木霉4131菌株纤维素酶的分离纯化和部分性质研究

绿色木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ Ｖｉｒｉｄｅ）突变菌株４１３１＾［１］产生的纤维素酶经过ｓｅｐｈａｄｅｘＧ－７５和ＤＥＡＥ－ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ａ－２５两种层析分离,分离得到具有内切α－葡聚糖酶（ＣＭＣａｓｅ）活性的纯组分,提纯后酶的比活力提高到原来的２６．２倍;回收率为３２．８％,分子量为５６９００,等电点为４．０,最适反应温度为５５℃,最适ｐＨ为４．５,金属离子Ｋ＾＋,Ｎａ＾＋,Ｍｇ＾２＋对其     

里氏木霉木聚糖酶的分离纯化及其性质

使用硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-25凝胶色谱脱盐、DEAE-Sephadex A-50和SP-SephadexC-50离子交换色谱等分离纯化技术，从里氏木霉（Trichoderma reesei）RutC-30培养液中分离出木聚糖酶组分，再经SephadexG-100凝胶过滤色谱进一步分离纯化，得到2个纯木聚糖酶组分A组和组分B。经SDS-PAGE鉴定两组分为单带，相对分子质量分别为20300和13500。组分A的最适反应条件为45℃、pH3.0-5.5很稳定，酶解产物主要是低聚木糖，只含少量木糖；组分B的最适反应条件为55℃、pH5.5，酶解产物全部是低聚木糖。     

甘薯多糖提取纯化及理化性质初步研究

通过正交实验,确立实验室小量、快速、高效提取甘薯多糖的最佳操作条件,建立了一种新的提取方法,即中性条件下,溶液与溶质体积比为2,乙醇与浓缩液体积比为3,浸提时间为2 h,浸提温度为65℃,甘薯多糖提取率大于90%.利用这种改进的提取方法,分离纯化得到一种甘薯多糖.经纸层析、Sephadex G-200柱层析、紫外扫描、红外光谱分析,确定该多糖为均一多糖,相对分子质量为4.6×104,单糖组成为β-葡萄糖.     

包心芥菜多糖的分离纯化及理化性质分析

研究包心芥菜多糖的提取、分离和纯化技术,并对得到的多糖进行初步的鉴定.经醋酸纤维薄膜电泳和高效液相色谱分析证明,所得到的包心芥菜多糖WLP-2为纯品,不含蛋白质、核酸,为非淀粉类均一多糖,其相对分子质量为433048.WLP-2完全酸水解后,经高效液相色谱分析确定其糖基的组成为鼠李糖(Rha)、木糖(Xyl)、阿拉伯糖(Ara)、葡萄糖(Glc)和半乳糖(Gal),摩尔比为3.21∶1.00∶1.66∶1.90∶4.03.     

葡聚糖凝胶层析法分离纯化纤维素酶的研究

用绿色木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｖｉｒｉｄｅ）高产变异菌株４１３１产生的纤维素酶粗酶分别过ｓｅｐｈａｄｅｘＧ２５、ｓｅｐｈａｄｅｘＧ５０、ｓｅｐｈａｄｅｘＧ７５、ｓｅｐｈａｄｅｘＧ１００和ｓｅｐｈａｄｅｘＧ１５０柱层析．结果表明：ｓｅｐｈａｄｅｘＧ７５对纤维素酶的分离效果最佳,并获得了一个ＣＭＣ酶组份,其比活力提高到原来的４９倍,回收率为４１６％．     

