泛素在小鼠胚胎植人中的作用

选择lactacysfin作为泛素（Ubiquitin，uPP）的抑制剂，采用宫角注射的方法，研究了UPP对小鼠胚胎植入的作用。结果表明，小鼠胚胎植入受UPP的影响。     

SWAP-70在小鼠正常动情周期和围植入期子宫中的表达及其调节

SWAP-70是鸟苷酸交换因子家族成员之一，是PI3K介导的酪氨酸磷酸化受体下游通路的信号分子之一. 以往的研究及我们的前期工作初步表明它在小鼠子宫和恒河猴胚胎植入位点有高表达，提示此分子可能参与了胚胎植入的调节. 为此，本研究在小鼠模型中，采用原位杂交、免疫组化和半定量RT-PCR方法，系统地研究了SWAP-70在妊娠初始期胚胎植入位点、妊娠期子宫和动情周期子宫中的表达及其受雌、孕激素的调节. 结果表明SWAP-70在植入位点有非常显著的高表达，其mRNA和蛋白分布于胚泡以及对系膜侧的腔上皮细胞和临近胚泡的子宫基质细胞，而在非植入位点表达强度很弱；在妊娠第7天和第9天的母胎界面上，滋养层巨细胞、迷走滋养层和海绵滋养层都维持较强的SWAP-70表达；正常动情周期中，SWAP-70在动情期子宫中表达明显上调；卵巢切除模型显示雌激素显著上调SWAP-70的表达，孕激素能够阻断雌激素的作用. 以上结果提示，SWAP-70可能参与胚胎植入过程中多种细胞行为的调节，如胚泡黏附、基质细胞的增殖与蜕膜化以及滋养层细胞的浸润和分化过程，同时在动情周期子宫内膜细胞功能调控中发挥一定作用.     

组蛋白甲基化修饰在小鼠早期胚胎发育中的建立与调控

 组蛋白修饰作为重要的表观遗传修饰，在调控胚胎基因表达、胚胎细胞的命运决定及胚胎基因组的稳定性等方面均起了很重要的作用。微量测序技术的发展使从全基因组水平上检测植入前胚胎的组蛋白修饰成为可能。综述了近年来利用该技术对小鼠早期胚胎发育过程中的组蛋白甲基化修饰研究的最新进展，总结了在胚胎基因激活及第一次细胞分化过程中组蛋白H3K4me3和H3K27me3修饰不同的建立和动态变化趋势，这些研究为探索胚胎发育和细胞分化的表观调控机制奠定了基础。     

激素类药物对小鼠早期胚胎发育的影响二

本文分别用几种剂量的胰岛素、可地松、已烯雌酚,在昆明小鼠妊娠开始胚胎植入前,进行处理。然后观察植入前的胚胎数量、发育时期及其与红体数相比较成活率的变化。发现用较高剂量激素(胰岛素0.04u/gwt、可地松0.083mg/gwt、已烯雌酚0.25mg/只)处理后,对早期胚胎在各项指标上均表现十分明显地抑制效果。当剂量逐渐降低后(胰岛素0.92u,0.01u、0.005u/gwt,可地松0.042mg/gwt,已烯雌酚0.025、0.0025mg/只),早期胚胎在各项指标上仍表现不同程度的抑制作用,只是逐渐趋于正常。本实验说明孕鼠体内某些激素的水平,可直接影响早期胚胎的发育。     

国产试剂配制的培养液对小鼠早期胚胎培养效果的研究

本实验用 Whitten 的小鼠早期胚胎培养法验证了国产试剂配制培养液对小鼠早期胚胎体外培养的效果。实验表明,在用国产试剂配制的小鼠早期胚胎培养液中,2—细胞胚胎能正常发育到囊胚阶段。     

