裂解多糖单加氧酶在毕赤酵母中的异源表达

裂解多糖单加氧酶(lysate polysaccharide monooxygenase,LPMO)是一类含铜氧化酶,在还原型辅因子存在下可氧化裂解纤维素,对纤维素的降解起重要作用.优化并合成黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)lpmo基因,构建pPICZ_αA-Pclpmo表达载体,电转毕赤酵母GS115实现了分泌表达,重组蛋白表达量为450 mg/L.重组PcPLMO对微晶纤维素催化活性为14 U/mL,对碱预处理的秸秆纤维活性较高,为24 U/mL.PcPLMO具有较好的热稳定性,分别在80、90、100℃保温60 min,残留活性为80%、62%与48%.经Endo H脱糖基化分析,PcLPMO发生了高度糖基化修饰,从而促进了酶的高温热稳定.相关结果可为LPMO协同纤维素酶降解纤维素的应用提供参考.     

纳米球形聚电解质刷固定化酶合成及性质表征研究

为研究用光乳液聚合法合成以聚苯乙烯为核、接枝丙烯酸为单体的纳米球形聚电解质刷,采用透射电子显微镜、傅里叶红外光谱、核磁共振氢谱及激光粒度仪对微球结构进行表征,并以球刷为载体,对碱性蛋白酶进行固定化研究。结果表明:制备的纳米球形聚电解质刷载体平均粒径为80nm左右,尺寸均一,分散性良好。碱性蛋白酶优化固定化条件为缓冲液pH值9.0、固定化时间6h、酶液添加量1.2mg/mL。固定化酶与游离酶比较,最适pH值由游离酶的11.0变化为9.0,最适反应温度由游离酶的45℃提高到60℃,且热稳定性、酸碱稳定性均较游离酶有所提高。经纳米球形电解质刷固定化的碱性蛋白酶,酶的应用范围扩大,更有利于工业化生产。     

固定化果胶酶的酶学性质研究

介绍明胶固定化果胶酶的酶学性质及其和原酶比较的结果．固定化酶反应的最适ｐＨ为３．５．最适温度为６０℃，而原酶则分别为ｐＨ４．０和５５℃．研究结果还表明，固定化酶对ｐＨ、温度、金属离子等的稳定性都比原酶有了提高．这对于固定化酶的重复回收使用和储存更为有利．而固定化酶的Ｋｍ值比原酶的Ｋｍ值低，这将使物质的转化反应更为完全．     

壳聚糖固定化β-葡萄糖苷酶酶学性质研究

采用交联吸附法将β-葡萄糖苷酶固定在壳聚糖上,方法简便易行.固定化酶的最适反应温度为50℃,相比于游离酶上升了10℃,且固定化酶提高了游离酶的热稳定性.固定化酶最适pH值为6.0,与游离酶相比上升了1.0,更耐碱.固定化酶对化学试剂稳定性增强,贮藏稳定性有显著提高.固定化酶优化了游离酶的部分酶学性质,具有一定应用价值.     

环己酮单加氧酶的克隆表达及酶学性质分析

为研究鞘氨醇杆菌中环己酮单加氧酶的催化特性,从N.aromaticivorans DSM 12444基因组DNA克隆表达了一个编码环己酮单加氧酶的基因chmo,并分析了该基因产物的酶学性质.该基因全长1650bp,编码550个氨基酸,理论分子量为61.6kDa.将携带此基因的重组质粒pET28a-chmo转入E.coli BL21(DE3)后,获得了62kDa左右的表达产物.重组环己酮单加氧酶(CHMO)能氧化芳香族硫醚及其衍生物、链式硫醚、其他硫醚和酮类等底物,以2-氯乙基苯基硫醚为底物时活力最高(25.65U/mg).CHMO最适反应温度和pH分别为55℃和8.87,倾向于利用NADPH作辅酶.上述结果表明,重组CHMO是一个新型的环己酮单加氧酶,推测其与硫醚及酮类物质的氧化降解有关.     

