抗人FXYD3单克隆抗体的制备与初步鉴定

【摘要】目的 制备抗人FXYD3单克隆抗体（McAb）并鉴定其生物学特性。方法 以固相合成法获得的FXYD3合成多肽与载体蛋白KLH偶联后免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗人FXYD3 McAb。用ELISA 、Western Blot、免疫组化技术对抗人FXYD3 McAb的亚型、效价、亲和力及特异性进行鉴定。结果 筛选出两段较好的优势抗原表位,分别为NDLEDKNSPFY和KFGQKSGHHPGETPPLITPGSA获得四株可稳定分泌抗人FXYD3 McAb的杂交瘤细胞株02A12C4、02F1E8、02E6B10与03A10E11,亚型鉴定重链均为IgG1,轻链为kappa链。间接ELISA法测定效价均在为1∶104以上。其中02F1E8效价为1∶105以上,亲和常数为3.11?08 L / mol。免疫组化分析显示了FXYD3均匀分布于肝癌细胞与人胰腺癌Bxpc-3细胞系细胞的胞膜上。结论 成功制备了四株抗人FXYD3 McAb,其中02F1E8纯度好、效价高及特异性强。为进一步研究FXYD3在肿瘤组织及细胞系中的表达及临床意义奠定了基础。     

人GrnE单克隆抗体的制备和鉴定

为了制备获得针对人Grn E单克隆抗体,将原核表达GST-Grn E蛋白作为免疫原,免疫Balb/c小鼠,经过融合及初步筛选,获得5株针对Grn E的单克隆细胞株.选取其中3株(1D5、2E1和3F7)制备腹水,并通过western blot和免疫荧光染色对该3株单克隆抗体进行鉴定.在此基础上,进一步对1D5和3F7两株单克隆抗体是否可以用于免疫沉淀实验进行了检测.上述实验表明,本研究成功制备了针对Grn E结构域的单克隆抗体,而且所制备的单克隆抗体具有良好的特异性.     

抗迟缓爱德华氏菌单克隆抗体制备及初步鉴定

用灭活迟缓爱德华氏菌菌株AL60306NA1免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗迟缓爱德华氏菌的McAb,获得3株可持续分泌抗迟缓爱德华氏菌McAb的杂交瘤细胞株3A7、4F11和4C9;腹水效价分别达到1.0×10-6、1.0×10-6和1.0×10-5;细胞亚型分别为IgG1、IgG2b、IgM.交叉反应结果...     

基因工程人表皮生长因子（rhEGF）单克隆抗体的制备与初步鉴定

以基因工程人表皮生长因子(rhEGF)为抗原,免疫BALB/c小鼠,将免疫的小鼠脾细胞与小鼠Sp2/0-Ag14骨髓瘤细胞进行融合,经多次筛选和再克隆化,获得3株能稳定分泌抗rhEGF单克隆抗体(McAbs)的杂交瘤细胞株.对该3株杂交瘤细胞小鼠腹水进行了抗体效价测定,结果显示在1×10-6～2×10-7之间.对上述3种杂交瘤单抗(分别命名为:AE-2A4,AE-2G5和AE-3E11)进行了特异性、抗原决定簇及相对亲和力测定.结果表明,它们都具有抗rhEGF高特异性;并分别抗两个不同抗原决定簇;相对亲和力大小次序为:AE-3E11>AE-2A4>AE-2G5.Ig亚类鉴定结果显示:AE-2A4,AE-3E11同为IgG1亚类,而AE-2G5为IgG2b亚类.确定AE-2A4单克隆抗体可用于制备高纯rhEGF.     

抗人肝癌单克隆抗体JHⅢ的制备及其生物学特性

用肝癌细胞株ＢＥＬ－７４０２脾内直接免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合，获得一株分泌肝癌单抗的杂交瘤细胞株ＪＨⅢ，其染色体众数为９０－１１０，单抗ＪＨⅢ系ＩｇＧ２ｂ亚类。杂交瘤细胞培养上清和腹水的效价分别为１：１０＾２～１０＾３和１：１０＾６以上。ＡＢＣ法证实它对肝癌组织有较好的相关性。ＩＦＡ法也证明它对肝癌细胞ＢＥＬ－７４０２有强的阳性反应，而对其他肿瘤细胞株和肿瘤组     

红曲橙色素对人胃腺癌细胞AGS诱导凋亡的作用

经分离纯化获得红曲霉发酵产品中的一种橙色素,通过HPLC-MS和NMR检测,确认为Monascorubrin,分子组成为C23H26O5.体外实验表明,该色素组分能有效抑制人胃癌细胞AGS的增殖,IC50值为7.98±0.71μmol·L-1.5μmol·L-1药物处理24h,93.70%AGS细胞进入凋亡前期.细胞凋亡程度与药物浓度呈正相关关系.该色素组分对AGS细胞生长抑制效果显著优于紫杉醇(P0.01),且对人正常胃上皮细胞(GES-1)的毒性作用较紫杉醇小(P0.05).     