S100A10基因在小鼠子宫中的表达及性激素对其表达的调节

S100A10是S100钙结合蛋白家族成员之一,是一种钙依赖性的信号通路的介导分子,近年来有研究表明,它在胚胎植入位点有明显的高表达.文中采用半定量RT-PCR和原位杂交方法,研究了S100A10基因在小鼠中的组织特异性表达,在妊娠初始期胚胎植入位点、妊娠期子宫和正常动情周期子宫中的表达及其受性类固醇激素的调节.观察发现:S100A10基因在小鼠多种组织中都有表达,在卵巢、子宫、睾丸及附睾等一些生殖器官中表达水平尤为高;在妊娠第4天,子宫中S100A10基因表达明显上调,且在子宫内膜植入位点处有非常显著的高表达,其mRNA分布于对系膜侧的腔上皮细胞和功能层的基质细胞,且基质细胞中的信号强于腔上皮细胞,而非植入位点呈现极其微弱的表达;从妊娠第5天直到分娩第1天子宫内都维持恒定的S100A10表达;正常动情周期中,S100A10基因在动情前期和动情期子宫中表达明显上调;卵巢切除模型显示雌激素显著上调S100A10基因的表达,孕激素下调其表达.以上结果提示S100A10可能具有抑制胚胎植入位点腔上皮细胞的过度凋亡和促进基质细胞的增殖与蜕膜化的作用以及参与子宫应激反应过程.     

S100A10基因在小鼠子宫中的表达及性激素对其表达的调节

S100A10是S100钙结合蛋白家族成员之一，是一种钙依赖性的信号通路的介导分子，近年来有研究表明，它在胚胎植入位点有明显的高表达.文中采用半定量RTPCR和原位杂交方法，研究了S100A10基因在小鼠中的组织特异性表达，在妊娠初始期胚胎植入位点、妊娠期子宫和正常动情周期子宫中的表达及其受性类固醇激素的调节.观察发现：S100A10基因在小鼠多种组织中都有表达，在卵巢、子宫、睾丸及附睾等一些生殖器官中表达水平尤为高；在妊娠第4天，子宫中S100A10基因表达明显上调，且在子宫内膜植入位点处有非常显著的高表达，其mRNA分布于对系膜侧的腔上皮细胞和功能层的基质细胞，且基质细胞中的信号强于腔上皮细胞，而非植入位点呈现极其微弱的表达；从妊娠第5天直到分娩第1天子宫内都维持恒定的S100A10表达；正常动情周期中，S100A10基因在动情前期和动情期子宫中表达明显上调；卵巢切除模型显示雌激素显著上调S100A10基因的表达，孕激素下调其表达.以上结果提示S100A10可能具有抑制胚胎植入位点腔上皮细胞的过度凋亡和促进基质细胞的增殖与蜕膜化的作用以及参与子宫应激反应过程.     

小鼠胚胎干细胞R1表面特异结合多肽的筛选

胚胎干细胞是从哺乳动物胚胎发育早期的囊胚的内细胞团内分离出来的一类细胞,具有自我更新和全能性的基本特征.作者利用M13噬菌体展示技术筛选与未分化的小鼠胚胎干细胞R1表面特异结合的多肽.实验利用未分化的小鼠胚胎干细胞为筛选靶细胞,分化的小鼠胚胎干细胞为吸附细胞,进行3轮的消减筛选,经细胞ELISA鉴定,噬菌体DNA测序和多肽序列分析,得到13条能与小鼠胚胎干细胞特异结合的多肽.通过BLASTP比对发现有11个体内的同源蛋白,为进一步研究小鼠胚胎干细胞表面分子提供研究基础.     

久效磷对小鼠早期胚胎体外发育的影响

采用小鼠早期胚胎的体外培养技术,研究了久效磷对小鼠着床前胚胎发育的影响。结果表明,剂量低于0.22mmol/L对小鼠早期胚胎无明显作用,剂量为0.34mmol/L时,70.6％的8细胞胚胎能发育至囊胚,剂量达0.45mmol/L,对小鼠早期胚胎有显著的毒害作用,只有5.7％可以发育至囊胚。在经久效磷处理的小鼠早期胚胎电镜照片上可以看到,细胞内网架结构保持完好,线粒体被破坏,数量变少,空泡变大、增多,细胞内不同结构对久效磷的敏感性有一定差异。     

泛素-蛋白酶体途径的组成及其生物功能

泛素-蛋白酶体途径(UPP)是20世纪70年代末期新发现的一种细胞内蛋白降解途径,在多种蛋白质降解中发挥重要作用,具有高度特异性。UPP介导的细胞蛋白降解是一个复杂、缜密的调控过程。UPP可识别、标记、进而降解那些被泛素化的蛋白质。它在抗原提呈、细胞周期、NF-kB代谢等方面发挥重要调控作用,而且UPP的异常与许多疾病如肿瘤、脓毒症、骨骼肌损伤等的致病机制有关。就UPP的组成、作用机制及其功能进行综述。     

植入前胚胎的短期酒精暴露对植入后胚胎发育的影响

哺乳动物的早期胚胎发育对胚胎着床以及胎儿的长期生长发育都具有决定性作用.酒精对胚胎发育可以产生严重影响,但现有研究主要集中于产前胎儿酒精暴露,对早期胚胎(植入前)酒精暴露关注较少.为进一步阐明酒精导致的胚胎的发育异常机理,本研究利用体外胚胎培养模型,重点研究了酒精暴露对囊胚细胞谱系的分化和胚胎植入的影响.通过对谱系分化...     

