脑钠素的基因工程研究

脑钠素是利钠多肽家族成员之一 ,存在于人体的多种器官组织中 .脑钠素具有很强的利钠利尿、舒张血管和降低血压等生理功能 ,而脑钠素的改变与高血压、心脑血管病和肾病等许多疾病有关 .脑钠素具有潜在的药用开发价值和良好的应用前景 ,其开发通常采用基因工程手段 ,但至今尚未成功 .本文综合评述了脑钠素基因工程研究的历史与现状 ,全面分析了所存在的问题 ,并提出了相应的解决问题的方法 .     

eglinC基因的化学合成与克隆

采用固相亚磷酰胺法合成了ｅｇｌｉｎＣ全基因，该基因全长２２１ｂｐ，包括其结构基因，５’－端起始密码子ＡＴＧ和３－端终止密码子ＴＡＧ，并在基因的５－和３－分别装上ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ位点。共分１２个片段，采取分段合成，酶促连接成完整的ｅｇｌｉｎｇＣ基因。合成的基因克隆于Ｍ１３载体，经杂交，检测，筛选出含ｅｇｌｉｎＣ基因的克隆。用双脱氧链终止法测其序列，结果与设计的一致。     

ApiIa抗菌肽基因的化学合成,克隆及其在酵母中的表达

用固相亚磷酰胺法合成了ＡｐｉＩａ抗菌肽基因,全长为８０个核苷酸。它被分成４个寡核苷酸片段,分别在ＤＮＡ合成仪上的合成经分离纯化后的寡核苷酸片段经酶促连接,然后被克隆到分泌型载体质粒ｐＡＦＤ１０１上,经限制酶酶切,ＰＣＲ模板检测以及双链ＤＮＡ序列分析检测,证明合成的ａｐｉＩａ基因和设计的完全一致。     

脑钠素测定在小儿心力衰竭中的价值

综述脑钠素在小儿心血管疾病中的研究成果和现状，总结BNP对小儿心力衰竭诊断的参考价值。     

人TRAIL基因胞外段的化学合成和克隆

根据大肠杆菌高表达序列重新设计了人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)胞外段的基因编码区的核苷酸序列, 应用化学合成的方法合成了多个互补DNA片段,经互补片段分别退火和连接后, 将完整编码区克隆于pMD18-T质粒中,进行DNA 序列分析,获得了与设计序列完全一致的含有完整编码区的人TRAIL胞外段基因,并成功构建了高效的TRAIL胞膜外段原核表达载体pTWIN1/TRAIL111-281.     

药物对大鼠急性心肌梗塞后心衰发生与血浆脑钠素浓度的影响

观察药物治疗对大鼠急性心肌梗塞(AMI)后心衰的发生及血浆脑钠素(BNP)浓度的影响,并探讨了BNP浓度在评价药物疗效方面的作用.将24只大鼠随机分为对照组、单纯缺血组、药物治疗组.结扎除对照组以外大鼠冠状动脉左前降支后惊醒笼养,其中药物组在术后既开始药物灌胃治疗.于86天后处死大鼠,取血并测定血浆BNP浓度,同时摘取心脏测定心肌梗塞面积,结果,药物组血浆BNP水平及心肌梗塞面积较缺血组低(p<0.01;p<0.01).结论:药物治疗可以降低心梗后血浆BNP浓度及缩小梗塞面积,减少心梗后心衰发生,监测血浆BNP浓度可评价心梗后药物治疗是否获效.     

脑表达的X连锁基因的克隆、染色体定位和初步功能研究

通过筛选人18周胎脑cDNA文库,得到一条与Bexl和Bex2在高度同源性的基因,经HUGO／GDB人类基因命名委员会的同意命名为BEX1,Northern杂交发现该基因在脑和胰腺中高表达,在心脏,胎盘,肝脏和肾脏中有较低表达,而在脑和骨骼肌中没有表达,用斯坦福大学G3辐射杂交系将BEX1定位于Xq22上的Marker DXS990和DXS 1059之间,以BEX1作为杂交探针小对小鼠的原位杂交中发现BEX1的小鼠同源基因在小鼠的生精小管中有表达,而在间质组织中没有表达,在成年小鼠（出生10周）中BEX1同源基因在生精小管的外周细胞中表达,在中层细胞（包括次级精母细胞和精子细胞）和内层细胞（主要由精子组成）中没有表达,而在6周的处于青春期的小鼠中,BEX1的同源基因在整个生精小管中都有表达,但外层细胞的表达比中层和内层细胞的表达要高得多,而在3周的幼年小鼠中,BEX1的同源基因仅有微量表达,所以BEX1在小鼠中的同源基因在青春期表达上升,生精小管成熟后表达维持在一定的水平,这提示BEX1基因可能参与精子发生及生精小管发育的过程。     

