产生埃博霉素的纤维堆囊菌的分子筛选

为寻找潜在的产生埃博霉素(epothilone)的纤维堆囊菌(Sorangium cellulosum),以埃博霉素生物合成基因簇中的epoA,epoC和epoK基因为探针,分别对60株不同土壤样品来源的纤维堆囊菌的DNA样品进行PCR筛选.筛选结果得到了7株阳性菌株,进一步对其进行发酵和粗提物的HPLC-MS分析,检测结果显示3株菌XMU-Nc-03,XMU-So-64和XMU-So-112能产生埃博霉素B,其中XMU-So-112的产量最高.本实验在筛选产埃博霉素活性菌株的同时,还建立了一个快速可靠的发现埃博霉素产生菌的方法.     

对甲苯磺酸钠对埃博霉素产量的影响

为研究对甲苯磺酸钠(p-TSA-Na)对于埃博霉素产量的影响,探讨产量最佳时对苯磺酸钠的最优添加浓度和产量稳定性,分别向培养基内添加7个不同浓度的对甲苯磺酸钠溶液,进行发酵培养,以埃博霉素生物合成的产量为依据,确定最佳添加浓度、培养基体积、添加对甲苯磺酸钠浓度的范围。结果表明:对甲苯磺酸钠浓度在1~32 mmol/L范围内与埃博霉素生物合成产量均呈正相关关系,4~16 mmol/L范围内最明显,培养基内初始浓度达24 mmol/L时,对埃博霉素生物合成产量的促进作用最大,S-腺苷甲硫氨酸合成酶比活力增大22%~75%,说明对甲苯磺酸钠对埃博霉素生物合成产量的增大有促进作用。     

纤维堆囊菌发酵产生埃博霉素条件的优化

埃博霉素是纤维堆囊菌产生的一种具有抗肿瘤活性的次级代谢产物．文中研究了纤维堆囊菌DSM11999发酵合成埃博霉素的条件．结果表明：采用对数生长期后期的菌种在25℃进行发酵，将马铃薯淀粉和胰蛋白胨分别作为碳源和氮源，添加少量的无机盐MnCl4，EDTA—Fe—Na，K2HPO4，ZnCl2，CuSO4和生长促进因子丙氨酸，可使埃博霉素的产量提高22．5％．     

灵芝免疫调节蛋白LZ-8及云芝免疫调节蛋白FIP-tvc对几种癌细胞系的抑制活性检测

在体外培养的人非小细胞肺癌A549细胞、人胃腺癌BGC-823细胞、人结肠癌HCT116细胞、人肝癌Hep 3B细胞、人宫颈癌Hela细胞中加入不同浓度的酵母异源表达的LZ-8或FIP-tvc,培养24 h后显微镜下观察细胞形态变化,并用CCK8试剂盒检测细胞存活率,以用来检测灵芝免疫调节蛋白LZ-8及云芝免疫调节蛋白FIP-tvc对几种癌细胞生长抑制能力.结果显示,LZ-8和FIP-tvc在5～10μg/mL浓度时使A549、BGC-823、Hela和Hep 3B细胞贴壁性变差,且CCK8结果显示前3种细胞的存活率有不同程度的降低(80%～95%存活率),而在20μg/mL浓度时FIP-tvc对Hep 3B细胞的存活率开始有明显抑制效果(89%存活率),但对HCT 116细胞的形态无影响,对其存活率也无抑制作用.     

蝙蝠葛碱增强博莱霉素A5对肿瘤细胞的毒性

应用增殖抑制方法发现,无生长抑制作用的0.5mg ·L~(-1)的蝙蝠葛碱(Dau)使博莱霉素A_5单独对小鼠肉瘤S-180V细胞作用的I_(C50)值从2.1mg·L~(-1)降低到1.3mg·L~(-1),无抑制作用的1 mg·L~(-1) Dau使博莱霉素A_5单独对人喉癌HEP2细胞作用的I_(C50) 值从0.33 mg·L~(-1)降低到0.1 mg·L~(-1).克隆形成法证明:无细胞毒性的10 mg·L~(-1)的Dau明显增强博莱霉素A_5对HEP2细胞毒性.TFP法证实,有一定生长抑制作用的Dau对HEP2细胞内活化钙调素有影响.结果表明:蝙蝠葛碱有一定的增强博莱霉素A_5对肿瘤细胞的毒性.     

