羊品种（群体）的遗传差异和亲缘关系,是研究山羊遗传多样性一种理想的分子标记．     

饵料对赤点石斑鱼亲鱼产卵效果的影响

对赤点石斑鱼亲鱼分别投喂张网鲜杂鱼、冰冻鱿鱼、缢蛏,发现亲鱼出现不同的产卵效果.结果如下:投喂缢蛏的亲鱼其在平均每尾鱼产卵量,卵上浮率,受精率,孵化率均优于喂冰冻鱿鱼和张网鲜杂鱼,其中喂冰冻鱿鱼的次之,投喂张网鲜杂鱼最差.     

斜带石斑鱼、赤点石斑鱼RAPD和线粒体Cyt b基因序列变异分析

斜带石斑鱼和赤点石斑鱼为具有重要经济价值的海水鱼类。对这两种石斑鱼进行了随机扩增多态DNA(RAPD)和线粒体细胞色素b(Cyt b)基因序列变异分析。计算多态位点百分率、基因多样性和香农信息指数等遗传参数,以此评估种内遗传变异水平;通过统计变异位点、平均核苷酸差异数、核苷酸多样性以及种间平均每位点核苷酸替代数进行基因序列变异分析,并构建UPGMA系统树。结果表明:斜带石斑鱼的遗传多样性水平高于赤点石斑鱼,这可能与它们在种内特定遗传结构、分布范围大小、自然资源状况的差异有关;斜带石斑鱼和赤点石斑鱼之间检测到的种特异RAPD条带以及基因序列的变异,可作为种间分子鉴定标记。     

赤点石斑鱼MHC IA基因的克隆与表达多态性分析

采用RACE技术,成功克隆获得赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)非特异性免疫因子MHC IA基因的4个cDNA全序列,序列全长为1 680bp,含有3′UTR、启动子、多肽结合区(α1)、IGC区(α2)、跨膜区、胞质区和5′UTR区,编码区大小为1 074～1 080bp,共编码357～359个氨基酸,推测蛋白质分子质量约41.66ku.氨基酸序列分析发现赤点石斑鱼MHC IA分子具有经典MHC蛋白分子的空间结构,在多肽结合区则存在极其丰富的变异.利用Real time PCR和SSCP技术研究了赤点石斑鱼MHC IA的组织表达特异性和表达多态性,发现其在头肾、心、肝等12个组织器官中均能有效表达,在头肾,脾,胸腺等免疫组织表达量不仅高,表达多态性也异常丰富,而在与外界环境接触较多的鳃、肌肉、肠等组织表达较弱.此外,根据MHC IIB分子中相对保守的IGC区氨基酸序列构建了脊椎动物的系统进化树,也表明了该分子的IGC区氨基酸序列可以作为研究鱼类物种间进化关系的良好标记.     

自然产卵的赤点石斑鱼胚胎及仔鱼形态发育研究

介绍赤点石斑鱼（Epinephelus akaara)人工种苗繁殖生产中,以自然产出的受精卵为材料,进行孵化、培育,连续观察该种鱼的胚胎发育过程及仔鱼的形态,并对其作的详细描述。     

赤点石斑鱼4种同工酶的组织分布及基因位点分析

运用聚丙烯酰胺垂直梯度凝胶电泳法对赤点石斑鱼7组织(肌肉、肝脏、肾脏、心肌、脑、脾脏、性腺)的4种同工酶(EST、LDH、MDH、ME)进行了初步研究,并对4种酶的同工酶位点及酶谱表型进行了分析.结果表明:赤点石斑鱼的4种同工酶系统具有明显的组织特异性;EST由4个基因位点编码;LDH酶带多于典型的5条酶带;MDH具有线粒体型(m-MDH)和上清液型(s-MDH)两种类型;7种组织只检测到一种类型的ME.     

注射LHRHa、17-P及其它药物组合诱导赤点石斑鱼排精研究

在繁殖后期,给精子排放量少的雄性赤点石斑鱼Epinephelus akaara注射促黄体素释放激素类似物(LHRHa)或生理盐水(对照组),6 d后再次注射LHRHa,17α-羟基孕酮(17P),LHRHa 17P,LHRHa DOM和生理盐水,第7天重复注射,24 h后采集精液、血液.结果表明:所有的实验组均能提高精液量,其中LHRHa 17P、LHRHa DOM和17P处理组精液量增加显著(约为对照组的3～5倍),但精子密度没有减少、精子活力没换有降低.所有的实验组的血清11-KT含量降低,而血清T的含量增加,血清E2含量变化不大.精液世同11-KT含量水平之间呈负相关,同T的含量水平呈正相关.     

AFLP分子标记在鹀属遗传多样性分析中的初探

利用扩增片断长度多态性（AFLP）技术分析了鹀属(Emberiza)4种鹀(三道眉草鹀Emberi za cioides, 白头鹀Emberiza leucocephala, 白眉鹀Emberiza tristrami, 灰头鹀Emberiza spodocephala)基因组DNA的多态性. 在选取的39对引物中, 有11对能得到重复性好的多态性扩增条带, 每对引物扩增带数为27~76. 共得到535个标记位点, 其中429个为多态位点, 多态位点 比率达801%; 在UPGMA聚类关系图中, 4种鹀聚成一大类, 三道眉草鹀与白头鹀、 白眉鹀与灰头鹀分别两两相聚. 结果表明, AFLP可用于分析鹀属遗传多样性.     

厚壳桂种群在不同群落中的AFLP分析

使用AFLP (Amplifiedfragmentlengthpolymorphism)方法对常绿阔叶林中的演替顶级种厚壳桂 (Cryptocaryachinensis)在 2个不同群落中的遗传分化进行了研究 ,结果表明 ,种群的大部分遗传变异存在于种群中 ,而有 10 4 5%的遗传变异存在于种群间 .结果表明群落的差异不可忽视 .     

我国部分家鸭和野鸭遗传多样性及亲缘关系的AFLP分析

利用AFLP技术分析我国8种常见家鸭和2种野鸭基因组DNA的多态性，在选取的17对引物中，有9对能得到重复性好的多态性扩增条带．每对引物扩增带数在44-83之间．共得到513个标记位点，其中498个为多态位点，多态位点比率达97．1％；根据AFLP图谱计算了不同样品间的遗传距离（D）和相似性系数（GS）．家鸭品种间的遗传距离在0．331～0．589范围内，绿头鸭、斑嘴鸭与家鸭品种（系）间的遗传距离分别在0．298～0．520和0．316～0．522之间．方差分析表明两组数据不存在显著差异（p〉0．05），由此得知绿头鸭和斑嘴鸭在家鸭品种的形成过程中都作出了贡献．并根据D值绘制了它们的聚类图谱．