红麻微卫星DNA的分离

分别采用RAPD、锚定PCR和磁珠捕获等3种方法富集含微卫星序列的红麻基因组DNA片段,并连接到pMD18-T载体,构建基因组文库.然后以通用引物M13F,M13R和根据微卫星核心序列所设计的引物[VRV(CT)12或VRV(TG)12],用PCR方法直接对文库筛选,并将获得的阳性克隆进行测序.分别从RAPD,锚定PCR和磁珠捕获3种富集方法构建的基因组文库中获得6,23,19个微卫星位点.     

麦类作物基因组原位杂交技术要点分析

基因组原位杂交是在分子水平上检测外源染色质的一种有效方法,其探针是总基因组DNA．该技术广泛应用于植物进化和亲缘关系的鉴定上．本文主要对麦类作物中基因组原位杂交技术的要点进行了分析。     

正交设计优化苜蓿ISSR-PCR反应体系的研究

以苜蓿基因组DNA为模板,利用正交设计,对影响ISSR反应体系的主要因素(Taq酶、Mg2+、dNTP、引物和模板)从4个水平上进行筛选和优化,建立了适合苜蓿的最佳ISSR反应体系:20μL反应体系中加83.4 nkat Taq酶,2.0 mmol/L Mg2+,10×PCR Buffer 2.0μL,0.4 mmol/L dNTP,0.2 mmol/L引物,2.5 ng DNA模板.PCR扩增反应程序为:94℃预变性4 min(94℃变性1 min,45~53℃退火1 min,72℃延伸1 min)40个循环,于72℃延伸7 min,4℃保存.在此反应体系下,可以得到重复性好、稳定且多态性高的条带.     

RAPD技术在蜘蛛遗传多样性研究中的方法探讨

进行了RAPD技术在蜘蛛遗传多样性研究中的方法探讨.利用蜘蛛的附肢作为其基因组DNA抽提的材料,且该改进的方法所抽提的蜘蛛基因组DNA的产量与纯度足以满足RAPD分析的要求;通过优化RAPD PCR反应条件,可以获得清晰度高,重复性好的RAPD图谱以用于蜘蛛(如拟水狼蛛Piratasubpraticus)、拟环玟豹蛛(Par dosapseudoannulata)、武昌獾蛛Trochosawuchangensis等)的遗传多样性研究;在不投食饲养武昌獾蛛一个月以上的前提下,用随机引物S92(5′CAGCTCACGA3′)比较分析了武昌獾蛛的头胸部与其附肢各自的RAPD图谱的差异,差异不显著(P>0.05).结果表明:蜘蛛的附肢和头胸部均可作为其遗传多样性研究材料,但以前者为材料可以有效防止异源DNA的干扰.因而,其基因组DNA在作为蜘蛛遗传多样性的RAPD分析模板时要优于头胸部.     

核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum) arom基因3''''-末端的克隆与分析

根据五功能AROM蛋白保守区域设计简并引物,从核盘菌基因组中获得了一段大小为1626bp的DNA片段.结合Southern杂交结果,用反向PCR克隆了arom基因3'-末端4104bp的序列.序列分析结果表明,该DNA片段推测的氨基酸序列与烟曲霉、粗糙脉孢霉、构巢曲霉和粟酒裂殖酵母等的AROM蛋白同源,包含了部分5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSP合成酶)结构域、莽草酸激酶结构域、脱氢奎尼酸脱水酶(脱氢奎尼酸酶)结构域和脱氢莽草酸脱氢酶结构域,其中含有EPSP合成酶模式2(255-273)、莽草酸激酶模式(426-453)和Ⅰ型脱氢奎尼酸酶活性位点模式(659-687).     

水稻叶绿体DNA提取和纯化方法优化

改进了水稻叶绿体DNA的提取和纯化方法,获得的高纯度的水稻叶绿体DNA适于PCR扩增等分子操作.本方法要点为:匀浆液2 300 r.min-1离心去核,上清液4 300 r.min-1离心,沉淀用于DNA提取,提取后的叶绿体DNA用RNase和蛋白酶K纯化.     

第三代测序细菌基因组DNA提取方法的比较

为筛选有效提取细菌菌株总DNA的方法,分别采用SDS法、CTAB-SDS法、试剂盒法和改良试剂盒法对苏云金芽胞杆菌、粘细菌和放线菌进行总DNA的提取、电泳检测、NanoDrop 2000测定、PCR扩增.对放线菌和苏云金芽胞杆菌,用改良试剂盒法所提取的总DNA纯度较高,电泳条带清晰,DNA主带位于23 kb,单位体积菌液所提取到的总DNA较SDS法和CTAB-SDS法高,能满足下游的PCR扩增等分子操作.对待测样品所做的质检报告也证实样品合格,可用于后续建库、测序.而粘细菌提取到的总DNA由于它们的OD260/230在2.0以下,没有达到第三代测序样品的要求.改良试剂盒法所提取到的总DNA大多数可以满足第三代测序技术样品制备的要求.     

