视网膜色素变性家系遗传分析及基因诊断

通过对一常染色体显性视刚膜色素变性(RP)家系的连锁分析.发现致病基因与RP4连锁,进一步对RHO基因的突变检测,发现RHO的Pro347Leu突变是该家系的遗传基础,运用该结果对家系中2个年幼个体进行了基因诊断,和其他RHO突变引起的RP病人相比.该家系具有发病年龄早,部分成员伴发白内障的独特症状.     

中医治疗视网膜色素变性探讨

视网膜色素变性（Retinitis Pigmentosa，RP）是以进行性夜盲，视野缩小和视网膜色素沉着病变为特征。中医对视网膜色素变性早有记载，首见于隋·巢元方的《诸病源候论·雀目候》谓：“人有昼而睛明，至瞑则不见物，世渭之雀目，言其如雀鸟，瞑便无所见也。”故后人把RP称为“高风雀目”。中国医学名著《审视瑶函》作者傅仁宇描述本病为：“高风障。至晚不明，至晓复明也。盖元阳不足之病。”他们都认为RP主要临床症状之一为夜盲。所以近代有人把RP称为夜盲症。《沈氏尊生书》对本病的病因病机及其预后也作了详细的报道：“雀目者，日落即不见物也，此由肝虚血少……有初时好眼，患成雀目者，而亦有生成如此，并由父母遗体，日落即不见物，不必治，治亦无效”。     

虹膜色素上皮细胞移植治疗视网膜色素上皮细胞变性

目的 研究自体虹膜色素上皮细胞(Iris Pigment Epithelium,IPE)移植治疗视网膜色素上皮细胞变性的效果.方法 采用酶-机械分离-酶消化法法获取高纯度、高活力的RPE细胞用于移植,采用外路法将IPE细胞悬液移植入视网膜下腔. 结果 IPE移植术后患者眼底移植区色素沉着减少,未见渗出,出血,视网膜平,视力从入院时的0.15提高至术后2W的0.2.多焦ERG显示移植区P1波平均反应密度上升.结论 IPE细胞移植有望成为RP治疗的一新方法.     

香港科大发现视觉系统机理 有助于视网膜色素变性研究

最新一期生命科学界顶级权威杂志《细胞》的封面文章刊登了对动物侦测光的视觉系统研究所取得的重大突破,该突破由香港科技大学生命科学部客座教授张明杰及其团队完成,对研究视网膜色素变性及其他人类     

ATP基因突变与乳腺癌相关性分析

对41例女性乳腺癌患者带毛囊毛发线粒体DNA的编码区ATP基因(ATP6和ATP8)进行测序,对比45例正常人群线粒体DNA基因序列,采用统计学分析软件筛选具有统计学差异的突变位点,共检测到ATP基因突变位点25个,其中在ATP6亚基上共发现18个(72％)基因突变,其中8584G-A、8701A-G、8794C-T、...     

缬沙坦对兔视网膜色素上皮细胞的影响

目的:通过研究缬沙坦对兔视网膜色素上皮细胞生长的影响,以期寻找药物治疗、延缓PVR的发生、发展。方法:体外培养兔视网膜色素上皮细胞,取第三代细胞加入96孔板,分为①正常对照组;②血小板源性生长因子(PDGF)刺激组:50μg/L PDGF;③缬沙坦(Valsartan)治疗组:0.2mg/mL Valsartan+50μg/L PDGF。分别行MTT法检测兔RPE细胞增殖能力,ELASA法检测兔RPE细胞培养液TGF-β1含量。结果:PDGF刺激组兔RPE细胞的增殖速度加快,而Valsartan治疗组对PDGF刺激后的兔RPE生长有明显抑制作用,且明显抑制PDGF刺激兔RPE细胞分泌TGF-β1。结论:Valsartan可抑制体外培养的兔RPE细胞生长。     

动物源大肠杆菌染色体ampC基因突变与头孢菌素耐药关系研究

为检测动物源性大肠杆菌染色体ampC基因突变与头孢菌素类药物耐药性的关系,选取22株头孢菌素类药物耐药菌作为受试菌株,采用K-B纸片法测定了其对7种头孢菌素的敏感性,采用PCR测序的方法进行受试菌染色体ampC基因调控区和部分编码区碱基突变分析.结果表明:受试菌对7种头孢菌素的耐药率均在50%以上,20株受试菌ampC基因调控区和部分编码区碱基发生了突变,占90.9%;共有10种突变组合,突变频率最高的为+185,+58,+122,+126,-88,-82,-18,-1位.ampC基因调控区和部分编码区碱基突变与β-内酰胺类药物耐药性有关.     

