表达cryIA/gna双价抗虫基因烟草兼抗棉铃虫和蚜虫

利用人工合成的、密码子优化后的雪花莲凝集素（ＧＮＡ）基因,与人工合成的ＣＦＭ ｃｒｙＩＡ构建了双价抗虫基因植物高效表达载体。通过根癌农杆菌介导转化烟草,获得２８株卡那酶素抗性植株,经ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹检测,证实了双价抗虫基因在烟草基因组中的整合,转基因烟草杀棉铃虫试验表明,４０％转基因烟草植株对棉铃虫具有高抗性;Ｂｔ杀虫蛋白ＥＬＩＳＡ检测获得与虫试较一致结果,抗虫性较强株Ｋ１１号ＣｒｙＩ     

兔防御素NP-1基因在转基因烟草中的表达及其对烟草青枯病的抗性研究

从兔子肝脏细胞中扩增到防御素ＮＰ－１成熟的编码序列,长约２００ｂｐ。将此片段插入到切除了ＧＵＳ编码序列的ｐＢＩ１２１质粒载体中,构建成植物表达载体ＰＢＩＣ－３５ＳＮＰ１。     

棉铃虫和烟青虫取食诱导的烟草挥发物吸引棉铃虫齿唇姬蜂

利用风洞测试了棉铃虫齿唇姬蜂对棉铃虫和烟青虫取食诱导烟草挥发物的行为反应, 并通过GC-MS对挥发物组分进行了定性和定量分析. 行为测试结果表明, 被棉铃虫和烟青虫取食的烟草对棉铃虫齿唇姬蜂有很强的吸引作用. 机械损伤的烟草, 用2种昆虫的反吐液或用蒸馏水处理伤口, 都比未受损伤的烟草能够吸引更多的寄生蜂. GC-MS分析发现, 未受损伤烟草的挥发物中只有4种成分, 而棉铃虫和烟青虫取食, 或机械损伤处理诱导烟草释放出13种共同的化合物. 此外, 化合物b-蒎烯仅在棉铃虫取食诱导的烟草挥发物中出现, 顺-3-已烯醛只被棉铃虫和烟青虫取食诱导而不被机械损伤诱导, 而乙酸已酯只在机械损伤处理烟草释放的挥发物中可检测到. 2种昆虫取食烟草释放的挥发物总量彼此没有差异, 但均高于未受损伤烟草释放的挥发物总量. 机械损伤并用2种昆虫的反吐液或蒸馏水处理烟草, 其释放的挥发物总量相似, 且均高于未受损伤烟草释放的挥发物总量. 不同处理间单个化合物的释放量也有差别, 但以昆虫取食处理与机械损伤处理间的差别较大, 而2种昆虫取食之间, 以及机械损伤处理之间的差别较小.     

转Bt 基因抗虫棉品种的推广利用与棉铃虫抗性的治理

我国现有３类转Ｂｔ基因抗虫棉种质材料：９４－２４,中心９４和Ｒ１９,它地棉铃虫初孵幼虫都表现出显著的抗虫性,用它们作亲本材料都已培育出转基因抗虫棉的品种或杂交种,这三类抗虫棉在不同生育期抗虫性表现程度不同,苗期（１０片主茎叶以下）吉处发孵死亡率一般达１００％,生育后期抗虫性则有所下降,Ｂｔ基因转发方棉花后能稳定遗传给后代,不同世代的抗虫性表现基本一致,通过室内汰选,烟芽夜蛾等害虫很容易对Ｂｔ杀虫     

人工改造的Cry1Ac和Cry1Ie基因在烟草中共表达对棉铃虫有更好的杀虫活性

利用叶盘转化法获得了携带Cry1Ac, Cry1Ie和同时携带这两个基因的3种类型转基因烟草. 利用ELISA法测定转基因烟草叶片中Bt蛋白含量, 在携带两种Bt基因的转基因烟草中, Cry1Ac和Cry1Ie蛋白分别占总蛋白的0.173%和0.131%. 在携带单个基因的烟草中, Cry1Ac和Cry1Ie蛋白的含量分别为0.182% 和0.124%. 分别用野生型棉铃虫(Helicoverpa armigera)和Cry1Ac抗性棉铃虫的初孵幼虫在这3种类型的转基因烟草叶片上进行虫试, 并以未转基因烟草为负对照. 实验结果表明, 携带Cry1Ie基因的转基因烟草对这两种棉铃虫都有杀虫活性, 而携带Cry1Ac基因的转基因烟草仅对野生型棉铃虫有抗性, 携带两种Bt基因的烟草比仅含其中一个基因的烟草对这两种棉铃虫均有更好的杀虫效果. 该结果表明, 这两种Bt基因在转基因烟草中能够协同作用, 提高了烟草对害虫的杀虫效果. 同时, 转入两个Bt杀虫基因有可能成为延缓农业害虫对转基因作物产生抗性的新途径.     