博安霉素及其单克隆抗体偶联物对裸鼠移植的人大肠癌的作用

大肠癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一,对大多数化疗药物均不敏感。本研究用裸鼠移植的人大肠癌动物模型,观察博安霉素及其与单克隆抗体R19偶联物对人大肠癌生长的抑制作用。在裸鼠可以耐受的剂量下,博安霉素对移植的人大肠癌(人结肠癌HT-29和人盲肠癌HCe-8693)均有明显的抑制作用。博安霉素15mg/kg和10mg/kg对人结肠癌HT-29的抑制率为92％和89％(P<0.01)对肓肠癌HCe-8693的抑制率分别为92％和190％(P<0.01)。博安霉素MMC和5-Fu在相当于l/9 LD50的剂量进行比较,博安霉素对HT-29的抑制率为82％;MMC为53％;而5-Fu仅为12％。博安霉素对人大肠癌的抑制作用明显较MMC(P<0.05)和5-Fu(P<0.01)为强。用人盲肠癌HCe-8693细胞免疫Lou/C大鼠,用大鼠杂交瘤技术获得抗人大肠癌单抗R19。用免疫组织化学的方法检测了R19单抗对肠癌的特异性。用ABC法检测,发现R19对裸鼠移植的人结肠癌HT-29和人结肠癌的外科手术切块呈阳性反应,对人胚脑、胸腺、淋巴结、肺、脾和血细胞等呈阴性,对肾小管上皮细胞显示弱阳性。用DextranT-40为中介体的方法连接大鼠R19和博安霉素形成的偶联物兼有二者生物学活性。实验共设5组,各治疗组的剂量以博安霉素计算为1mg/kg,每周二次,共8次,最后通过称量瘤重计算各组的抑制率,游离博安霉素为52％;R19与博安霉素混合物为34％;无关抗体M_3与博安霉素偶联物为48％;R19与博安博素偶联物为90％,显著地高于其它几组(P<0.01)。综上所述,博安博素及其与R19的偶联物对裸鼠移植的人大肠癌均有明显的抑制作用,尤其是博安霉素和单抗R19的偶联物在同等剂量下对肿瘤的抑制率显著地高于游离博安霉素。     

超临界萃取维生素E对Hela细胞凋亡作用

为了探讨超临界萃取V。对Hela细胞凋亡效果及其作用机理,以Hela细胞作为实验材料,从细胞生长抑制率、细胞形态学、TUNEL等方面研究超临界萃取Ve对Hela细胞凋亡效果和作用机理。实验结果表明,超临界萃取维生素E对人子宫颈癌Hela细胞生长有抑制作用,且呈时间和剂量效应。超临界萃取Ve影响Hela细胞的主要机理是下调癌基因Bcl-2。     

自噬对肝癌SMMC-7721细胞侵袭迁移能力的影响

为探讨自噬对照射过程中肝癌SMMC-7721细胞侵袭和迁移能力的影响及其潜在的作用机制,将肝癌SMMC-7721细胞分为6组,分别为阴性对照(NC)组、8 Gy X-线照射(IR)组、自噬激活剂雷帕霉素(Rapa)组、自噬抑制剂三甲基腺嘌呤(3-MA)组、照射+雷帕霉素(IR+Rapa)组和照射+三甲基腺嘌呤(IR+3-MA)组,利用划痕实验和Transwell实验检测自噬对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响;用CCK8实验检测照射、雷帕霉素和3-MA对肝癌细胞增殖的影响;用蛋白免疫印迹(Western blot)检测N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和LC3B蛋白表达情况。研究结果显示,照射可增强肝癌SMMC-7721细胞侵袭迁移的能力(P<0.05),同时,照射可抑制细胞的增殖能力(P<0.05);雷帕霉素激活自噬可增强细胞的侵袭迁移能力(P<0.05),3-MA抑制自噬可抑制细胞侵袭迁移和细胞的增殖能力(P<0.05)。照射可上调N-cadherin、Vimentin表达水平(P<0.05),激活或抑制自噬可分...     

(R)-Roscovitine诱导Hela细胞凋亡的分子机制

以Hela细胞为模型,探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(R)-roscovitine对Hela细胞凋亡诱导的可能途径,进一步了解其诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制.结果显示:(R)-roscovitine明显抑制Hela细胞的增殖,在17.5～140.0μmol.L-1浓度作用12,24,48h后,Hela细胞的增殖抑制率分别为8.48%～33.76%,25.19%～86.41%和47.90%～88.08%;典型凋亡的DNA ladder被诱导,且凋亡率随药物浓度的增加而升高;经半胱天冬酶-3(caspase-3)特异性抑制剂Ac-DEVD-CHO或半胱天冬酶泛抑制剂Z-VAD-FMK处理后,(R)-roscovitine对Hela细胞凋亡的诱导被抑制约20%,说明半胱天冬酶依赖的途径参与了(R)-roscovitine对Hela细胞凋亡的诱导;(R)-roscovitine诱导凋亡诱导因子(AIF)从线粒体释放细胞核中,且Ac-DEVD-CHO和Z-VAD-FMK没有抑制AIF的释放,这意味着(R)-roscovitine能够诱导Hela细胞凋亡,其机制是通过caspase与非caspase依赖两种途径.     