抗鱼卵透明带单克隆抗体淋巴细胞杂交瘤的建立及初步鉴定

详细介绍了抗鱼（花鲢Anstichthysnobilis）卵透明带单克隆抗体淋巴细胞杂交瘤的制备及鉴定方法，用佛氏佐剂乳化热溶花鲢鱼卵透明带，然后免疫雌性BALB／C小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤Sp2／0融合产生杂交瘤，经3次再克隆后，用间接ELISA方法筛选出一株抗鱼卵透明带的单克隆抗体杂交瘤，经免疫双扩散试验测得该种单克隆抗体为IgG1，经过染色体检查知其染色体数目在86～108之间，为93.6±3.81，杂交瘤细胞染色体经检查发现有中间和亚中着丝点染色体，符合杂交细胞染色体特征。     

抗人绒毛膜促性腺激素（HCG）单克隆抗体的研制和特性分析

以HCG为抗原,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠Sp2/0—Ag14骨髓瘤细胞融合,经反复筛选和再克隆化,获得8株能稳定分泌抗HCG特异单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对其中6个高效价单抗进行了特异性和抗原决定簇检测,选出两个抗相距较远不同决定簇的单抗(2D_4,4F_4)作进一步特性分析。结果显示:免疫球蛋白亚类鉴定,2D_4为IgGl亚类,4F_4为IgG2a亚类;亲和力常数(K_(affi)),2D_4为5.41±0.94×10~(-10)mol/L,4F_4为1.37±0.33×10~(-9)mol/L。证实该两种单克隆抗体可用于研制有关临床诊断试剂盒。     

抗人生长激素单克隆抗体的制备及鉴定

本文运用B淋巴细胞杂交瘤技术得到了4株稳定分泌抗hGH羊克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对其特性进行了鉴定。其腹水滴度高达0.6～10×10~5,亲和常数在0.53～9×10~9 M~(-1)之间。4种单克隆抗体的相应抗原决定簇分属于 hGH 分子表面3个不同区域;除1种单克隆抗体与 hPL 有交叉反应外,其余与hPL和hPRL皆无交叉反应。另外,本文采用的微量免疫法也有一定的实用价值。     

Smurf2单克隆抗体的制备与鉴定

Smad泛素调节因子家族的两个E3泛素连接酶成员Smurf1和Smurf2 (Smad ubiquitin regulatory factor 1 and 2)具有至少80％的同源性.为了更好地研究它们的功能,需要获得一个能区分Smurf1和Smurf2的单克隆抗体.选取Smurf2与Smurf1蛋白序列中仅有的非同源区域序列作为抗原免疫Bal b/C小鼠,成功制备若干株能稳定分泌抗Smurf2抗体的杂交瘤细胞株.对所获得的单克隆抗体的效价和特异性等进行一系列检测,结果表明该抗体能特异性地识别过表达及细胞内源Smurf2蛋白.此外该抗体能被应用于Western blot和免疫荧光实验,从而为深入研究Smurf2的细胞生物学功能提供了良好的实验基础.     

培养杂交瘤细胞制备单克隆抗体的工艺过程

研究了在生物反应器中培养RT-28杂交瘤细胞分泌抗A红细胞单抗的工艺过程,包括搅拌剪切、通气方式及溶氧水平、连续灌注稀释率等条件,对细胞生长及产物分泌、葡萄糖代谢及乳酸产生的影响,得出了合适的工艺条件为:温度37℃,溶解氧10～60%空气饱合度,搅拌转速30～60r/min,pH7.0～7.2。细胞密度达2.0×10~6cells/mL,单抗滴度述1:256。     