我国现有的3类转Bt基因抗虫棉品系棉铃虫抗性的遗传分析

我国主有要３类转Ｂｔ基因抗虫棉,都已培育出品种或杂交种并在生产上推广利用。遗传分析表明,山西９４－２４、中心９４和Ｒ１９３类转Ｂｔ基因抗虫棉亲本品系对棉铃虫的抗性各由－对显性主基因控制,它们的抗虫基因非等位。山西９４－２４与Ｒ１９的Ｂｔ基因可能整合在陆地棉品种的同一梁色体上,表现为连锁遗传,山西９４－２４、中心９４、Ｒ１９３个抗虫棉品系间互交杂种抗虫性与亲本类似,表明抗虫基因在杂合状态下无共抑制现     

豇豆胰蛋白酶抑制剂抗虫转基因烟草的获得

主要农作物、园艺作物以及林木由于受到多种害虫的严重危害,造成巨大的经济损失。即使每年喷洒大量农药,也不能得到有效控制。害虫易产生抗性,而且造成严重的环境污染。因此,培育广谱抗虫的作物有重要的现实意义。植物蛋白酶抑制剂是一类天然的抗虫物质。与     

转甜菜碱醛脱氢酶基因烟草叶片中抗氧化酶活性增高

转甜菜碱醛脱氢酶（ＢＡＤＨ）基因烟草叶片超氧物歧化酶（ＳＯＤ）的活性比对照增加约３６％,过氧化氢酶（Ｃａｔ）和过氧化物酶（ＰＯＤ）活性分别提高约的６２％和８８％,定位于叶绿体中的抗坏血酸－谷胱甘肽途径的抗坏血酸过氧化物酶（ＡｓＡＰＯＤ）,脱氢抗坏血酸还原酶（ＤＡｓＡＲ）和谷胱甘肽还原酶（ＧＲ）活性分别提高６７．７％,４７．９％和３８．８％,表明由ＳＯＤ催化阴离子自由基Ｏ２所产生的活性氧Ｈ２Ｏ２能被     

merB基因的序列修饰及转基因烟草对有机汞的高抗作用

由于汞污染对环境和生物的严重危害性，汞污染的治理越来越受到人们的重视。页植物修复具有经济、高效等优点，有望成为汞污染土壤修复的主要手段。通过植物基因工程方法，将细菌中催化甲基汞转变为离子汞的merB基因进行序列改造，通过农杆菌的介导转入烟草，Southern杂交检测证明得到转基因植株。转基因植株后代对有机汞表现较强的抗性，在水培条件下，有些转基因株系抗2．5μmol/L的醛酸苯汞（PMA），而0．1μmol/L的PMA则杀死野生型烟草的幼苗。随着处理浓度的升高，PMA对幼苗生长的抑制作用逐渐增强。此项研究为培育抗汞烟草，修复汞污染的土壤进行了有益的探索。     

兔防御素NP-1基因在转基因烟草中的表达及其对烟草青枯病的抗性研究

从兔子肝脏细胞中扩增到防御素NP_1成熟肽的编码序列 ,长约 2 0 0bp .将此片段插入到切除了GUS编码序列的pBI1 2 1质粒载体中 ,构建成植物表达载体 pBIC_35SNP1 .通过根癌农杆菌介导的叶盘法 ,将pBIC_35SNP1导入烟草细胞中 ,并获得了经Southern杂交证实的转基因植株 .进一步的Northern杂交证明防御素NP_1基因能够在转基因植株中正常转录 .抗菌实验表明转基因植株增强了对烟草青枯病的抗性并延缓了烟草青枯病的发病     

转mtlD/gutD 双价基因水稻的耐盐性

Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交和酶活性检测试验表明,通过农杆菌介导法已经把细菌１－磷酸甘露醇脱氢酶（ｍｔｌＤ）基因和６－磷酸山梨醇脱氢酶（ｇｕｔＤ）基因同时整合进水稻基因组并且在转基因水稻中得到表达．气相色谱分析证明转基因水稻合成并积累了甘露醇和山梨醇．与未转基因对照相比,转基因植株耐盐性明显提高．     

细胞外钙调素对转基因烟草悬浮细胞rbcS- GUS基因表达的促进作用

以转ｒｂｃＳ－ＧＵＳ报告基因的烟草悬浮培养细胞为材料,研究了细胞外钙调素对ｒｂｃＳ基因表达的影响,实验证实培养介质中钙调素浓度与ｒｂｃＳ－ＧＵＳ基因表达呈现一个在细胞培养初期较低、随后增高、然后再降低的动态变化;而且培养介质中钙调素浓度变化在前,ｒｂｃＳ－ＧＵＳ基因表达变化在后,介质中加入外源纯化钙调素可以促进ｒｂｃＳ－ＧＵＳ基因表达,而且这种促进作用具有浓度剂化在后,介质中加入外源纯化钙调素可以     