蝙蝠葛碱提多糖对Hela细胞增殖的影响

利用蝙蝠葛根提取多糖成分,并应用噻唑蓝还原法(MTT)检测了蝙蝠葛多糖对Hela细胞增殖的抑制作用及细胞毒性作用.结果表明:蝙蝠葛碱提多糖在质量浓度较低时,对Hela细胞的增殖有促进作用,此作用在质量浓度为0.25 mg/mL时达到最大,此时Hela细胞增殖率为149％.随着浓度的进一步加大,Hela细胞的生长逐渐受到...     

EVn-50抑制人宫颈癌Hela细胞增殖及诱导凋亡的研究

目的探讨EVn-50对体外培养的人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞,台盼蓝拒染法检测EVn-50对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响;平皿克隆形成法、软琼脂克隆形成法测定EV-n50对人宫颈癌Hela细胞锚定依赖性生长和锚定非依赖性生长作用的影响;AO／EB染色荧光显微镜观察EVn-50诱导Hela细胞凋亡的形态学改变;DNA凝胶电泳确证EVn-50诱导Hela细胞凋亡作用。结果EVn-50对体外培养人宫颈癌Hela细胞的增殖具有显著抑制作用,呈浓度依赖性。EVn-50可诱导Hela细胞凋亡,AO／EB染色可见典型凋亡小体;DNA凝胶电泳在EVn-50浓度100μg／mL作用48h出现典型“梯形”DNA条带。结论EVn-50具有抑制人宫颈癌Hela细胞增殖并诱导细胞凋亡作用。     

棉酚对宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的影响

通过研究棉酚对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制与凋亡作用,探讨棉酚的抗肿瘤作用机制。本实验采用MTY法检测棉酚对Hela细胞生长抑制率的影响;采用AO／EB双染色法、流式细胞仪进行细胞凋亡形态的观察和凋亡率的检测;免疫细胞化学法检测Bcl-2、Bcl—xL蛋白表达水平。研究结果表明棉酚对Hela细胞增殖有显著抑制作用,且呈剂量及时间依赖性;棉酚能明显诱导Hela细胞凋亡;棉酚降低Hela细胞内Bcl-2、Bcl—xL蛋白表达水平,表明棉酚可抑制宫颈癌Hela细胞的增殖并诱导细胞凋亡。     

新功能人造生物器件的构建及集成/人工细胞的代谢网络改造与系统优化

该研究采用合成生物学的理念和方法,结合代谢工程的手段,理性设计、构建、优化了埃博霉素在天蓝色链霉菌和紫杉醇、达玛烯二醇在酵母中的异源合成模块。在该研究中,建立了高通量萜类合成途径分析平台。通过基因替换、蛋白表达水平微调控对大肠杆菌MEP途径进行改造,从而构建适合IPP和DMAPP生产的底盘细胞。今年主要的工作为构建大片段DNA合成与组装技术平台,完成了体外全合成全长的简适线粒体DNA分子并完成了测序鉴定。分析了细胞代谢与线粒体形态的变化规律,为日后开展简适线粒体DNA导入后细胞代谢变化分析提供了技术基础。     

两组浓度的蛋白酶体抑制剂MG132诱导人宫颈癌细胞Hela凋亡

为了探讨不同浓度蛋白酶体抑制剂MG132在诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡过程中作用,分别以两组浓度的蛋白酶体抑制剂MG132处理人宫颈癌细胞Hela,通过MTT法检测Hela细胞活力,应用AnnexinⅤ和PI双染的细胞流式法检测Hela细胞凋亡率,应用Western blotting和酶标仪法检测Hela细胞内Caspase-3活性变化的情况.结果表明:低浓度MG132诱导Hela细胞凋亡不明显,高浓度MG132诱导Hela细胞凋亡明显;不同浓度蛋白酶体抑制剂MG132诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的程度存在明显差异.     

加拿大蓬挥发油对Hela细胞的体外抗肿瘤活性初探

为了探讨加拿大蓬挥发油的体外抗肿瘤活性,采用MTT比色法探究挥发油对人宫颈癌Hela细胞的抑制作用,并采用AO/EB染色法观察Hela细胞在挥发油作用下的形态变化.结果表明:加拿大蓬挥发油对Hela细胞生长具有抑制作用,细胞活力随着处理浓度的升高和处理时间的延长而降低,其中处理8、24和48 h的IC50分别是22.72、18.06和6.78 mg/L,在加入泛caspase抑制剂(Z-VAD-FMK)后,这种抑制作用得到缓解,24 h的IC50上升至29.9 mg/L,表明该挥发油可能激活了Hela细胞中的caspase蛋白酶活性.AO/EB染色观察发现,加拿大蓬挥发油处理Hela细胞后使其呈现典型凋亡形态的特征.由此推断,加拿大蓬挥发油可能是通过诱导Hela细胞的凋亡来抑制细胞增殖.     