脑钠素和心脏肌钙蛋白T在超长时运动负荷后血清浓度的变化及评价

目的:通过联合测试血清中BNP和cTnT浓度变化来评价超长时运动负荷对心脏的影响。方法:在10名运动员完成50km超长马拉松前后,分别检测其血清中BNP和cTnT浓度。结果:完成该运动后所有运动员血清BNP和cTnT浓度均发生显著升高(p<0.01),BNP和cTnT明显正相关,BNP和cTnT与运动强度呈正向关系。结论:超长时运动负荷能明显增加血清中BNP和cTnT含量,两者的增加是由于心肌受损和心功能失调造成,但对心脏机能的评价与临床分析方法有所不同。     

中国家蚕抗菌肽CMIV基因的合成与克隆

根据从中国家蚕蛹中提取的抗菌肽ＣＭＩＶ的氨基酸序列，设计兼顾大肠杆菌和昆虫两种不同体系偏爱密码子的ＣＭＩＶ基因序列；用固相合成法合成寡聚苷酸，通过二步电泳地快速纯化之，复性，连接并克隆到ｐＵＣ９中，转化大肠杆菌ＪＭ１０９；在Ｘ－Ｇａｌ、ＩＴＰＴＧ，ＡｍｐＬＢ平板上挑选白色克隆，用限制性酶谱法筛选含有合适插入片断的质粒ＤＮＡ。     

胎儿左右大脑差异表达基因片段的克隆

应用抑制性消减杂交（ＳＳＨ）技术从一２４ 周流产男性胎儿的左右大脑ｍ ＲＮＡ 中克隆到了４２ 个左脑特异表达基因的ｃＤＮＡ 片段，并随机挑选１５ 个克隆的测序结果与美国ＮＩＨ 基因库ＥＳＴ进行了同源性分析，同源性范围是６４％ ～１００％ ，其中有５ 个克隆的基因库同源序列与脑有关，其余１０ 个克隆同源于脑以外的其它组织．     

水稻Sh2基因的分子克隆

实验通过构建以兰姆达噬菌体为载体的水稻基因组文库，用玉米的Ｓｈ２ｃＤＮＡ克隆作为探针，分离出水稻的Ｓｈ２ＤＮＡ克隆。经用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ氏印迹杂交分析，初步证明两个克隆是真实的水稻Ｓｈ２基因的克隆，命名为Ｓｈ２－６４和Ｓｈ２－１０１。     

高含量人体必需氨基酸基因的化学全合成

采用固相亚磷酰胺法合成了编码高含量人体必需氨基酸蛋白质的基因。该基因有300个碱基对,共编码94个氨基酸,其中92%以上为人体必需氨基酸。从该基因的两个方向均可被翻译成具有人体必需氨基酸的蛋白质。该基因选用了植物所偏爱的密码子,并间隔地插入了编码赖氨酸的密码子,使之所编码的蛋白质可被胰蛋白酶消化。     

扬子鳄DMRT1基因DM保守区的克隆及序列分析

DMRT1基因是DMRT基因家族的一个重要成员,在动物性别决定过程中发挥重要作用.本文参照人DMRT1基因DM保守区及有关文献,设计了一对简并引物,扩增了扬子鳄的DMRT1基因,并对扩增产物进行了亚克隆与测序.结果在雌雄扬子鳄个体中各获得一个预期的基因片段,长度为140bp,序列无性别差异性,命名为扬子鳄AsDMRT1基因.序列同源性分析表明,扬子鳄DMRT1基因DM盒区核苷酸序列与人和鼠相应基因的同源性分别为87%、86%;编码的氨基酸序列与人和鼠相应基因编码序列的同源性分别为95%、97%.充分显示了DMRT1基因在进化上的高度保守性.     

聚苯胺的化学合成、结构及导电性能

导电聚苯胺是结构和性能最稳定的导电高分子材料，有较广泛的应用前景。本实验用化学氧化合成方法，较系统地研究了氧化剂种类、用量、介质酸的浓度以及聚合反应温度等因素对苯胺聚合反应及产物性能的影响；找出了最适宜的合成反应条件和特殊的后处理工艺，并合成出了电导率高达３０．６５Ｓ／ｃｍ，收率达１２７．８％的高性能导电聚苯胺     

青岛文昌鱼hedgehog及两个hedgehog-like片段的克隆

采用RT-PCR方法获得了青岛文昌鱼2497bp长的hedgehog基因片段,其所编码的氨基酸序列与多种生物hh基因家族成员的相应片段显示了较高的同源性.同时获得2个含有部分hedgehog基因片段的序列hedgehog-like-1和hedgehog-like-2,提示文昌鱼中发生hedgehog基因倍增过程和有多拷贝hh基因存在的可能性.为研究hh基因的分子进化提供了线索.