泛素在小鼠胚胎植人中的作用

选择lactacysfin作为泛素（Ubiquitin，uPP）的抑制剂，采用宫角注射的方法，研究了UPP对小鼠胚胎植入的作用。结果表明，小鼠胚胎植入受UPP的影响。     

用高代数小鼠胚胎干细胞制作嵌合体小鼠

为了检验胚胎干的全能性,通过用1日龄卵巢移植后,经体外受精得到的囊胚的饲养建立了小鼠的ES系,并在较高的代数下(第41代)制出了5只毛色嵌合体小鼠,但是没有得到性腺嵌合的小鼠。研究结果证实,高代数的ES细胞仍然具有构建嵌合体的能力。     

有活性的激酶C受体(Rack1)在大鼠胚胎植入中的作用

目的:探讨有活性的激酶C受体(receptor for activated C kinase, Rack1)与胚胎着床及蜕膜化的关系.方法:建立大鼠早期妊娠、假孕、延迟着床和人工诱导蜕膜化模型,收集各种模型的子宫材料,利用激光共聚焦显微术检测了Rack1在大鼠子宫中的表达.结果:Rack1在妊娠第6～9天的子宫蜕膜上强表达;假孕第6～9天和延迟着床的大鼠子宫腔上皮下基质中无明显的免疫信号,而延迟着床激活胚胎周围的腔上皮下基质中有强的免疫信号.蜕膜化子宫中整个蜕膜区呈强的免疫染色信号.结论:Rack1蛋白的表达与胚胎着床及蜕膜化过程密切相关.     

哺乳动物植入前胚胎发育的程序化

哺乳动物植入前胚胎发育的程序化过程,是发育生物学的核心问题,弄清这一过程,对研究哺乳动物早期发育有着重要意义.因受研究方法、实验材料等因素的影响,该研究领域的进展缓慢.文章就近年来在植入前胚胎发育的分子事件、母源调控向合子型调控的过渡、细胞核重建、染色质的重建机制、基因组甲基化与基因表达等方面的研究进展进行了综述.     

用小鼠单个MⅡ卵和2-细胞期胚胎构建cDNA文库

阶段特异性cDNA文库的构建和筛选是一种分离和克隆早期胚胎特异表达基因的有效方法.本研究利用小鼠单个MⅡ卵母细胞及发育至2-细胞的胚胎分别构建了cDNA文库.滴度分别为:6.5×106、7.2×107,基因片段平均长度为250-1500bp并用β-actin验证了文库的可靠性.这种利用单胚胎构建cDNA文库的方法,不仅解决了胚胎研究材料受限制的问题,而且在材料的发育时间上更加精确,更能反映胚胎发育的规律,是研究早期胚胎发育基因表达以及克隆胚胎发育相关基因的一种有效手段.     

胚胎工程在家畜繁育中的应用

胚胎工程在家畜繁育中的应川主要是利用胚胎移植、胚胎冷冻、胚胎分割和胚胎克隆等方法，使家畜加速繁殖，遗传改性和增强抗逆性。这一新的应用将引起场畜牧业生产技术的革命。１.胚胎移植。是指从供体、雌性动物体内取出由受精卵发育成的早期胚胎，再移植到假孕的受体动物体内，由受体动物妊娠产下幼仔的一种技术。该技术在利用优良种畜对家畜种群进行遗传改良及增加珍贵危畜种头数有重要意义，并可从无妊娠能力的母畜获得后代，扩大其遗传影响力，从成熟前母畜获得后代，缩短世代间隔，加快遗传改良。目前，国际上已相继在兔、绵羊、山羊…     