绿色木霉产纤维素酶的提取分离及其性质

绿色木霉９２６液体达发酵终点（６～７ｄ）后，所得纤维素酶中ＣＭＣ酶活最高可达２０Ｕ／ｍｌ，滤纸酶活最高可达５．５Ｕ／ｍｌ．发酵液纤维素酶中ＣＭＣ酶组分经硫酸铵沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ—１００柱层析后可提纯６倍左右．紫外光谱分析表明：纤维素酶及其组分在２８０ｎｍ附近有强的吸收峰；红外光谱分析表明：纤维素酶在Ｏ—Ｈ，Ｎ─Ｈ，Ｃ—Ｎ，Ｃ＝Ｏ有吸收带；ＣＭＣ酶学研究表明，ＣＭＣ酶作用的最适反应ＰＨ为５．０，最适反应温度为６０℃，常温下稳定的ｐＨ范围是４．５～６．０．     

黑曲霉变种2281—C纤维素酶的纯化和性质

黑曲霉（Aspergillusniger）2281—C的培养滤液经（NH4）2SO4沉淀,凝胶过滤,DEAESephadexA－51,和羟基磷灰石层析,分离出1种β－葡萄糖苷酶（βG）,3种内切纤维素酶（EGⅠ,EGⅡ,EGⅢ）,其相对分子质量分别为1．062×105,2．51×104,2．95×104,2．25×104,最适pH为6．0,5．5,5．5,5．0,最适反应温度为10,45,45,50℃．这些酶能被Ag+,Hg2+抑制,能被Co2+,Mn2+,Ni2+轻微激活．此酶系均为糖蛋白,含糖量分别为12％,12％,10％,13％．     

猪肝铜锌超氧化物歧化酶的分离纯化与理化性质研究

利用硫酸铵盐析分级分离、乙醇．氯仿沉淀除杂、丙酮再沉淀分级得到含铜锌超氧化物歧化酶（CuZnSOD）的粗酶液,通过DEAE-52离子交换层析和G-75凝胶层析实现了CuZnSOD的分离纯化,得到电泳纯产品CuZnSODI对猪肝CuZnSOD的理化性质、酶学特征和光谱性质进行了研究．     

里氏木霉纤维素酶系的分离及其酶学性质

采用两级超滤、DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析、CM-Sepharose FF阳离子交换层析和Sephadex G-100凝胶渗透层析等分级纯化步骤,从里氏木霉纤维素酶系中分离纯化得到电泳纯的3个内切葡聚糖酶组分EGⅠ、EGⅡ和EGⅢ,2个外切葡聚糖酶组分CBHⅠ和CBHⅡ和1个β-葡萄糖苷酶组分,它们对各自底物的比活力分别为176.35、153.96、64.22、16.86、4.82、31.00 IU/mg,米氏常数分别为6.70、8.46、13.22、1.37、3.46、2.20 mg/mL.同一类酶组分的米氏常数Km越大,转换数Kcat越小.分离纯化所得EGⅠ、EGⅡ、EGⅢ、CBHⅠ、CBHⅡ和GB等酶组分的分子量分别为50、46、25、65、58、75 kDa.     

绿色木霉NUST~(996)发酵产纤维素酶的提纯和性质分析

该文研究了绿色木霉发酵产纤维素酶的情况。对NUST996的纤维素酶酶活力和发酵参数进行了测定 ,通过葡聚糖SephadexG - 2 0 0柱层析对纤维素酶进行了分离提纯 ,表明其主要含 2种组分。通过红外、紫外光谱等手段进一步分析其组成 ,对其中CMC(羧甲基纤维素酶 )组分对热及 pH的稳定性进行了分析 ,并测定了其米氏常数。     

一株产纤维素酶绿色木霉的筛选及发酵条件优化

从土壤中筛选到一株具有较高纤维素酶活性的绿色木霉，对其液态发酵条件进行了优化．以羧甲基纤维素钠为碳源，含量0．75％，(NH4)2SO4为氮源，含量0．4％，250mL三角瓶20％装量，5％接种量，培养基初始pH为4，28℃，180r／min培养96h，优化后发酵液中Cx酶活达到277.7U／mL发酵液．     