壳聚糖固定化果胶酶的制备及其酶学性质研究

以1％壳聚糖与5％戊二醛交联8h制得交联壳聚糖载体,1g载体固定10mg的果胶酶,载体先与酶液缓慢振荡混合30min后,在固定化体系（pH3．4,4℃）中固定反应12h,该条件下制得的固定化酶强度大韧性好。酶活力回收率高达56．31％;固定化酶的最适温度50℃,最适pH3．4,Km^app值为5．42mg·mL^-1,连续使用7次后,酶活力还保留70．45％以上,具有较好的操作稳定性。     

硫酸软骨素裂解酶ABC产生菌的筛选及酶学性质的初步研究

从成都市井研县生猪屠宰厂等地采集的样品中筛选出一株高产、稳定的硫酸软骨素裂解酶ABC产生菌株GT38，初步鉴定为彭氏变形杆菌(P．penneri)，其酶活力单位高达112U／L．酶学性质经初步研究表明：该酶的最适反应pH值为7．0，最适反应温度为30℃，在pH值6～8之间较稳定，温度在30℃～45℃较稳定，金属离子对酶活力影响不大．     

海洋来源褐藻胶裂解酶分离纯化及酶学性质研究

以假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.zb7-4)发酵制备褐藻胶裂解酶粗酶液,采用弱阴离子DEAE交换层析分离褐藻胶裂解酶,分析纯化褐藻胶裂解酶Alg L的酶学特性.结果表明:Alg L的表观分子质量约为32 ku,比活力为(208.26±5.87)U·mg-1;其最适反应pH为7.0,在pH为6.0~10.0范围内稳定性较好,保温1 h仍能保持80%以上的相对酶活力;最适反应温度50℃,在40℃保温30 min,其残余酶活力高于80%;Cu2+、Cr3+、Co2+、Ba2+、Sr2+、Hg2+对该酶具有不同程度的抑制作用,Hg2+抑制作用最为明显;该酶具有较好的盐耐受性,在3 mol·L-1Na Cl反应体系中保温2 h,仍残余66%酶活力.动力学参数Km、Vmax、Kcat测定表明,该酶对聚古罗糖醛酸钠(PG)亲和力较高,为偏好聚甘露糖醛酸钠(PM)裂解作用的双功能酶.     

固定化乳酸脱氢酶的催化性质研究

研究了固定化乳酸脱氢酶(LDH)的制备和催化性质,讨论了戊二醛体积分数、酶的偶联时间、pH值对酶固定化的影响.对游离酶和固定化酶催化性质的研究结果表明:酶促反应最适pH分别为9.2和10.2,最适温度分别为51℃和50℃,米氏常数分别为16.2 mmol/L和0.7 mmol/L.与游离酶相比,固定化酶的活力稳定性更佳,有更好的贮存稳定性和复用性.     

金纳米颗粒修饰的固定化葡萄糖氧化酶酶膜制备

分别利用柠檬酸钠和NaBH4作为还原剂、以PVP作为包覆剂制备不同类型、不同包覆情况的金纳米粒子,并用紫外可见分光光谱仪、透射电微镜等手段对制备的金纳米粒子的粒径、形貌和分散性进行表征。用金纳米粒子对葡萄糖氧化酶膜进行修饰,并在SBA生物传感分析仪上进行感应测量。研究结果表明,粒径小、分散性好的球状金纳米粒子可以极大地提高葡萄糖酶膜的灵敏度。     

Cytochrome P450 Monooxygenase Immobilization as a Model of Herbicide Metabolism in vitro

To investigate herbicide metabolism in vitro by cytochrome P450 with stable enzymatic activity, cy-tochrome P450 is immobilized in silk fibroin. The enzymatic activity of immobilized cytochrome P450 is maintained above 80% after repeated batch experiments for 10 times. Moreover, the enzymatic activity of immobilized cytochrome P450 is kept as relatively high as 73.8% after storage for two months at 4℃. In addition, immobilization can improve the temperature and pH stability of cytochrome P450. Immobilized cytochrome P450 has the similar affinity Km values for herbicide chlorsulfuron and triasulfuron as the free cytochrome P450. In the case of chlorosulfuron, affinity Km value is 53μmol/L for free cytochrome P450,and 63μmol/L for immobilized cytochrome P450, respectively. In the case of triasulfuron affinity, Km value is 36μmol/L for free cytochrome P450, and 44μmol/L for immobilized cytochrome P450, respec-tivily. Immobilized cytochrome P450 will be convenient, rapid, stable and continuous for herbicide metabolism in micro-bioreactor in vitro.     