博莱霉素肺损伤大鼠细胞凋亡及bcl—2／bax基因的表达

目的：探讨细胞凋亡与博莱霉素诱导大鼠早期肺纤维化及bax,bcl-2对博莱霉素大鼠肺纤维化细胞凋亡的作用。方法：通过复制博莱霉素大鼠肺纤维化模型,采用TUNEL、免疫组织化学、原位杂交及透射电镜等技术,观察博莱霉素大鼠肺组织细胞凋亡的变化及bax,bcl-2,bcl-2mRNA和蛋白的表达。结果：博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化细胞凋亡明显增加,肺上皮细胞bax蛋白表达明显上调,bcl-2mRNA及蛋白表达明显减弱,间质细胞bcl-2mRNA及蛋白表达增加。结论：肺组织细胞凋亡及bcl-2表达下调可能参与博莱霉素诱导大鼠肺纤维化的发生,凋亡相关基因bax,bcl-2mRNA及蛋白参与博莱霉素诱导大鼠肺纤维化细胞凋亡的调控。     

枸杞多糖硫酸酯化修饰及其对Hela细胞的体外抑制作用

通过L_9(3)~4正交设计对氯磺酸-吡啶法制备枸杞多糖硫酸酯(SLBP)的修饰条件进行优选,最佳条件为V(氯磺酸):V(吡啶)=1:4,反应温度80 ℃,反应时间2 h.枸杞多糖硫酸酯中硫的质量分数可达17.23%,硫酸基取代度可达1.935.以紫外和红外光谱对产物加以表征,并用MTT法测定了对Hela细胞体外生长的抑制作用.在25～200 mg/L内,枸杞多糖(LBP)对人宫颈癌(Hela)细胞生长几乎没有抑制作用,而枸杞多糖硫酸酯对Hela细胞的抑制率可达31.71%.用本方法所制备的枸杞多糖硫酸酯具有较高的含硫量和硫酸基取代度,对Hela细胞生长具有明显的抑制作用,其抑制率与硫酸基取代度和用药剂量呈正相关.     

Etoposide通过线粒体路径诱导Hela细胞凋亡

目的研究Etoposide诱导Hela细胞凋亡的分子机制.方法 Etoposide处理含有10%胎牛血清DMEM培养液培养的Hela细胞;Caspase-3活性检测试剂盒检测Etoposide处理Hela细胞Caspase-3活性;激光共聚焦显微镜和Western blot技术检测细胞色素C从线粒体的释放.结果 Etoposide能够导致Hela细胞凋亡;Etoposide处理Hela细胞内的Caspase-3活性增加;Etoposide诱导细胞色素C从线粒体释放到细胞质.结论 Etoposide通过线粒体路径诱导Hela细胞凋亡.     

4HPR诱导Hela细胞凋亡

目的：实验结果证明4HPR对Hela细胞具有较强的抑制作用,本文从细胞凋亡角度研究4HPR抑制Hela细胞生长的机理。方法：采用电子显微镜、细胞DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪等方法,分析4HPR诱导Hela细胞凋亡的形态学、生化学及细胞生物学改变特征。结果：电子显微镜下：细胞固缩、核膜扭曲、核染色体聚集成块并靠近核膜;细胞DNA被降解,在1．5％琼脂糖凝胶电泳上出现典型的阶梯状图谱（DNALadder）;流式细胞仪检测出现大量亚二倍体细胞核型峰,二倍体细胞峰减少。结论：上述结果表明,4HPR可诱导Hela细胞凋亡。4HPR抑制Hela细胞生长的机理之一是诱导读细胞凋亡。     

Hela细胞中突变PSF蛋白对细胞增殖迁移及可变剪接的影响

PSF作为真核细胞中的抑癌蛋白,在Hela细胞发生基因突变导致其蛋白功能改变.为了阐明突变体PSF蛋白在肿瘤细胞的作用,本文分别采用siRNA干扰、细胞生长曲线、细胞划痕等实验检测muPSF对Hela细胞增殖及迁移的影响,半定量PCR实验分析PSF调控的下游靶基因的可变剪切情况.研究结果显示,当通过siRNA干扰muPSF的表达后Hela细胞的增殖迁移能力下降,高表达突变体PSF可增强Hela细胞的增殖与迁移,半定量PCR实验分析PSF下游调控基因显示muPSF可以改变增殖和迁移相关基因的可变剪接形式.因此,我们的实验证明,Hela细胞中muPSF通过调控下游靶基因的可变剪切影响Hela细胞的增殖和迁移能力.