lL-1α在IgAN肾组织中的表达与疾病进展的关系

目的探讨IL-1α在IgAN肾组织中的表达与疾病进展的关系.方法对36例经光镜、免疫荧光、电镜等病理诊断为IgAN的肾组织进行了IL-1α免疫组织化学检测.结果IL-1α主要表达于肾小管上皮细胞内(近曲小管31/36;远曲小管25/36).在肾小球的毛细血管腔内侧(15/36)和肾小球靠球囊壁的肾小囊腔(10/36)亦可见IL-1α的表达.在肾小球系膜区无明显增宽时,IL-1α的表达率高.结论IL-1α在IgAN肾组织内主要位于肾小管上皮细胞内.在IgAN的进展过程中,IL-1α的表达率增强,此期如选用IL-1α受体拮抗剂进行治疗,可控制IgAN的进展.     

可溶性血管内皮生长因子受体1在IgAN的研究进展

可溶性血管内皮生长因子受体1（soluble fms-like tyrosine kinase 1,sFlt-1）是已证实的内皮细胞损伤的分子标志物.sFlt-1在循环中结合VEGF（血管内皮生长因子）而调节其功能,拮抗VEGF的营养功能而导致内皮细胞损伤.有研究发现在慢性肾脏疾病（CKD ）患者中sFlt-1有明显升高,过量的sFlt-1与CKD内皮功能障碍有关.而IgAN是我国最常见的CKD,目前国内外缺乏关于sFlt-1在IgAN中的相关研究.sFlt-1与IgAN临床病理之间相关性的研究是一个全新的研究方向.研究sFlt-1与CKD特别是发病率很高的IgAN的相关性并应用其研究成果,对IgAN的诊断、治疗和判断预后是一个新的思路.     

新型雌激素受体ERα36与窖蛋白-1在皮肤组织细胞中的表达和分布特征

采用蛋白免疫印迹杂交和免疫细胞荧光等方法首次研究了新型雌激素受体ERα36和窖蛋白-1（Caveolin-1）在大鼠皮肤组织中以及角质细胞系中的表达,探讨了二者的表达关系和分布特征.结果发现：（1）大鼠皮肤中有ERα36的表达,其表达的量与Caveolin-1的表达量呈负相关,且存在性别差异和部位差异;（2）表皮角质细胞中有ERα36的表达,主要分布在细胞膜上,且与Caveolin-1共定位.提示新型雌激素受体ERα36存在于皮肤细胞中,且可能参与Caveolin-1介导的雌激素信号转导,在雌激素治疗皮肤疾病过程中发挥一定作用.     

HIF-1α表达对人乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响

为研究缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在人乳腺癌细胞中的表达及其与乳腺癌细胞侵袭转移能力的相关性,采用在培养基中加入CoCl2模拟化学缺氧培养细胞,RT—PCR和Western-blot、免疫细胞化学检测HIF-1α在人乳腺癌细胞MCF-7和MDA—MB-231中mRNA水平和蛋白质水平在缺氧前后的表达差异,及Millicell小室人工重组基底膜侵袭迁移实验检测缺氧前后两株细胞侵袭迁移能力的改变．结果发现：缺氧后,两株细胞的HIF-1α mRNA水平和蛋白质水平均较缺氧前增高（p〈0．01）,MDA—MB-231和MCF-7之间有显著差异（p〈0．01）;MDA—MB-231的侵袭转移能力明显增加（p〈0．01）,MCF-7的侵袭转移能力略有增加（p〈0．05）．表明缺氧上调HIF-1α转录及蛋白表达,进而促进乳腺癌细胞的侵袭转移能力．     

ICAM-1,TNF-α在原发性肝癌中表达的相关性分析

采用酶联免疫吸附试验检测原发性肝癌及正常体检人群各56例血清中ICAM-1和TNF-α的表达,免疫组化方法检测56例原发性肝癌组织标本的ICAM-1和TNF-α蛋白的表达.结果显示ICAM-1和TNF-α在原发性肝癌血清中存在异常表达(p<0.05),不同组织分型原发性肝癌患者血清中ICAM-1水平、TNF-α水平无差异(p>0.05),原发性肝癌组织中ICAM-1和TNF-α蛋白的表达呈正相关(r=0.216,p=0.000).ICAM-1和TNF-α的表达可能是原发性肝癌病理进程中的普遍现象,检测原发性肝癌患者血清ICAM-1和TNF-α含量,可为患者个性化治疗提供实验室依据,改善患者的预后.     