屎肠球菌hyl基因突变株的构建

目的：构建屎肠球菌类透明质酸酶（hyaluronidase,hyl）基因突变株,研究hyl基因的功能。方法：用pETX4577质粒构建屎肠球菌hyl基因重组自杀质粒,通过体内同源重组,筛选获得hyl基因的突变株,体外研究hyl基因缺失对突变株生长能力的影响。结果：经同源重组,利用卡那霉素抗性筛选,PCR、脉冲场电泳和southern blot进行鉴定获得基因突变株＊hyl。突变株在体外的生长能力低于野生株。结论：hyl基因突变株构建成功,hyl基因在生长中起着重要的作用,可能是屎肠球菌的毒力因子之一。     

干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393 upp基因突变株的构建

upp基因可用来作为反向筛选标记基因。利用p ORI温度敏感型双质粒系统敲除干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393的upp基因,构建得到重组菌Lactobacillus casei 393-△upp。重组菌可作为反向筛选标记基因upp使用的宿主菌。     

32例肿瘤组织中p53基因突变的PCR-SSCP、银染色检测

目的　检测肿瘤组织中 p5 3基因的突变率 ,探索其在肿瘤发展过程中的作用 .建立PCR SSCP检测 p5 3突变的常规方法 .方法　检测 32例癌组织和癌旁组织 .用盐沉淀制备样品DNA ,以p5 3基因exon7设计引物 ,用PCR SSCP结合银染色显示结果 .结果　 32例肿瘤标本检出阳性 9例 ,阳性率 2 8.1% .4例癌组织和癌旁组织均为阳性 .其中 2 2例胃癌 ,检出 4例阳性 (占 18.2 % ) ,双阳性者 2例 .结论　p5 3基因突变在肿瘤中具有普遍性 ,癌组织和癌旁组织双阳性者 ,与肿瘤的扩散有关 .该检测方法简便易行 ,有助于对 p5 3基因突变的扫描检测 .     

不同人群中绿色觉基因常见多态的差别分布

为了解视网膜色素变性患者与正常人群中绿色觉基因外显子 5常见多态在正常色视人群中的分布 ,收集了 10 8例正常色视男性的白细胞基因组DNA [其中视网膜色素变性 (RP)男性 6 1名、非RP正常色视男性 4 7名 ],PCR扩增每例绿色觉基因外显子 5 ,异源双链_SSCP分析PCR产物。用已知序列的绿色觉基因产物作标准 ,确定待检个体绿色觉基因外显子 5的组成。结果表明 ,就基因频率而言 (g p之比 ) ,RP患者为 2 9,而非RP正常色视者为 4 0 ;就基因型频率而言 (g gp p之比 ) ,RP患者为 5 4 1 3 1,非RP正常色视者为 5 3 0 4 1。在RP患者与非RP患者这两种正常色视的人群中 ,绿色觉基因外显子 5常见多态存在着偏差分布     

四种原发恶性肿瘤中p16基因的缺失和突变研究

采用双重PCR、PCR－SSCP和序列分析方法,对31例非小细胞肺癌、15例食管癌、12例胃癌、9例乳腺癌共68例原发肿瘤组织标p16进行在肺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌的缺失率分别为16％（5／31）、,20－％（3／15）,8％（1／13）,0（0／9）,2例突变：一例食管癌在第130位氨基酸密码由AGA变为ATA,编码的氨基酸由精氨酸变为异亮氨酸,一例肺癌第140位氨基酸的CGG处的C缺失,导致移码突变,p16基因在人类恶性肿瘤发生发展中起重要作用,是多肿瘤抑制基因。     

耐热碱性磷酸酯酶基因的DNA序列分析

从栖热菌中克隆到产耐热碱性磷酸酯酶（FD－TAP）基因并进行了DNA序列分析,结果表明此2．0kb的片段含有一个1056bp的开放阅读框,编码501个氨基酸的蛋白质,其N端有一26个氨基酸的信号肽．在起始密码子的上游5bp处有一个5＇－GGAGGT－3＇的SD序列．基因编码区的（G＋C）％为68．7％,第3位密码子（G＋C）％为92．7％．FD－TAP的氨基酸序列与大肠杆菌等生物的碱性磷酸酯酶氨基酸序列比较,相同性为27％,相似性为38％．中央β－折叠区及与活性中心相关的氨基酸残基高度保守．表明FD－TAP具有与大肠杆菌碱性磷酸酯酶相似的结构和作用机制．在相当于大肠杆菌碱性磷酸酯酶的His370至His412两个金属离子结合部位之间,FD－TAP有一72个氨基酸的插入片段,提示该插入片段与FD－TAP的高耐热性相关．     

Detection of a new mutation (1467-A) for the pedigree with mucopolysaccharidosis type Ⅱ from a Chinese family