转基因烟草分析COP1亚细胞定位及各结构域的功能

植物体内存在着非常精巧的光信号调节系统以适应外界光环境的变化，COP1蛋白是这个调节系统中介导光信号转导的一个关键因子。利用从豌豆克隆的COP1的cDNA，根据豌豆COP1的蛋白结构设计了4种不同的结构域基因片段，构建了这4个片段及COP1全基因与GFP融合基因的植物表达载体，通过根癌农杆菌分别转化烟草。利用由原核表达的GFP－COP1融合蛋白制备的抗体和GFP基因片段制成的放射性探针，通过Southern和免疫印迹实验证实各种外源融合基因在转基因烟草中均获得了组成型的变化，发现：（1）烟草内源COP1的分子量为76ku，在各器官组成型存在，光照条件对其含量影响不大；（2）COP1的细胞核定位域在其核－质分配的调节中起着关键作用。含有核定位域的目的蛋白在叶表皮细胞中的亚细胞定位受光调节，而在根细胞则组成型定位于细胞中；（3）Couiled-coil域对COP1的功能十分重要，而锌指结构域起辅助作用；（4）WD－40重复结构域起着关键作用，但单独的WD－40重复结构域不影响光形态发生；（5）过量表达COP1不仅导致烟草地上部分光形态发生受抑制，而且还导致短的簇生根发生。相反，过量表达不含WD－40重复结构域的COP1则促进地上部分光形态发生，并导致根部伸长，但无侧根。COP1－COP1相互作用不仅可以在细胞核中发生，而且可在细胞质中发生。这一实验系统为今后深入研究COP1的结构与功能打下了一个良好的基础。     

中间脉孢霉谷氨酸脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌和烟草中的表达

用谷氨酸脱氢酶（GDH）提高植物氮肥利用率是国际上生物工程研究的热点之一,通过RT－PCR方法克隆了真菌中间脉孢霉（Neurospora intermedia,简称Ni),好食脉孢霉（N.sitophila),粗糙脉孢霉（N.crassa)的gdh基因,进行序列测定,前两种gdh基因的序列为首次报道。分别将上述gdh基因克隆入pET30a质粒在大肠杆菌中表达,纯化后进行酶活性及米氏常数（Km)测定,结果发现大肠杆菌表达的Ni-GDH具有更高的酶活性,其Km值在0．3－0．45mmol/L左右。选择Ni-GDH基因转化烟草,发现它能促进烟草在低氮水平下的生长。     

植物抗虫基因工程中大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制基因的研究

主要农作物、林木以及园艺植物由于受到多种害虫的危害,造成了较大的经济与营养损失.目前,普遍采用化学杀虫剂控制害虫的危害.这在一定程度上破坏了生态平衡,且造成了环境污染.另一个更为严重的问题是,由于长期施放农药,害虫已逐步对其产生抗性,有些害虫已达到很难用药物控制的程度.因此,利用植物抗性基因工程培育广谱高抗虫     

转芪合酶基因植物中三羟基反式芪的功能

应用RT－PCR方法,从葡萄组织中克隆了两个芪合酶基因的编码区（1．19kb)。在大肠杆菌中能特异表达42ku的蛋白质,其分子量与芪合酶大小一致,并用其制备了兔抗血清。利用pBin438构建了植物组成型表达载体,经农杆菌介导获得转基因烟草植株。PCR,Southern blot,Western blot和RT－PCR分析证明该基因已整合到烟草的染色体中,并正常转录和特异表达。薄层层析和HPLC的结果进一步判断表达的芪合酶在烟草中可催化其底物合成3,4′,5－三羟基反式芪（trans-resveratrol),从转基因烟草中纯化的3,4′,5－三羟基反式芪能使人乳腺癌细胞停留在Go,G1期的细胞数增加。     

3价转病毒外壳蛋白基因马铃薯的获得

马铃薯在全世界广泛种植,既是重要的粮食作物,又可作蔬菜,其世界年总产量仅次于小麦、水稻和玉米.马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯X病毒(PVX)和马铃薯卷叶病毒(PLRV)引起的病害是造成我国马铃薯退化的重要原因,严重危害马铃薯生产.尤其是2种甚至3种病毒混合侵染带来的损失远大于各病毒单独侵染.国外科学家的研究表明,表达病毒外壳蛋白(CP)基因的转基因马铃薯能显著延缓该病毒病害症状的发展并减轻其危害程度.美国已获得同时表达PVX和PVY CP基因的双价转基因马铃薯,其中1个转基因株系对这两种病毒的混合侵染表现高抗.国际上还未见转3基因抗病毒马铃薯的报道.