产朊圆酵母尿酸酶形成条件研究

择到一株产尿酸酶较高水平的产朊圆酵母（Torula utilis Henneb）．对此菌株尿酸酶形成条件的研究表明：蔗糖、葡萄糖是酶形成的适合碳源;蛋白胨和酵母膏是产酶的适合氮源,另添加无机氮源对产酶略有帮助作用;尿酸、黄嘌呤和乌嘌呤对酶形成起诱导作用,底物尿酸是适宜的诱导物．尿酸酶形成最适培养基组成为（％）：蔗糖3,蛋白胨2,酵母膏0．5,（NH4）2SO40．05,尿酸0．05,KCl0．04,Pb^2＋、Fe^3＋、Hg^2＋、Mg^2＋、Ag^＋、Ca^2＋、Zn^2＋不利于产酶．另对培养条件做了优化探索：最适pH为6．0,在250mL三角瓶中装30mL培养液,接种量10％,在200r／min的旋转摇床上28℃振荡培养23h．     

朊圆酵母尿酸酶的基本特性研究

研究了尿酸酶分离纯化条件和pH、温度、底物浓度、一些有机和无机试剂对尿酸酶酶促反应速度的影响.研究结果表明,用Triton X-100及巯基乙醇处理细胞悬液(pH 8.5),再用超声波处理破碎细胞效果最佳.硫酸铵沉淀尿酸酶的最佳浓度为75%.用Phenyl-Sepharose CL-4B疏水层析和Xanthine-agarose亲和层析两步纯化步骤可获得理想纯度的酶制剂.在一定的条件下,尿酸酶的最适pH和酸碱稳定pH范围分别为8.5和5.0~12.最适温度为37℃;热稳定性较好,在50℃处理30 min时     

朊圆酵母Y0401尿酸酶的基本特性研究

研究了尿酸酶分离纯化条件和pH、温度、底物浓度、一些有机和无机试剂对尿酸酶酶促反应速度的影响.研究结果表明,用Triton X-100及巯基乙醇处理细胞悬液(pH 8.5),再用超声波处理破碎细胞效果最佳.硫酸铵沉淀尿酸酶的最佳浓度为75%.用Phenyl-Sepharose CL-4B疏水层析和Xanthine-agarose亲和层析两步纯化步骤可获得理想纯度的酶制剂.在一定的条件下,尿酸酶的最适pH和酸碱稳定pH范围分别为8.5和5.0～12.最适温度为37℃;热稳定性较好,在50℃处理30 min时活性保持90%,在60℃处理30min时活性仍保持80%.在最适条件下,该酶催化尿酸的米氏常数(Km)为3.34×10-5mol/L.一些金属离子和有机化合物对酶活性的影响也进行了研究.     

产朊圆酵母(Torula utilis Henn 2.281)尿酸酶快速提取法的研究

近年来,种类繁多的细胞破碎技术在迅速发展的生物工程领域占有越来越重要的地位．酵母细胞由于其细胞壁的特殊结构,较难破碎,从而限制了它的应用前景．对此,前人曾经进行了广泛而深入的研究：Asenjo等人对酵母细胞的酶溶过程中温度、pH、酶用量及使用次序等方面进行了深入的研究．     

产朊假丝酵母(Candida utilis)尿酸酶的基本特性

产朊假丝酵母尿酸酶通过由DEAE-sepharose和Xanthine-agarose等层析纯化.纯化酶经SDS-PAGE显示单一蛋白带,HPLC显示纯度为97.5%.其相对分子质量为127 kDa,变性SDS-PAGE表明该酶的表观分子质量为33 kDa.该酶具有较强的酸碱稳定性和热稳定性,最适pH为8.5,最适温度为40.0℃.在最适条件下测得其Km为35.0 μmol/L.某些金属离子对酶活性的研究结果表明,Co3 ,Pb2 ,Mn2 及EDTA,NEMI对尿酸酶活性有抑制作用,Mg2 ,Triton X-100对尿酸酶活性略有激活作用.     

以啤酒洗槽废水为主料产朊圆酵母液体发酵的研究

以啤酒洗槽废水为主料通过单因素优选和正交试验法对产朊圆酵母进行液体发酵培养基的筛选与发酵条件的确定，经方差分析结果最佳培养基为2^oBe糖度的啤酒洗槽废水，豆饼粉0.5%,葡萄糖2％，MgSOr.7H2O0.05%,KH2PO40.1%。最佳发酵条件为时间18h，温度28℃，转数150r/min，装量100mL/250mL三角瓶，pH5.0。干菌体系累量为20.12g/L。     

产朊假丝酵母种子液培养基的优化

采用单因素及正交实验,对产朊假丝酵母的培养基组成(麦汁、酵母浸出粉、尿素、无机盐)进行优化,结果表明:以麦汁浓度6.5°Bé,酵母浸出粉0.08%,尿素0.12%,K2HPO40.06%,CaCl20.025%为最佳培养基组成,在此条件下,酵母细胞数可达3.2×108.mL-1.     