Mucopolysaccharidosis type Ⅱ is of high genetic heterogeneity. PCR-DNA sequencing was used to study the mutation hot spots in the IDS gene of a Chinese MPS Ⅱ pedigree. A new mutation （1467-A） not yet reported worldwide was detected. This mutation located at 448th codon in the coding region of exon 9 deletes one “A” at the end of 1467 bp （cDNA）. The frame-shift mutation makes the peptide chain shorten from amino acids 550 to 459, probably altering the configuration of IDS enzyme protein remarkably and lowering the activation of IDS greatly. Therefore it is supposed to be the direct cause of the patient with MPS Ⅱ and to be a necessary premise for prenatal gene diagnosis.     

A point mutation of PRL gene in pituitary prolactin-secreting adenoma induced by 17-b-estradiol in SD rats

Animal model bearing pituitary prolactin-secreting adenomas (prolactinoma) induced by 17-β-estradiol (E₂) in both eutopic pituitary and ectopic pituitary grafted under the renal capsule was generated. Northern blotting assay indicated that PRL mRNA level in eutopic prolactinomas was higher than that in normal pituitaries and ectopic prolactinomas (P < 0.05-0.01). By polymerase chain reaction (PCR)-single-strand conformation polymorphism (SSCP) analysis and DNA sequencing, a point mutation from C to A occurring at -36 nt in proximal promoter of rat PRL (rPRL) gene was found only in eutopic prolactinomas. No base change was detected in ectopic prolactinomas. Fusion gene transfection assayin vitro exhibited increased activity of the mutant promoter derived from eutopic prolactinoma (P < 0.01). These data suggested that the base change in the proximal promoter of rPRL gene may be associated with hyperexpression of rPRL gene in eutopic prolactinomas. The pathogenesis of eutopic and ectopic prolactinomas induced by E₂ in SD rats may be separate.     

DNA序列分析中克隆片段在M13的缺失及质粒载体的应用

应用新的亚克隆载体BLUESCRIPT M13克服了外源DNA缺失问题.采用外切核酸酶Ⅲ快速亚克隆法,在不知道任何内切酶位点的情况下,也能获得一系列适应于DNA顺序分析的重叠衔接克隆.用超螺旋双股DNA直接序列分析程序,简化了DNA序列分析工作.     

Genetic Diversity in Populations of Sepiella maindroni Using 16S rRNA Gene Sequence Analysis

Part of the 16S rRNA gene is amplified with PCR and sequenced for 5 populations of common Chinese cuttlefish Sepiella maindroni:three from the South China Sea,one from East China Sea and one from Japan.The result shows that a total of 5 nucleotide positions are found to have gaps or insertions of base pairs among these individuals,and 13 positions are examined to be variable in all the sequences,which range from 494 to 509 base pairs.All of the individuals are grouped into 7 haplotypes (h1-h7).No marked genetic difference is osberved among those populations.All of the individuals from Nagasaki belong to h1 and the h3 haplotype is found only in the coastal waters of China.A→←G transition in Nucleotide 255 is suggested to be taken as a kind of genetic marker to identify the populations distributed in East-South China Sea and the Nagasaki waters of Japan.     

PCR技术在基因突变检测中的应用

ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术以其具有高特异性、高效率、高灵敏度而广泛地应用于基因突变研究中，近年来，ＰＣＲ技术不仅推动了以往基因突变检测技术的发展，而且建立于ＰＣＲ技术之上的新技术设计先进、操作方便省时，具有更广阔的实用性。文中对这些基因突变检测技术的原理、特点及应用给以综述。     

养殖鱼类链球菌病病原的分离鉴定及其16S rDNA分析

从患病的海水网箱养殖鱼中分离到5株链球菌,分别命名为HD-1、HD-2、HD-3、HD-4和HD-50。常规生化结果表明,其中4株即HD-1、HD-2、HD-3和HD-4为海豚链球菌(Streptococcus iniae);另外1株即HD-50为停乳链球菌(Streptococcus dysgalactiae)。分别对上述分离菌株的16S rDNA进行PCR扩增和测序,并与NC-BI中收录的其它链球菌的16S rDNA序列一起进行聚类分析并构建了系统发生树,确定其分类地位。分子分析结果与生化鉴定结果一致。攻毒实验表明以上4株S.iniae均能引起罗非鱼发病,呈现典型的链球菌病症状,并能从发病的罗非鱼脑、心、肝肾和血液中成功回收S.iniae。以上生化和分子生物学鉴定以及罗非鱼攻毒实验结果表明养殖鱼类链球菌病的主要病原为S.iniae,这与国外有关鱼类链球菌病病原的研究报道一致。