RT-PCR法检测SMMC-7721人肝癌细胞α5 β1整合蛋白mRNA的表达

整合蛋白α5β1是一类存在于细胞表面的细胞粘附分子,在肝癌的发生发展和演进中起着重要的作用.研究了快速定量检测整合蛋白α5β1mRNA表达的RT-PCR方法,结果表明在PCR反应体系中加入25ng到200ngmRNA的逆转录产物呈较好的线性关系,并以此为反应条件测定pcDNA3-α5,pcDNA3-β1质粒共转染或单转染的α5β1.6-7721,α5.3-7721,β1.6-7721细胞株mRNA的表达,表明经pcDNA3-α5,pcDNA3-β1质粒感染后人肝癌细胞株SMMC7721细胞中整合蛋白α5β1的表达有较大幅度的提高,而且α5,β1亚基间可能存在相互的诱导作用.     

免疫组化方法研究胸腺素α1在小鼠肉瘤S180细胞中的表达

探讨了胸腺素α1在小鼠S180肉瘤中的表达及其临床意义．以小鼠肉瘤S180组织和正常小鼠组织为材料，福马林固定和石蜡包埋．运用兔抗胸腺素α1多克隆抗体，按常规免疫组织化学方法检测接种在小鼠皮下的小鼠肉瘤组织以及正常小鼠皮下肌肉组织细胞中胸腺素α1的表达状况．研究结果发现胸腺素α1定位表达在小鼠肉瘤组织细胞的胞浆和细胞核中。免疫组化呈现强阳性．而正常组织细胞内基本无显色，呈阴性．试验结果表明：胸腺素α1在恶性肿瘤细胞小鼠肉瘤组织细胞中高表达．而正常小鼠组织则低表达或不表达．细胞内胸腺素α1蛋白的高表达与肿瘤具有明显相关性，该研究成果可能使胸腺素α1作为一个新的和有价值的肿瘤标记物在临床诊断中得到应用，也为进一步探索胸腺素α1与肿瘤之间相互关系的分子机理研究奠定基础，并通过抑制胸腺素α1这条途径达到控制肿瘤生长的效果．     

猪α干扰素在BHK-21细胞中的表达与生物活性分析

为了构建猪α-干扰素(PoIFN-α)的真核表达系统,鉴定其生物学活性,分离猪的外周血淋巴细胞,提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增猪α-干扰素基因序列,克隆至pcDNA3.1(+)载体,并转染BHK-21细胞。通过G418筛选获得稳定转染的细胞株,采用real-time PCR及ELISA测定PoIFN-α基因在BHK-21细胞内的表达,利用淋巴细胞增值试验(MTT)检测表达蛋白的生物学活性。结果表明:稳定整合PoIFN-α基因的BHK-21细胞系其PoIFN-αmRNA的转录效率比阴性对照组提高1.52倍,蛋白表达量显著提高1.35倍。MTT试验表明真核表达PoIFN-α淋巴细胞增值活性与阴性对照组相比差异显著(P<0.01),表明BHK-21细胞表达的PoIFN-α具有良好的生物学活性,为开发新型抗病毒制剂奠定基础。     

白细胞介素-1的结构、来源、分布、功能及其与疾病的关系

白细胞介素-1(IL-1)不仅作为一种重要的细胞因子,是体内调节免疫和炎症反应的中心介质,而且它也作为神经递质或生长因子参与了机体多个系统的病理生理活动,其生物学作用非常广泛.近年来,随着对神经系统、免疫系统和内分泌系统之间相互作用研究的日益深入,IL-1在各系统中的作用与机制也得到了相应的证实,并为一些临床疾病的诊治提供了有力依据.文章针对IL-1作为脑源性白介素在中枢神经系统的病理生理功能进行了研究.     