小鼠不同杂交组合胚胎玻璃化冷冻的研究

通过小鼠胚胎的毒性试验 ,确定对胚胎无毒性或毒性小的冷冻保护剂的种类、适宜浓度 ,以便达到提高冷冻解冻后的胚胎存活率的目的。用小鼠不同杂交组合胚胎进行玻璃化冷冻和解冻后 ,经体外培养观察胚胎的存活率和囊胚孵化率 ,确定了最佳的杂交组合     

胚胎单个定位及三维共培养微流控装置的构建

胚胎体外发育是临床人工辅助生殖技术中的关键环节,对着床后胚胎发育状况有重要作用。该研究利用细胞三维培养技术和微流控芯片技术构建了一种新型的小鼠胚胎体外共培养装置,用于实现自动化的小鼠胚胎定位与共培养操作,并对胚胎在体内的发育环境进行模拟。利用该微流控装置成功进行了小鼠胚胎的单个定位、三维细胞共培养以及发育追踪观察,并对装置中胚胎发育状况做出评价。统计结果表明:共培养芯片中小鼠胚胎发育囊胚率(87.3%±3.1%)显著高于对照组的囊胚率(76.8%±2.7%,P0.01);并且共培养芯片中小鼠囊胚的平均细胞总数(102±4)也显著高于对照组中的平均细胞总数(68±3,P0.01)。因此该胚胎共培养微流控芯片有助于在体外实现自动化的胚胎定位和培养过程,并且对小鼠胚胎发育具有更好的促进作用。     

小鼠胚胎冷冻保存与移植

<正> 为了建立小鼠胚胎库,从1986年开始筹建实验动物低温生物学研究组,首先对小鼠胚胎冷冻保存与移植进行研究。两年多来,冻存小鼠胚胎取得成功,在冻存于-196℃液氮中,经10天至半年时间,解冻复苏后,形态学鉴定,其存活率可达58.99％。自从1972年D.G.Whittingham和I.Wilmut首先研究冷冻小鼠胚胎成功以后,     

小鼠胚胎移植技术优化及对巨细胞病毒净化研究

目的 建立小鼠巨细胞病毒净化方法,以获得无MCMV感染的小鼠。方法 利用胚胎移植技术,通过使用不同激素、不同发情周期注射激素、受体鼠品系、不同的移植方法、不同时期胚胎移植,以及移植胚胎数量等对比试验,优化了净化条件。利用优化的胚胎移植净化方法,对供体鼠进行了净化。结果 SIGMA生产的激素,在10 IU剂量下超排得到的可用胚胎数量约为17枚/只;在小鼠发情间期超排得到的可用胚胎最多,超排的可用胚胎数约为23枚/只;选取C57雄性小鼠与ICR雌性小鼠交配的子一代作为受体鼠,产仔率达44.5%;输卵管移植较子宫移植效果好,产仔率为40.64%;移植2细胞胚胎的妊娠率为80%,明显优于单细胞和8细胞;受体鼠移植24枚胚胎时,产仔率达到了43.75%。利用优化的小鼠巨细胞病毒胚胎移植净化方法,净化得到了无MCMV感染的小鼠。结论 建立了小鼠巨细胞病毒净化方法,为获得无MCMV感染的小鼠种群提供了可靠的保障。     

DAP 玻璃化冷冻液对小鼠2-细胞胚胎的冷冻保存

摘要: 目的探索和优化小鼠2-细胞胚胎冷冻效果,建立小鼠胚胎冷冻保存技术以及超低温保存模型动物胚胎实验室所需的相关技术。方法选择3 个品系( C57BL/6、ApoE － / －、NOS3 － / － ) SPF 级4 周龄雌性小鼠,运用超数排卵、体外受精、玻璃化冷冻法,以及二细胞期胚胎复苏、体外培养等技术方法,观察上述实验效果。结果C57BL/6、ApoE － / －、NOS3 － / － 3 个品系小鼠超数排卵平均值分别为42. 98 个/只、27. 93 个/只、23. 11 个/只,体外受精2-细胞期胚胎率分别为68. 79%、32. 70%、23. 08 %,胚胎冷冻复苏后胚胎回收率72. 77%、80. 87%、83. 33%,存活率分别为56. 92%、54. 84%、70%,存活胚胎体外培养发育到囊胚比率分别为72. 37%、60. 78%、25%。结论选择4 周龄小鼠,按预定相同的技术方法做超数排卵、体外受精、胚胎冻存、胚胎复苏,呈现出较好效果,C57BL/6 小鼠优于基因工程小鼠,基本建立起小鼠2-细胞胚胎冷冻保存技术。     

