白腐菌产漆酶的发酵条件研究

漆酶(E.C.1.10.3.2)是一类含铜的氧化还原酶,其可以催化对苯二酚(也叫氢醌)氧化生成对苯醌,也常被称为对苯二酚氧化酶。漆酶一般存在于真菌和植物中,由于具有较高的稳定性和较好的底物专一性,在印染和环境有机毒性化合物的降解、专用生物传感器的构建、以及造纸领域有机废弃物的生物加工利用等方面具有实际工业应用。考察了白腐菌的培养和产漆酶条件,对白腐菌产漆酶的培养条件和培养基进行了优选。结果显示,以小麦皮为碳源,硫酸铵和尿素为氮源,白腐菌生长产酶的适宜培养温度为28℃,pH值为3.5~6.0,培养基的C/N比以20合适。当培养基中添加一定的木质素沉淀物和葡萄糖时对白腐菌液体发酵产漆酶具有明显的促进作用,菌体发酵液中加入10 g/L的葡萄糖、6 g/L木质素时发酵产漆酶的活力达到最大值。     

白腐菌F8的分离及降解木质素能力研究

从松林土壤中分离得到一株白腐菌F8,经Bavendamn氏显色反应证实其能产生漆酶.在液体培养条件下,该菌株能产生木质素过氧化物酶、锰过氧化物酶和漆酶.其降解木质素的最佳条件为100 r/min、33℃、pH5.5、接种量5%,在此条件下,木质素降解率达71.98%.     

白腐菌产漆酶培养条件的研究

针对白腐菌独特的降解能力和漆酶在环境治理与工业方面的应用，对杂色云芝菌产漆酶的培养条件进行优化，得出较好的培养基的组成：麦芽糖质量浓度为1．8g/L，酒石酸铵质量浓度为0．84g／L，大量元素体积分数为100mL/L，微量元素体积分数为25mL/L，VB1质量为100μg，吐温80质量浓度为0．05％，最佳诱导剂是二甲苯胺，表面活性剂是吐温80，漆酶催化活性最适的pH为3．6。     

天然浸出液对自分离白腐真菌产木质素降解酶的影响

为提高木质素降解酶产量,使其应用于环境工程领域,在T ien&K irk培养基的基础上,添加玉米芯、柏树、桃树、玉兰和连翘等浸出液,在空气环境中,对白腐真菌F 2进行自由悬浮振荡培养。白腐真菌F 2能够大量产木质素过氧化物酶(L iP)和锰过氧化物酶(M nP)。添加天然浸出液后,L iP最高酶活为122.6 u/L,M nP最高酶活为135.4 u/L。在基础T ien&K irk培养基中培养则未检测出这两种酶的活性。在不同地区采集到的天然浸出液对两种酶的影响也不一样。结果表明,保持白腐真菌生长条件与天然生长条件相似,加入天然浸出液,可以促进产酶。     

白腐真菌锰过氧化物酶的动力学研究

进行了白腐真菌锰过氧化物酶处理苯胺溶液的动力学研究,导出了酶降解动力学模型。通过测定不同苯胺质量浓度溶液吸光度值,确定苯胺溶液标准曲线,建立苯胺质量浓度与吸光度值的关系方程式。统计分析表明:米氏方程当作模拟模型,应用Lineweaver-Burk法进行数学回归分析,对锰过氧化物酶进行反应动力学研究是可行的。通过数学处理,确定了锰过氧化物酶重要的动力学特征参数:Vm=0.3527mg/L·min,Km=2.7696mg/L。为白腐菌的工业应用提供了重要依据。     

白腐菌的筛选及对松木片木素和树脂的脱除

为评价从野外筛选得到的白腐菌对造纸原料马尾松的木素降解和树脂脱除能力,将带菌样本经室内平板初筛及平板变色反应复筛,得到了20株纯白腐菌菌株,并对变色系数最小的一株菌株G进行松木片固体接种试验,测定3、5、7、9天后松木片的木素、树脂降解情况.结果表明,随着培养时间的延长,松木片失重率逐渐增大,K lason木素和总木素含量逐渐降低,二氯甲烷抽提物脱除率逐渐增大.表面扫描电镜(SEM)照片表明,接种白腐菌的木片细胞壁上产生了明显的腐朽沟槽现象;切片断面显微结构显示,在细胞壁及胞间层有菌丝出现.     