HIF-1α对宫颈癌细胞迁移能力的影响

将表达野生型HIF-1α(fl HIF-1α)和抑制性HIF-1α(dn HIF-1α)的重组质粒pcDNA3.1-fl HIF-1α和pcDNA3.1dn HIF-1α转染入SiHa细胞中表达,采用免疫细胞化学法和Western blot检测重组质粒转染SiHa细胞后其HIF-1α与CXCR4表达水平的变化;划痕试验测定细胞迁移情况,同时与pcDNA3.1组和未转染组进行比较.结果重组质粒pcDNA3.1fl HIF-1α和pcDNA3.1dn HIF-1α转染SiHa细胞后,pcDNA3.1-fl HIF-1α转染组(fl组)HIF-1α蛋白表达水平与其他三组比显著增高,差异具有统计学意义(P＜0.05),而pcDNA3.1dn HIF-1α转染组(dn组)与pcDNA3.1组和未转染组相比无统计学差异(P＞0.05).但fl组和dn组其CXCR4蛋白水平的表达与pcDNA3.1组和未转染组相比均有较明显的差异(P＜0.05).fl组迁移能力略高于对照组(P＞0.05),dn组迁移能力明显低于对照组(P＜0.05).HIF-1α能提高CXCR4蛋白的表达,从而加快SiHa细胞的迁移;而dn HIF-1α的作用正好相反.     

利用组织芯片检测乳腺癌组织中Ⅲ型胶原α1多肽链表达的研究

为了研究Ⅲ型胶原蛋白α1多肽链的表达与浸润性导管癌之间的关系,利用中密度组织芯片免疫组化染色结合组织病理检测了癌细胞和间质细胞中该蛋白质的表达水平.比较了正常乳腺组织和分化程度不同的浸润性导管癌之间蛋白表达水平的差异,得到如下结果:①Ⅲ型胶原蛋白α1多肽链主要在间质细胞中表达.②Ⅲ型胶原蛋白α1多肽链的表达与癌细胞的分化程度呈一定程度的正相关.结合芯片标本和临床病理资料分析发现:③Ⅲ型胶原蛋白α1多肽链的表达与癌细胞雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的表达无明显相关性.④Ⅲ型胶原α1多肽链的表达与癌细胞淋巴结转移无明显的相关性.     

IL-1α体外诱导血管内皮细胞衰老及其机理初步探讨

IL-1α是一种重要的促炎性细胞因子,它具有广泛的生物学效应,作用于机体多个系统,可参与免疫调节,介导炎症反应及致热作用;可促进一些细胞增殖而抑制另一些细胞增殖.研究IL-1α长期刺激血管内皮细胞的效应,发现与衰老相关的β-半乳糖苷酶染色反应阳性;形态学上细胞变得扁平、不规则,细胞质胀大,有些细胞出现双核现象;流式细胞术检测结果表明83.18%细胞停滞在G0-G1期,S期细胞减少;利用彗星电泳检测到被诱导衰老的内皮细胞DNA严重损伤.对IL-1α诱导内皮细胞衰老机理的探讨发现被诱导的衰老细胞内活性氧水平升高,脂质过氧化物增多;而抗氧化酶活力下降且总的抗氧化能力显著下降,这就造成了细胞损伤并诱发导致了细胞的退行性变化,即衰老的发生.此研究为衰老的炎症假说在细胞水平提供了直接的证据,并为抗衰老及其相关疾病的防治提供了理论基础和实验依据.     

大鼠急性心肌缺血死亡后心肌HIF-1α、Egr-1 mRNA的表达

目的研究大鼠心肌缺血死亡后不同时间点HIF-1α及Egr-1mRNA的表达规律,为因急性心肌缺血死亡的法医学诊断提供客观依据。方法建立SD大鼠急性心肌缺血模型。随机将大鼠分为正常对照组、假手术组、急性心肌缺血试验组。采用免疫组织化学、RT—PCR死亡不同时间点大鼠心肌点HIF-1α及Egr-1mRNA的表达规律。结果大鼠心肌结扎1h缺血心肌中HIF-1α及Egr-1mRNA明显表达,随着死后时间的延长,表达降低,至术后96h仍可测到;正常对照组与假手术组均未测到HIF—1α及Egr-1mRNA表达。结论HIF—1α及Egr-1mRNA可作为诊断因急性心肌缺血死亡的敏感指标。     

人超氧化物歧化酶-胸腺素α1融合蛋白在毕赤酵母中的表达与活性检测

为了增强胸腺素α1(Thyα1)的稳定性和免疫功能,采用胸腺素α1与人超氧化物歧化酶(hSOD)融合的策略,构建了6HishSOD-(G4S)1-Thyα1和6His-hSOD-(G4S)2-Thyα1 2个融合基因,并分别在毕赤酵母中实现了高水平表达.重组表达的融合蛋白经过Ni-NTA亲和层析纯化后,纯度达到80%以...     