Smad2基因敲除小鼠冷冻胚胎库的建立

目的 建立Smad2基因敲除小鼠胚胎库。方法 利用OPS法对Smad2基因敲除小鼠胚胎进行玻璃化冷冻保存,并比较不同杂交组合小鼠的超数排卵数、解冻胚胎的复苏率及发育率。结果 两组不同杂交组合（Smad2^＋/－♂×Smad2^＋/－♀和Smad2^＋／－×Smad2^＋／－♀）小鼠平均超排卵数分别为14．13枚和24．60枚;复苏率分别为90．16％和91．67％;囊胚发育率分别为73．08％和77．05％。这些结果表明Smad2基因敲除杂合子母鼠的超排数量明显低于野生型母鼠的超排数量,而二者胚胎解冻后的复苏率和囊胚发育率没有显著差异。因此我们主要通过对野生型小鼠超数排卵,然后与Smad2基因敲除杂合子雄鼠交配的方法获取胚胎,进行玻璃化冷冻保存,现已冻存胚胎1256枚。结论 成功建立了Smad2基因敲除小鼠胚胎库。     

小鼠胚胎移植实验方法

目的在小鼠胚胎移植实验中除了胚胎的质量外,希望从受体状况及胚胎移植的技术和方法上摸索出最佳胚胎移植的条件,提高胚胎移植率,为临床胚胎移植提供实验和理论数据。方法从超数排卵或自然发情怀孕3.5 d的母鼠子宫内收集胚胎,在显微镜下观察,以最快的速度将发育与胚龄一致并且形态完好的胚胎捡出,并移植到自然发情2.5 d的小鼠子宫内。结果超数排卵的胚胎质量比自然发情的胚胎质量差,在12个自然发情的受体中有3个怀孕并产下12只仔鼠。结论小鼠胚胎移植与供受体的准备、小鼠的超数排卵、胚胎品质有着密切的关系,胚胎移植的技术和方法对胚胎移植有着至关重要的关系。     

不同遗传背景小鼠输卵管移植效率的研究

目的 选用不同遗传背景的小鼠,研究移植不同胚胎数量对产仔率的影响,旨在提高小鼠的移植效率。方法 本研究主要采用输卵管移植技术将2-细胞胚胎移植至假孕鼠体内,对妊娠母鼠的产仔数量进行统计分析。结果 与封闭群相比,近交系的移植效率较低,平均产仔率为37.5%,封闭群则为45%。免疫缺陷动物对移植的胚胎数量要求较高,每只小鼠单侧移植11～15枚细胞时的产仔率最高,为63.5%;不同类型小鼠的平均产仔率比较：C57BL/6J(49.8%)>KM(45.8%)>ICR(44.1%)>NOD-SCID(35.6%)>BAL B/c-nu(29.3%)。ICR、C57、NOD-SCID三种小鼠移植胚胎数量在11～15枚时,产仔率最高;而KM小鼠移植胚胎数量在16～30枚时,产仔率最高;BALB/c-nu小鼠移植胚胎数量≤10枚时,产仔率最高。结论 不同遗传背景的小鼠输卵管移植效率不同,相同遗传背景小鼠移植产仔率随移植胚胎数量的不同而有所变化。     

昆明鼠胚胎干细胞的分离培养与鉴定

目的：从昆明系小鼠的早期胚胎分离和培养胚胎干细胞(ES细胞)．方法：收集小鼠3．5d胚龄的囊胚，将其培养在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上，5—6d后取隆起生长的内细胞团块分离后再培养，观察集落的生长情况并通过碱性磷酸酶染色、原位杂交、细胞核型分析等对细胞集落进行鉴定．结果：KS细胞集落性生长，符合小鼠胚胎干细胞的一系列特性．结论：昆明系小鼠囊胚在胚胎成纤维细胞饲养层上可以发育成ES细胞，并能进行传代培养．