假单孢菌PKE117木素过氧化物酶的酶学性质及基因克隆

对纯化得到的假单孢菌PKE117的胞外木素过氧化物酶的酶学性质进行了初步研究,发现其最适pH为5.0,最适温度为30℃,以藜芦醇为底物,在25℃,pH3.0的琥珀酸钠缓冲液中与底物反应时的Km值为(0.277±0.0008)mmol/L,vmax为(0.049±0.001)mmol.mg-1protein.min-1。根据LiP已知保守序列设计引物,提取质粒,扩增得到一条199bp的DNA片段lip1和一条563bp的DNA片段lip2,序列比对结果显示与已报道的白腐真菌过氧化物酶基因的同源性不是很高。核苷酸翻译后的氨基酸序列比对结果发现,LiP1与Pycnoporus sanguineus的漆酶的同源性达到100%,与Mycobacteriumbovis的木素过氧化物酶的同源性达到80%;LiP2与Arabidopsis thaliana的过氧化物酶同源性达到100%,与Hordeum vulgare的过氧化物酶1同源性为75%。     

甘蔗渣采用白腐菌生物降解的研究

研究了甘蔗渣采用两种白腐菌的生物降解，分析了不同培养条件对木素降解的影响。研究内容包括从自然界筛选分离出一株具有木素降解能力的白腐菌ＨＧＸ０３，并与引进的白腐菌Ｐ．ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ进行了处理甘蔗渣的研究和比较。在相同条件下培养１４ｄ和２８ｄ，Ｐ．ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ作用于甘蔗渣的总木素降解率分别为１９５％和２６３％，ＨＧＸ０３则分别为１５２％和２２７％。ＨＧＸ０３处理后的甘蔗渣白度比Ｐ．ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ约高２％（ＩＳＯ）。供给氧气可以提高白腐菌的木素降解能力，促进作用主要表现在生物处理的中期。附加营养物可以明显地减少处理原料的重量损失，增加木素的降解。与单纯采用菌丝体相比，全培养物接种可以利用白腐菌生长过程中产生的胞外酶，起到增加木素降解速率的效果。     

假单孢菌PKE117木素过氧化物酶的酶学性质及基因克隆

对纯化得到的假单孢菌PKE117的胞外木素过氧化物酶的酶学性质进行了初步研究,发现其最适pH为5.0,最适温度为30℃,以藜芦醇为底物,在25℃,pH3.0的琥珀酸钠缓冲液中与底物反应时的Km值为(0.277±0.0008)mmol/L,vmax为(0.049±0.001)mmol·mg-1 protein·min-1.根据LiP已知保守序列设计引物,提取质粒,扩增得到一条199bp的DNA片段lip1和一条563bp的DNA片段lip2,序列比对结果显示与已报道的白腐真菌过氧化物酶基因的同源性不是很高.核苷酸翻译后的氨基酸序列比对结果发现, LiP1与Pycnoporus sanguineus的漆酶的同源性达到100%,与Mycobacterium bovis的木素过氧化物酶的同源性达到80%;LiP2与Arabidopsis thaliana的过氧化物酶同源性达到100%,与Hordeum vulgare的过氧化物酶1同源性为75%.     

白腐菌对秸秆中木质素生物降解的研究

研究了白腐菌及其产生的木质素降解酶系对秸秆的木质素生物降解方法，探讨了黄孢原毛平革菌和杂色云芝单一菌株生物降解及双菌株联合降解木质纤维素的规律，白腐菌双菌联合固态培养可使木质素降解率达到47．64％，脱木素选择性为4．74．采用模拟大规模白腐菌堆积培养（厚度30cm）的方法降解秸秆木质素，培养30d，木素降解率为32．54％，表明此方法是一种可行的大规模生物顸处理方法．     