甲肝病毒单克隆抗体的研制与应用

本研究成功制备了抗甲肝病毒 (HAV)McAb ,为甲肝研究和诊断提供了大量高效价标准化抗体 .用细胞培养的NJ 3株HAV免疫Balb/c小鼠 ,经细胞融合技术、IFA筛选和有限稀释克隆 ,建立了 5株能稳定分泌抗HAVMcAb的杂交瘤细胞 .经鉴定 ,其上清和腹水的抗体效价分别为 0 5× 10 2 ～ 1× 10 3及 1× 10 3～ 2× 10 5.用免疫印迹法和间接ELISA分析 ,这 5株抗体分别能与HAV的 3个抗原位点结合 .在HAAg检测中 ,McAb的应用简化了操作步骤     

镉螯合物特异性单克隆抗体的制备与鉴定

为了获得镉螯合物特异性单克隆抗体, 以异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸为双功能螯合剂连接镉离子与钥孔戚血蓝素,牛血清白蛋白合成了免疫原与包被抗原. 经过抗原鉴定,免疫Balb/c小鼠, 取小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤, 经筛选和2次克隆化, 从制备的腹水中获取单克隆抗体. 用酶联免疫吸附测定法鉴定单克隆抗体3A9D9G7的特性,腹水效价为4×10-4, 单抗亚类为IgM, 轻链为κ型, 亲和常数为1.44×1010 mol/L, 其他金属螯合物的交叉反应低于0.9%, 表明该单克隆抗体能特异性识别Cd-EDTA, 为环境样品与食品中镉残留的快速检测提供了工具.     

重组人源抗血管内皮生长因子单克隆抗体的制备及鉴定

通过优化密码子获得带有信号肽的人源抗血管内皮生长因子（VEGF）抗体的重链和轻链DNA序列, 分别构建表达载体pcDNA VEGFH和pcDNA VEGFV, 将表达载体共转染HEK 293细胞后, 与C6胶质瘤细胞共培养, 并将所得蛋白进行分离纯化. 实验结果表明: pcDNA VEGFH和pcDNA VEGFV共转染HEK 293F细胞, 可显著抑制C6细胞增殖（P<0.01）; 转染24~144 h后的细胞培养上清液中均有蛋白表达; 所得纯化蛋白和标准品一致; 纯化所得抗体蛋白能明显抑制C6细胞增殖（P<005~001）, 与标准品抑制效果相似.     

重组人源抗血管内皮生长因子单克隆抗体的制备及鉴定

通过优化密码子获得带有信号肽的人源抗血管内皮生长因子（VEGF）抗体的重链和轻链DNA序列, 分别构建表达载体pcDNA VEGFH和pcDNA VEGFV, 将表达载体共转染HEK 293细胞后, 与C6胶质瘤细胞共培养, 并将所得蛋白进行分离纯化. 实验结果表明: pcDNA VEGFH和pcDNA VEGFV共转染HEK 293F细胞, 可显著抑制C6细胞增殖（P<0.01）; 转染24~144 h后的细胞培养上清液中均有蛋白表达; 所得纯化蛋白和标准品一致; 纯化所得抗体蛋白能明显抑制C6细胞增殖（P<005~001）, 与标准品抑制效果相似.     

天花粉蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系的制备及鉴定

将小鼠骨髓瘤细胞（SP2／0细胞）与经TCS免疫过的小鼠脾细胞融合,融合后的细胞悬浮于HAT培养液中进行选择性培养,挑选可以分泌TCS单克隆抗体的细胞系,再经克隆化为单克隆细胞系。用间接酶联免疫吸附法检测此细胞系分泌单克隆抗体情况。经细胞融合和2次克隆化后,获得1株可以稳定分泌TCS单克隆抗体杂交瘤细胞系,ELISA检测结果为阳性。获得了可以稳定分泌天花粉蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系,为TCS鉴定、应用奠定良好的基础。     

脊髓灰质炎病毒I型单克隆抗体的制备

目的: 为建立脊灰病毒Sabin株I型特异的单克隆抗体．方法:以Vero细胞增殖病毒并用蔗糖密度梯度离心法纯化后,用病毒免疫SPF级Balb/c小鼠．取小鼠免疫脾淋巴细胞与SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞进行细胞融合,通过间接 ELISA 法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞,并用有限稀释法克隆化．用细胞培养法制备脊灰病毒单抗,并以中和试验测定单抗效价．结果:获得了8株分泌抗脊灰病毒Sabin株I型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中1株G8G7能够稳定分泌抗体．间接ELISA 法测得单抗的效价为1∶8,中和试验测得中和抗体的效价为1∶58．结论:G8G7分泌的抗体为抗脊灰病毒Sabin株I型特异的单克隆抗体.