鳜鱼与鲢鱼肌球蛋白轻链2启动子的克隆及其序列比较分析

采用PCR方法从鳜鱼(Siaiperca chuasti )基因组DNA中分离得到了鳜鱼肌球蛋白轻链2基因启动子序列,其大小为890 by,包含1个TATA框、3个MEF2结合位点和5个与bHLH转录因子相结合的E-框(CANNTG).用同样的方法从鳜鱼基因组DNA中分离得到鲢鱼肌球蛋白轻链2基因启动子序列,其大小为8...     

拟南芥LRR-RLK亚家族基因At1 g09970突变体鉴定及表型观察

LRR-RLK是植物类受体蛋白激酶家族(RLK)中最大的亚家族.该亚家族基因在调控植物体生长发育和抗逆性方面发挥重要作用.At1g09970是LRR-RLK亚家族成员.通过PCR和RT-PCR在DNA和RNA水平上筛选鉴定At1g09970对应的T-DNA插入失活的突变体.对萌发和萌发后阶段进行突变体的表型分析结果表明,At1g09970突变体在萌发后对NaCl敏感,暗示该基因与植物的抗盐胁迫有关.     

Sm(Ⅲ)(HE)3配合物与DNA作用方式的光谱研究

应用电子吸收光谱和荧光光谱手段,以吖啶橙(AO)作探针研究了Sm(Ⅲ)(HE),与DNA的相互作用.研究表明,苏木索(HE)与sm(Ⅲ)形成了配离子,其结合比,nSm(Ⅲ):nHE=1:3,Sm(Ⅲ)(HE)3与DNA的结合常数K=1.36×106L·mol-1.同时研究了酸度、盐效应等对Sm(HE)3与DNA相互作用的影响,Soatchard图表明该配合物对吖啶橙与DNA的结合为非竞争性抑制.实验综合表明,Sm(Ⅲ)(HE)3与DNA之间的结合主要为外部静电作用方式.     

一种多吡啶铜配合物与DNA相互作用的电化学研究

采用循环伏安法、微分脉冲伏安法、计时库仑法并结合紫外光谱法研究了一种电中性多吡啶铜配合物[Cu（phen）（PC）（H2O）]（phen=1,10-邻菲罗啉,PC=2,6-吡啶二羧酸）与DNA的相互作用.紫外吸收光谱显示,配合物溶液加入DNA后,配合物的特征吸收峰减小,产生明显的减色效应,表明二者发生了相互作用.循环伏安结果表明配合物在玻碳电极呈现一对准可逆氧化还原峰.加入DNA后,配合物的峰电流明显减小,式电位发生正移,表明二者可能通过嵌插方式发生作用.微分脉冲伏安法考察了不同浓度的DNA对配合物的影响,表明以[Cu（phen）（PC）（H2O）]作为电化学探针,能在3.3×10–6 mol/L~4.0×10–5 mol/L浓度范围内对DNA进行定量检测.计时库仑法进一步显示,配合物与DNA形成复合物后扩散系数明显降低了.     

异硫氰酸荧光素-酚藏花红双发光磷光探针测定DNA

以Pb2＋为离子微扰剂时,酚藏花红（PF）与异硫氰酸荧光素（FITC）均能在滤纸上分别发射强而稳定的室温磷光（RTP）信号;当两者混合时,发现PF和FITC的RTP信号均显著增强;而1.12 ag DNA spot-1均使PF和FITC的RTP信号剧烈增强,在634与659 nm处PF和FITC的ΔIp与DNA含量成线性关系,据此建立了FITC-PF双发光磷光探针测定蛋白质的新方法.该方法的检出限（LD）分别为14zg DNA spot–1（PF）和18zg DNA spot–1（FITC）,灵敏度高,并成功用于花蜜样品中DNA含量的测定.同时探讨了FITC-PF双发光磷光探针测定痕量DNA的反应机理.     

Ag-DNA的I-V特性及导电机理研究

在扫描隧道显微镜（STM）模式下观测了单根Ag-DNA的细部形貌,发现单根Ag-DNA出现解链并伴有部分碱基呈现混沌现象.测量了梳直在金薄膜电极表面的Ag-DNA及小牛胸腺DNA的电流-电压（I-V）特性曲线,结果表明Ag-DNA束的横向导电能力比纯DNA弱.     