小鼠胚胎一步冷冻法

本文描述了冷冻小鼠胚胎直接投入液氮的简单一步法。这项研究的主要目的是评价小鼠胚胎在下列不同浓度的甘油和蔗糖混合液中预脱水后冷冻胚胎解冻后的活力。同时研究了脱水前甘油的预处理及胚胎阶段的不同效果。当蔗糖浓度保持恒定(0.25M),甘油浓度变化范围为1.0～4.0M时,以甘油浓度2.0M冷冻胚胎解冻后活力最高(67％)。采用甘油预处理并不优于不预处理。当甘油浓度保持恒定(2.0M)。蔗糖浓度变化范围为0—1.0M时,发现在0.5M蔗糖中冷冻胚胎解冻后活力最佳(81％)。桑椹胚存活率优于囊胚(86％),VS72％)。与鲜胚移植54％的出生率相比较。胚胎冷冻最佳处理(2.0M甘油+0.5M蔗糖)解冻后移植出生率为41％。这项技术可实际应用于家畜胚胎的冷冻与解冻。     

组蛋白甲基化修饰在小鼠早期胚胎发育中的建立与调控

 组蛋白修饰作为重要的表观遗传修饰,在调控胚胎基因表达、胚胎细胞的命运决定及胚胎基因组的稳定性等方面均起了很重要的作用。微量测序技术的发展使从全基因组水平上检测植入前胚胎的组蛋白修饰成为可能。综述了近年来利用该技术对小鼠早期胚胎发育过程中的组蛋白甲基化修饰研究的最新进展,总结了在胚胎基因激活及第一次细胞分化过程中组蛋白H3K4me3和H3K27me3修饰不同的建立和动态变化趋势,这些研究为探索胚胎发育和细胞分化的表观调控机制奠定了基础。     

小鼠胚胎细胞数量的观察

本试验观察了不同时期小鼠胚胎的细胞数含量。结果表明，由早期桑椹胚至孵化囊胚，其胚胎细胞数含量由２０士５．８逐渐增加１２１．２±１６．７，且显示与胚胎发育阶段不同而不同。     

利用切片免疫荧光技术研究Tbx5在小鼠胚胎心脏中的表达

Tbx5参与转录因子的调控,对上肢及心脏发育起关键作用.通过对小鼠胚胎心脏组织切片厚度的选择、加入抗原修复液等试验条件的优化,建立了利用切片免疫荧光技术检测小鼠胚胎心脏中Tbx5的方法.结果显示,在胚胎发育的第11.5 d,Tbx5在整个心脏中都有表达,尤其在心房以及左心室中高表达.但在胚胎发育的第13.5 d,Tbx5只在心房和左心室中表达,在右心室中并不表达.揭示Tbx5的这种动态表达模式对于心脏的发育以及腔室分化是十分重要的.     

小鼠早期胚胎内细胞团分化潜能的研究

用免疫手术去除小鼠早期胚胎的外层细胞或滋养层细胞后，其内细胞闭经２４ｈ体外培养后能够重新形成滋养层，从晚期桑椹胚，早期胚泡和晚期胚泡分离的ＩＣＭ的洋养层分化率分别为７０．３％、６９．３％和１１．１％。晚期胚泡ＩＣＭ的洋养层分化率明显低于早低于早期胚泡和桑甚胚的滋养层分化率，实验结果表明小鼠早期胚泡的ＩＣＭ仍角具有较强的分化为洋养层的能力，但晚期胚泡的ＩＣＭ分化为滋养层的能力明显减弱。从而推断晚期胚     

植入前胚胎的短期酒精暴露对植入后胚胎发育的影响

哺乳动物的早期胚胎发育对胚胎着床以及胎儿的长期生长发育都具有决定性作用.酒精对胚胎发育可以产生严重影响,但现有研究主要集中于产前胎儿酒精暴露,对早期胚胎(植入前)酒精暴露关注较少.为进一步阐明酒精导致的胚胎的发育异常机理,本研究利用体外胚胎培养模型,重点研究了酒精暴露对囊胚细胞谱系的分化和胚胎植入的影响.通过对谱系分化...     