BIO-DEINKING OF ONP AND ITS EFFLUENT TREATMENT BY WHITE ROT FUNGUS

INTRODUCTIONIt is well known that deinking of secondary fiber can be carried out by chemical or cellulose-degrading enzymes[ 1,2]. However, due to serious pollution produced from chemical deinking and loss of yield affected by cellulosases, new approach for deinking of secondary fiber is expected. White rot fungus is a variety of microorganism that can degrade woody fiber and lignin in natural environment[3,4,5,6], lignin is one of the integrate component in secondary fiber, especially in …     

BIOCHEMICAL PULPING OF REED PRETREATED BY WHITE ROT FUNGI

INTRODUCTIONThe origin of biological pulping is natural degradation of lignin by microorganism, such as white rot fungi. Many researches have been carried out, on the biological degradation of the lignin in raw materials, mostly on woods. Those researches were mainly focused on microorganism pretreatment as a prior proceeding of the mechanical pulping, for the rare possibility of pulping directly with the pretreatment by a microorganism. A series of reports showed that microorganism pretr…     

木素过氧化物酶合成的部分影响因素

研究了黄孢原毛平革菌（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）在以０．４％微晶纤维素为碳源、２０ｍＭＮＨ＋４氮源的富碳富氮液体振荡培养条件下,木素过氧化物酶与起始ｐＨ值、诱导剂、孢子年龄、添加吐温及碳源设置的关系。试验结果显示,起始ｐＨ值６．０所得酶活最高,黎芦醇诱导效果明显。添加吐温、少量单糖可明显提高酶产量。     

黄孢原毛平革菌合成漆酶能力的研究

全面的研究了各种影响漆酶合成的条件对漆酶的产生的影响.P.chrysosporium在静置条件下，无论充氧与否，均不产生漆酶，在固体与半固体条件下，也不产生漆酶，仅在：高氮（24mmol/L)，高铜（160μmol/L），摇床（118r/min)，30℃，6d可产少量漆酶，在P.chrysosporium对木素的降解中，漆酶难以发挥重要作用。     

用BRADFORD法测定蛋白质含量适宜条件的探讨

在１４－２４℃温度范围内，随着温度上升，蛋白质含理实测值与理论值差异逐渐减少；温度高于２４℃时，实测值与理论值基本一致，２４℃时，反应时间少于３ｍｉｎ，实测值低于理论值，反应时间长于３ｍｉｎ，实测值与理论值基本一致。所以Ｂｒａｄｆｏｒｄ法测定蛋白质含量的适宜条件是温度不低于２４℃，反应时间不少于３ｍｉｎ。     

白腐菌对造纸原料树脂成分的降解

使用白腐菌处理马尾松木片,在短期内对木素和DCM抽提物的降解情况进行了研究.结果表明,培养9天后,木片中总木素含量降低3%,DCM抽提物的去除率达到20%.外源无机盐用量对白腐菌降解木素能力影响不大,但对DCM抽提物影响较大,相同培养时间在试验条件下去除率最大相差2%左右.培养期间内在木片上未见有色菌丝的出现.     

木质素降解菌L1原生质体的形成和再生

从自然界筛选出一株降解木质素高的白腐真菌 L1,对其原生质体的形成和再生进行了研究。在 OS培养基中生长的菌丝体 ,原生质体数量较高。在液体培养条件下 ,于 OS培养基中培养 60 h的菌丝体 ,用 0 .3% β-巯基乙醇与酶液同时处理菌丝体 ,采用 p H5 .0的混合酶 (蜗牛酶∶纤维素酶∶溶菌酶的最佳浓度比为 5∶ 4∶ 1 ) ;在 30℃酶解 4h;用 0 .4mol/L NH4Cl,1 0 mmol/L Mg SO4作渗透压稳定剂时 ,原生质体数量达到 4.32× 1 0 5个 /mg。 OS双层再生培养基最适于原生质体再生     

THE LIGNIN CONTENT IN BLACK LIQUID OF STRAW AS-AQ BY ULTRAVIOLET SPECTROPHOTOMETER

1INTRODUCTIONLignin is an aromatic compound. It has strong absorption of ultraviolet radiation but carbohydrates have little absorption. So we use an UV to measure the lignin quantitatively or qualitatively in black liquor from pulping[1]. A single benzen…