磷酸酯的合成及其原位改性纳米碳酸钙的研究

在较佳的合成条件下合成了十八碳醇磷酸酯（ODP）表面活性剂,并以其作为改性剂对碳酸钙进行原位表面改性.同时利用透射电镜TEM、XRD、红外光谱（IR）等测试手段对产品的形貌、晶型等方面进行表征.实验结果表明,磷酸酯改性后的碳酸钙具有纺锤形,当其用量达到2%时,活化指数可达到0.99,这充分说明了改性碳酸钙表面由亲水变为疏水,达到了很好的改性效果.     

Se（Ⅳ）对酒石酸长春质碱与DNA相互作用影响的研究

利用荧光光谱法、紫外光谱法和粘度法研究了Se（Ⅳ）对酒石酸长春质碱与DNA相互作用的影响.研究结果表明Se（Ⅳ）的加入使酒石酸长春质碱与DNA的主要作用力由氢键或范德华力转变为静电作用力,作用模式由沟槽结合转变为静电结合.由结合常数的改变及紫外光谱实验结果判断Se（Ⅳ）对酒石酸长春质碱与DNA的结合起抑制作用。     

秋水仙碱与DNA的相互作用

298.15K下,应用等温微量热法研究了抗肿瘤药物秋水仙碱（COL）与小牛胸腺DNA（ctDNA）结合作用,测定了药物与DNA分子的结合比、结合常数、结合焓变（△H°）、熵变（△S°）及吉布斯自由能变（△G°）等热力学参数.结合应用紫外-可见吸收光谱及荧光光谱研究了秋水仙碱与小牛胸腺DNA的分子间相互作用,探讨了药物对DNA分子构象的影响.     

二（吡啶-2-羧酸）钴配合物与DNA相互作用的电化学研究

本文采用电化学方法（循环伏安法、常规脉冲伏安法和计时库仑法）研究了一种吡啶类钴配合物[Co（PC）2（H2O）2]（PC=吡啶-2-羧酸）与DNA在水溶液中相互作用,探讨了该钴配合物与DNA二者之间结合模式、结合机理及结合参数等．循环伏安法发现该配合物在循环伏安图上呈现一对明显的氧化还原峰,经数值分析可知配合物的氧化还原峰电流比值Ipa/Ipc=0．5,且峰电位差△Ep=72mV,表明该配合物在金电极上的氧化还原过程为准可逆过程．随着DNA的加入,配合物的氧化还原峰电位发生了显著的减小,且式电位发生正移,表明二者之间通过嵌插方式发生了相互作用．配合物还原态与氧化态与DNA结合平衡常数比K2＋/K3＋=2．6,表明还原态的配合物与DNA之间结合能力是氧化态的2．6倍,符合嵌入模式的特征．常规脉冲伏安法考察了不同浓度DNA对配合物电化学响应的影响,结果表明[Co（PC）2（H2O）2]与DNA的结合常数K为9．4×10^4L／mol,显示出了中等强度的结合能力．计时库仑法进一步显示,当配合物与DNA作用后形成高分子量的复合物后扩散系数明显降低．     

青春期大鼠接触雌激素下调乳腺癌中NF-κBP65表达

为观察青春期大鼠接触雌激素如辛基酚（OP）或三羟异黄酮对乳腺癌中NF-κB的影响,通过免疫组织化学、RT-PCR、Western blotting和电泳迁移率改变实验（EMSA）等方法观察雌激素影响大鼠乳腺癌中NF-κB P65的改变.结果表明NF-κB P65在细胞胞浆和胞核中均有表达,在乳腺癌组织中以胞核表达多见.与模型组（mod）比较,给予40 mg/kg辛基酚（OP40）或500 mg/kg三羟异黄酮（GEN）处理的大鼠乳腺癌中NF-κB P65 mRNA表达明显降低,且细胞核中NF-κB P65蛋白表达也明显减少,NF-κB DNA结合活性明显降低.OP及GEN降低大鼠乳腺癌发病可能与减少NF-κB P65核转位、降低NF-κB的DNA结合活性有关.     

荧光原位杂交技术在染色体生物学中的应用

荧光原位杂交技术(Fluorescence in Situ Hybridization，简称为FISH)是20世纪80年代开始发展起来的一种新的定位技术．本文简要介绍了荧光原位杂交技术的创立、发展及其在染色体生物学中的应用．