宇佐美曲霉Y—26纤维素酶的纯化及酶学性质

从宇佐美曲霉 (A .usamii)固态发酵物中提取纤维素酶。粗酶液经硫酸铵盐析除去大量杂蛋白 ,然后通过 2次SephadexG - 2 0 0柱层析纤维素酶中CMC酶 ,提纯倍数可达 5 72。酶学研究表明 ,纤维素酶中CMC酶最适作用温度为 6 0℃ ,最适作用pH为 4.0 ,30～ 6 0℃区间酶活力较稳定 ,在pH为 3 .0～ 5 .0范围内 ,5 0℃保温 30min ,能保持 90 %的酶活力。红外光谱分析表明 ,纤维素酶在O—H ,N—H ,C—H ,CO有吸收带。CMC酶的Km、vmax 值分别为 0 10 g/ml、0 40mg/(ml·min)。     

硫酸软骨素酶的分离纯化及部分性质

通过细胞破碎、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose FF和Sephacryl S-200柱层析,首次从粘质沙雷氏菌中提取出硫酸软骨素酶.纯化倍数11.46,比活为81.23 U/mg蛋白.提取液经PAGE和SDS-PAGE检测,呈现一条带.该酶相对分子质量为71.2 KD,亚基分子质量为35 KD,该酶为2个相同亚基组成.等电点为7.19,最适pH值7.5,最适温度为40 ℃,以4-硫酸软骨素为底物测得Km值为3.98×10^-4 mol/L.     

接骨草蔗糖酶同工酶的分离纯化及其部分性质研究

从接骨草幼叶中提取的蔗糖酶粗酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析纯化，得到3种同工酶．对3种同工酶进行SDS-PAGE和IEF电泳均显示一条蛋白带，其亚基分子量分别为45．8KD，44．3KD，43．2KD；等电点分别为pH4．0，pH3．8，pH3．75．凝胶过滤测得3种同工酶全酶分子量分别为91．2KD，89．1KD，87．4KD，表明3种同工酶均由2个相同亚基组成，其表观Km分别为30mmol／L，57.1mmol／L，65mmol／L;Vmax分别为98μg／min，48μg／min，35μg／min．同工酶Ⅰ和同工酶Ⅲ在pH4．4～5．0时有最大活性，同工酶Ⅱ则在pH3．9～4．2时有最大活性．3种同工酶均在pH3-6范围内比较稳定．同工酶Ⅰ和同工酶Ⅱ在48～52℃有最大活性，同工酶Ⅲ在50～55℃有最大活性．3种同工酶均在50℃以下有较好的稳定性．     

香椿叶水溶性多糖初步纯化及清除自由基活性研究

对香椿叶粗多糖进行了提取,测定了其蛋白质含量,并对其进行了初步纯化,然后对粗多糖和初步纯化多糖进行了抗氧化实验,测定了不同质量浓度的香椿粗多糖和初步纯化多糖对自由基的清除作用．纸层析、GC分析结果表明：香椿叶初步纯化多糖的单糖组成为Xyl,Ara,Rha,Gal,Glc,Gal—A,Man;摩尔比为1．0：3．7：1．3：9．0：2．7：10．0：0．7．抗氧化实验结果表明：不同质量浓度的粗多糖和初步纯化多糖都能有效地清除羟自由基和超氧阴离子,而且初步纯化多糖比粗多糖的清除效率要高,香椿粗多糖对R·有清除作用,而初步纯化多糖在实验规定的浓度范围内对R·却没有清除作用．     

黏细菌分离纯化的研究进展

黏细菌属于原核生物,作为一种可产生丰富而有用的次级代谢物的微生物类群而受到研究者青睐,由于分离纯化黏细菌相当困难和耗时,并且难于培养,同时方法特殊,极大地限制了对这类微生物物种资源的开发,其应用研究较其他的微生物类群更为落后.所以,探索更好的分离纯化黏细菌的方法非常重要.对黏细菌的分离、纯化、纯度检验和菌种保藏等方面已有研究做了较为全面的综述,希望能对研究黏细菌者有一些帮助.