人良性前列腺增生组织中基底细胞去分化与雌激素受体α表达的关系

雌激素效应增强在良性前列腺增生(BPH)发生发展中发挥了重要作用.收集20例BPH和10例正常前列腺(NP)组织标本,采用免疫组化染色和免疫荧光方法研究良性前列腺增生组织中上皮细胞角蛋白(CK)、非肌型肌球蛋白(NMMHC)、增殖细胞核抗原(PCNA)和雌激素受体α(ERα)的表达及其定位关系.结果表明,与NP相比,在BPH组织基底细胞中与干/祖细胞相关的CK14和CK5以及与去分化相关的NMMHC和ERα的表达明显增加;而且CK14、NMMHC和ERα有共定位的关系.BPH组织中部分基底细胞去分化为干性细胞;雌激素效应增加使基底细胞发生去分化是BPH发生和发展的重要机制.     

GST-SDF-1α融合蛋白的原核表达及纯化

构建融合重组表达载体并对其进行诱导表达蛋白以获得大量重组融合蛋白。通过PCR方法扩增出小鼠SDF-1α基因,克隆入pMD18T载体中,进行测序分析。将该基因亚克隆入原核表达载体pGEX-4T11中GST的下游构建重组质粒pGEX-4T1-SDF-1α,转化受态细胞BL21中,经IPTG诱导表达重组融合蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE电泳检测分析。在约Mr36×103处出现一新生的蛋白条带。经灰度扫描检测,表达量约占菌体总蛋白的30%,纯化后得到了目的蛋白。成功克隆了小鼠的SDF-1α基因,并纯化融合基因GST-SDF-1α的原核表达产物。     

胸腺肽α1在毕赤酵母中的表达及纯化

采用基因工程菌发酵制备胸腺肽α1(Tα1).将人工合成的Tα1单体基因,连接到pPIC9K质粒上,构建表达载体pPIC9K-Tα1,转化毕赤酵母GS115,重组菌经甲醇诱导表达,取发酵液上清,过DEAE52、Sephade-xG-25柱纯化后获得目的蛋白.Tricine-SDS-PAGE和HPLC结果表明Tα1基因在毕赤酵母中得以表达,表达量为4.8mg/L.     

钠泵α1亚单位基因突变与哈萨克族人原发性高血压的关系

采用整群抽样的方法选择哈萨克族高血压患者117例和正常对照90例,提取入选对象白细胞基因组DNA,利用PCR-SSCP技术研究哈萨克族人钠泵α1基因的Ouabain结合部位569-764位核苷酸区域是否存在变异,以及变异与哈萨克族人高血压的关系。针对哈萨克族人钠泵α1基因的Ouabain结合部位569- 764位核苷酸区域扩增的PCR产物仅发现单一类型的SSCP带型,说明哈萨克族人钠泵α1基因的569-764 位核苷酸区域可能不存在基因突变,或即使存在某种突变,其几率也极低。     

山茱萸作用鼠IgA肾病的肾组织差异蛋白质谱

通过小鼠肾组织的双向电泳(2DE),发现单味中药山茱萸醇提物(FCE)作用鼠IgA肾病的肾组织差异蛋白质表达谱发生显著变化.比较IgA肾病和正常小鼠肾组织的2DE图,在1267个蛋白点中有664个匹配蛋白点,其中表达量差异在2倍以上的有263个,另有3种蛋白在IgA肾病肾组织中未被表达和1种蛋白特异表达.比较FCE服用前后鼠IgA肾病肾组织的2DE图发现,在原先差异表达的263个蛋白质中,用药后有147个显著地恢复正常表达,在IgA肾病3种未表达和1种特异表达的蛋白都恢复了正常表达,同时用药后新出现1种特异表达蛋白.该方法提示,这些差异和特异表达的蛋白质可能是IgA肾病和FCE药物作用的靶蛋白,FCE能有效地纠正小鼠IgA肾病可能是通过影响这些靶蛋白而起作用的.     

PPARγ辅助活化因子1α及其在代谢调节中的作用

PPARγ辅助活化因子1α属于PGC-1转录辅助活化因子家族中的一员,在多种组织中特异性地参与代谢途径调节;它在葡萄糖、脂肪代谢及维持组织内能量稳态等方面发挥重要作用,并与肥胖、糖尿病、心肌病等疾病密切相关。