产朊假丝酵母对铜离子的抗性与吸附能力

一定条件下，用含不同浓度ＣｕＳＯ４培养基培养产朊假丝酵母。实验结果，当ＣｕＳＯ４浓度高达１０ｍｍｏｌ／Ｌ时，菌体生长被完全抑制，产朊假丝酵母对铜离子有很强耐受力。     

脂蛋白酯酶的分离纯化及其部分性质研究

将Candida rugosa用橄榄油诱导培养,所得上清液依次经过截留分子量10 000中空纤维柱浓缩,85%硫酸铵沉淀,然后经过DEAE-Sepharose F.F.离子柱和Phenyl Sepharose CL-4B柱进行交换层析和疏水层析,得到了活力达6.04 U/mg的脂蛋白酯酶,纯化倍数和回收率分别为13.8倍6.6%。所得纯化酶经还原和非还原SDS-PAGE分析为单一蛋白染色带,HPLC显示纯度为95%以上。该酶的最适温度为40℃～50℃之间,最适pH为7.5,具有较强的热稳定性和酸碱稳定性,在最适温度和pH条件下该酶Km值为3.4×10-4mol/L。     

产朊假丝酵母细胞和细胞壁对铜离子吸附能力观察

通过比较产朊假丝酵母细胞与分离纯化的细胞壁对铜离子吸附能力差异,探讨了细胞壁在酵母吸附重金属离子过程中的作用。结果表明,细胞壁吸附的铜离子量通常是细胞吸附量的50% 以上。说明细胞壁是酵母吸附重金属离子的主要部位。     

响应面法优化产朊假丝酵母的枇杷酒降酸工艺

采用响应面法优化产朊假丝酵母CU-6的枇杷酒降酸工艺,应用中心组合Box-Benhnken实验设计进行响应面分析,建立数学模型.结果表明:经优化后的产朊假丝酵母CU-6降酸最佳工艺参数SO2质量浓度为50mg·L-1,酒精度为7.8%,残糖质量浓度为4.3g·L-1,在苹果酸质量浓度为4.5g·L-1,接种量为1.5%,发酵温度为24℃,发酵周期为5d的条件下,枇杷酒的理论降酸量可达到1.82g·L-1.采用优化后的工艺枇杷酒的降酸量达到(1.80±0.02)g·L-1.     

基因工程菌产植酸酶(phytA)的纯化及性质初步研究

基因工程酵母菌Y8经发酵，硫酸铵分级沉淀，凝胶过滤层析及阴离子交换层析分离纯化，获得了电泳纯的植酸酶（PhytA)。此酶的分子量约为69.5kD,pI为4.5，最适pH为2.4，最适温度为65℃。与原始出发菌株相比，其最适pH值及等电点相似，但分子量增大，耐热性显著提高。     

猪肝胆绿素还原酶的纯化及某些性质的研究

通过高速离心(105,000×g),硫酸铵分级分离、NADP—agaxose层析和SephadexG—100层析,从猪肝的胞浆中分离获得胆绿素还原酶.经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,该酶达到均一程度,分子量约为47,000道尔顿.酶被纯化4200倍,回收率为38%.这种酶利用NADPH和NADH作为电子供体,对巯基试剂特别敏感.如DTNB、NEM、pCMB及IDA等,都能不同程度地抑制该酶的活性.由HgCl_2处理,该酶活性的抑制是不可逆的.该酶用NADPH或NADH作电子供体时的最适pH分别是pH7.4和pH7.0.     

鲨鱼肠道蛋白酶的分离纯化及性质的初步研究

以鲨鱼肠为材料，经柠檬酸缓冲液抽提，硫酸铵分级分离，ＣＭ－纤维素离子交换柱层析纯化，获得蛋白酶（Ⅰ）和蛋白酶（Ⅱ），研究了蛋白酶Ⅱ性质，酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一蛋白纯，酶的紫外吸收特征峰在２７５ｎｍ处，测得酶的分子量为１８ｋｄ，在ＰＨ８．０、３７℃下酶催化酪蛋白水解的Ｋｍ值为６．９×１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ。酶水解酪蛋白的最活温度为５２℃，活化能为７６．５３ｋＪ／ｍｏｌ。几种金属离子对酶活力的