斑马鱼胚胎在毒理学研究中的应用

斑马鱼胚胎对化学品暴露高度敏感,同时具有许多其他动物模型所没有的优势,因此,在毒理学研究中得到广泛应用。除化学品浓度外,在毒性检测中还需要考虑一系列因素的影响,如胚胎膜屏障作用、胚胎暴露时间、化学品的性状及不同化学品间的相互作用。目前,胚胎毒性评价方法由表型的观察逐渐向分子水平发展,更加侧重于对化学品作用机理的研究,使斑马鱼胚胎在毒性检测中具有更高特异性和灵敏性。     

恒河猴植入位点差异基因筛选及蛋白激酶H11的克隆

采用cap-finder全长cDNA扩增技术和抑制消减杂交(SSH)相结合的方法研究了恒河猴胚胎植入初始时期子宫内膜植入位点与非植入位点的基因表达差异情况.在准确获取妊娠9.5 d恒河猴植入位点和非植入位点子宫内膜后,用SSH建立了植入位点消减cDNA文库,从中随机挑选了1440个克隆,通过点杂交获得了179个在植入位点高表达的克隆,经测序和与基因库(Gen-Bank/EMBL)比对分析,证实其中102个克隆对应于人或恒河猴的52个同源基因,75个克隆对应于人的58个EST,另外2个克隆没有找到对应的同源基因,推测为新的基因.对其中最高频率出现的差异表达基因-蛋白激酶H11,通过cDNA末端快速扩增(RACE)法克隆得到了它的全长cDNA序列.与人的蛋白激酶H11相比,cDNA序列同源性达到94%,所编码的蛋白质序列同源性为83%     

超氧化物歧化酶在斑马鱼早期胚胎中的表达特点

以斑马鱼早期胚胎为研究对象，通过免疫组织化学的方法研究了超氧化物歧化酶（SOD）在斑马鱼体节分化时期的表达特点。结果发现：在体节分化的不同时期，SOD在脊索细胞的胞质部位有不同强度的表达；SOD在脑组织中表达较强，到孵化期，在大脑区域的表达略强于间脑区域。提示SOD不仅存在于成体的抗氧化防线中，在胚胎早期发育过程中以SOD为代表的酶性抗氧化系统就开始逐步建立，维持胚胎组织器官细胞中的正常活性氧浓度，确保胚胎的正常发育。     

SWAP-70在小鼠正常动情周期和围植入期子宫中的表达及其调节

SWAP-70是鸟苷酸交换因子家族成员之一，是PI3K介导的酪氨酸磷酸化受体下游通路的信号分子之一. 以往的研究及我们的前期工作初步表明它在小鼠子宫和恒河猴胚胎植入位点有高表达，提示此分子可能参与了胚胎植入的调节. 为此，本研究在小鼠模型中，采用原位杂交、免疫组化和半定量RT-PCR方法，系统地研究了SWAP-70在妊娠初始期胚胎植入位点、妊娠期子宫和动情周期子宫中的表达及其受雌、孕激素的调节. 结果表明SWAP-70在植入位点有非常显著的高表达，其mRNA和蛋白分布于胚泡以及对系膜侧的腔上皮细胞和临近胚泡的子宫基质细胞，而在非植入位点表达强度很弱；在妊娠第7天和第9天的母胎界面上，滋养层巨细胞、迷走滋养层和海绵滋养层都维持较强的SWAP-70表达；正常动情周期中，SWAP-70在动情期子宫中表达明显上调；卵巢切除模型显示雌激素显著上调SWAP-70的表达，孕激素能够阻断雌激素的作用. 以上结果提示，SWAP-70可能参与胚胎植入过程中多种细胞行为的调节，如胚泡黏附、基质细胞的增殖与蜕膜化以及滋养层细胞的浸润和分化过程，同时在动情周期子宫内膜细胞功能调控中发挥一定作用.     

小鼠胚胎GMP玻璃化超低温保存研究

本实验研究了GMP法(glass micropipette)冷冻保存小鼠胚胎的主要技术环节,并与目前常用的OPS(open pulled straws)法比较了冷冻后囊胚率.实验表明,EFS30(87.71%)保护作用比EFS40(81.67%)好,但无显著差异(P＞0.05);10%EG(91.37%)预处理优于5%EG(85.93%)、20%EG(88.70%),但差异不显著(P＞0.05);玻璃化时间10～30 s(89.47%、86.79%)显著优于(P＜0.05)60 s(64.00%).GMP法与OPS解冻后囊胚率分别为94.02%和92.06%,差异不显著(P＞0.05),但GMP法稍好于OPS法.同时,GMP法操作比OPS法更简便.