固定化乙酰胆碱脂酶的研究

以戊二醛为交联剂,将乙酰胆碱脂酶交联固定到硅胶载体上,研究了影响固定化酶的主要因素．通过酶活力的测定,确定了最佳戊二醛浓度、pH值、固定化时间、酶用量、固定化酶的最适作用温度、pH值、酶的稳定性及其回收率．结果表明：戊二醛浓度为0．5％,pH值为8．0,固定3．0h,酶与载体比例为30mg／g可制备良好的功能化载体．固定化乙酰胆碱脂酶最适作用温度和pH范围分别为40℃和6．0～9．0．重复使用10次固定化酶,回收率约为70％．     

半枝莲多糖的研究 分离纯化及其基本性质

半枝莲经乙醚脱脂,热水提取,Sevage 法脱蛋白质,乙醇沉淀后得半枝莲多糖粗品.经 DEAE-纤维素(DE-52)柱层析和 Sephadex G-200凝胶过滤得半枝莲多糖精品.紫外光谱分析表明不含有核酸和蛋白质.经乙酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳和 Sephadex G-200凝胶过滤法柱层析结果表明均为单一条带或者单一峰,证明此多糖精品是均一的.分析表明此多糖精品的总糖含量以半乳糖为标准为115%,以葡萄糖为标准为56%,以糖原为标准是58%.用 SephadexG-200分子筛法测得平均分子量为1×10~4道尔顿.体外实验表明半枝莲多糖对移植肉瘤 S-180细胞和腹水癌细胞均有一定的抑制作用.     

棉纤维膜固定化脂肪酶的研究

对棉纤维作载体、对 - ( β-硫酸酯乙砜基 )苯胺 ( SESA)作活化剂固定化脂肪酶的工艺条件进行了研究 ,发现在醚化 p H值为 9.0～ 1 0 .0 ,交联 p H值为 7.0 ,酶的质量浓度为 6 mg· m L- 1,交联时间为 1 2 h,在室温条件下 ,得到最高固定化酶活力为 33U·g- 1。对上述条件下制备的固定化酶的稳定性进行了考察 ,用该固定化酶间歇水解橄榄油 ,重复使用 6次后相对水解率由 1 0 0 %降至 44%。该固定化脂肪酶最适使用的温度为 30～ 35℃ ,p H值为 9.0     

多糖的构象研究

利用多种方法如圆二色谱、旋光、粘度、比色等测定多糖的各项特征。研究了多糖在溶液中的构象情况,以及外来因素如温度、ｐＨ、变性剂、金属离子、化学修饰剂等影响下,构象特征的变化,获得一系列有意义的规律。     

蕨麻多糖的功能研究

综述了蕨麻的主要化学成分及其多糖功能的研究进展.查阅近几十年来有关蕨麻的研究性文献,进行分析、归纳和总结.研究结果表明,蕨麻中所含的多糖成分具有抗氧化、抗缺氧、保肝和免疫调节等多种功能.蕨麻多糖是蕨麻的主要活性成分之一,具有多种医疗保健功能,而且我国蕨麻资源丰富,值得进一步探讨和开发利用.     

极大螺旋藻多糖提取方法研究

对TCA法和Sevag法两种螺旋藻多糖提取方法进行了比较研究,根据研究结果,指出TCA法在多糖提得率、蛋白去除率、色素去除率方面均优于Sevag法;同时对TCA法提取多糖进行了正交实验,从固液比、pH值、时间、温度4个方面进行优化组合得到了最佳提取条件：当pH值为10、固液比为1∶30、提取时间为6h、温度为90℃时达到TCA法提取多糖的最佳提取条件,多糖提得率为3.935%。     

胶红酵母固定化方法研究

研究胶红酵母固定化方法,并测定所得固定化细胞的机械强度和通透性,对固定化方法进行初步筛选;研究磷酸缓冲溶液对固定化细胞强度的影响,最终得到目的固定化方法。试验表明:CA-活性炭(C)复合凝胶包埋所得固定化细胞,经0.6%聚乙烯亚胺(PEI)强化12 h,再经1%的戊二醛强化3 h后,机械强度大大提高,能耐磷酸缓冲液。     

纤维素固定化葡萄糖氧化酶的研究

用高碘酸钠（NaIO4)溶液将棉纤维素氧化成氧化纤维素,并将其作为载体使葡萄糖氧化酶能够固定化。考察了溶液的pH值、氧化时间、温度和氧化剂浓度等氧化条件对氧化纤维素醛基含量的影响,优化了氧化条件,研究了固定化葡萄糖氧化酶的活性,借助傅里叶红外光谱和酸－碱滴定法等手段,探讨了葡萄糖氧化酶的固定化机理。研究结果表明,纤维素固定化葡萄糖氧化酶具有较高的生物活性。     

壳聚糖固定化α-乙酰乳酸脱羧酶的研究

采用壳聚糖作为载体，戊二醛作交联剂制备固定化α-乙酰乳酸脱羧酶（ALDC），优化了固定化条件。实验结果：活力1380U／g，蛋白载量98．30mg／g，比活力14．04U／mg，活性回收率37，l％，固定化α-乙酰乳酸脱羧酶最适温度30℃，最适pH5．5。