疏水色谱法及其在生物大分子分离纯化中的应用

综合评述了疏水相互作用色谱法（hydrophobic interaction chromatography,HIC)的理论及其在生物大分子分离纯化方面的研究进展。     

应用高效液相色谱法分离纯化人血尿中的白蛋白

采用高效液相色谱法，以Shimpak DIOL-150(250×7．9mmid)色谱柱分离纯化经过预处理的人体血、尿标本中的白蛋白。血清标本先用饱和硫酸铵溶液沉淀蛋白，再经透析浓缩后上柱分离；尿标本经过滤后直接透析浓缩即可上柱。本法具有效率高、纯度高的特点。     

人参中蛋白质的分离纯化

以长白山人参为原料， 用盐溶液抽提、盐析、超过滤、离子交换层析及亲和层析分离纯化出一种人参蛋白质， 经 Ｓ Ｄ Ｓ聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定其纯度为一条带， 并测定其分子量在１４ ０００～１６ ０００ 之间．     

蛋白质在分离纯化中保持稳定的方法及应用

从正常生物基质中提取各种蛋白质需要有特定的条件 ,如果不能满足这些条件 ,蛋白质将很快的失去其生物学活性。本论文从两个方面讨论了在分离纯化中保持蛋白质的稳定的方法 :即通过添加稳定剂 (例如 :共溶剂 ,金属离子 ,蛋白酶抑制剂等 )及操作条件的优化 (例如 :低温、适宜 p H等 )。经实验证明均可获得满意的结果。     

蛋白质分离纯化与层析技术进展

蛋白质分离纯化是蛋白质产品工业化生产的关键之一。文中分析了蛋白质分离纯化的特点，指出了分离纯化蛋白质应解决的一些问题。层析技术是一种有效的蛋白质纯化方法，文中从层析方法、层析固定相、层析过程的数学模拟三方面评述了层析技术的新进展     

基因重组蛋白质的表达系统与分离纯化研究进展

介绍了近年来重组蛋白质的常用表达系统以及各种分离纯化技术等研究和应用的进展情况.     

高效疏水色谱法对蛋白质复性和纯化的研究进展

本文综合评述了疏水相互作用色谱法的理论及其在在蛋白质分离纯化和复性方面的研究进展.     

逆流色谱法分离纯化蒲公英中多酚类化合物

采用pH区带逆流色谱(pH-zone-refining counter-current chromatography,pH-ZRCCC)与高速逆流色谱(high-speed counter-current chromatography,HSCCC)相结合的方式,从蒲公英中分离得到6个多酚类化合物。在pH-ZRCCC分离中,选择溶剂体系为乙酸乙酯-乙腈-水(体积比4:1:5),上相加入三氟乙酸(10 mmol/L)作为固定相,下相加入氨水(10 mmol/L)作为流动相。从1.6 g蒲公英乙酸乙酯粗提物中分离得到咖啡酸(60.2 mg,纯度98.1%)和对羟基肉桂酸(6.3 mg,纯度98.8%)及混合物A(590 mg)。之后进一步利用HSCCC,选择溶剂体系为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(体积比1:4:1:4)。从400 mg混合物A中分离得到1-O-咖啡酰基甘油(7.7 mg,纯度82.2%)、3,4-二羟基苯乙酸(5.4 mg,纯度24.8%)、原儿茶酸(6.2 mg,纯度95.3%)以及对羟基苯乙酸(3.4 mg,纯度89.0%)。该方法制备量大,重现性好,适合蒲公英多酚类化合物的分离纯化。     

制备型高效液相色谱法分离纯化绿原酸

采用制备高效液相色谱技术,从杜仲叶提取物中分离纯化得到高纯活性成分绿原酸.对制备色谱的洗脱方式、洗脱剂组成、浓度、洗脱速度等参数进行优化,提出并应用了流动相速度梯度洗脱方法.最佳操作条件为:采用流速梯度进行洗脱,流速先为28 mL/min,然后为45 mL/min;流动相为15%的有机酸B和 0.1%的有机酸E(体积分数);测定波长为254 nm;进样体积为10 mL;进样量为2500 mg.通过该工艺分离纯化,制备回收率为83.3%,相对标准偏差为3.1%,绿原酸的纯度达98.61%,同时可得到杜仲叶黄酮、桃叶珊瑚甙等副产品.     

大肠杆菌RecA蛋白质的提取与纯化

作者报道了从大肠杆菌超表达菌株ＪＣ１１２７２中，制备重组酶ＲｅｃＡ蛋白的研究。利用亚精胺选择性沉淀，单链ＤＮＡ－纤维素亲和层析及阳离子换柱Ｍｏｎｏ Ｑ进行离子交换层析，从２升超表达细菌培养物中提纯了５５ｍｇ和ＲｅｃＡ蛋白。通过９％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳检测结果表明，纯化的ＲｅｃＡ蛋白纯度达９９．５％，具有催化同源ＤＮＡ链交换的能力。     

纯化组氨酸标签蛋白金属螯合亲和色谱填料的制备与性能

以琼脂糖（agarose）凝胶的珠状产品SepharoseC1—6B为基质，以环氧氯丙烷为活化剂，将天冬氨酸固定在琼脂糖凝胶微球上，在经与溴乙酸修饰后，最终得到含有羧甲基天冬氨酸结构的琼脂糖凝胶微球，以凝胶微球负载的多羧基为配体分别与Co^2＋及Ni^2＋配位分别得到两种金属螯合亲和层析介质．依照上述方法制备了具有不同负载羧基含量的色谱介质，以六聚组氨酸融合蛋白为分离样品，研究了所制备的色谱分离介质的分离纯化性能，并与商品化色谱分离介质Agarose—NTANi进行了比较．结果表明，目标介质蛋白结合容量大，与蛋白结合快、易洗脱、选择性高，金属离子不易脱落。     

基因重组融合蛋白的纯化

本文论述了基因重组融合蛋白纯化过程和存在的问题.     

离子交换色谱法纯化赤霉素A_3的研究

对离子交换色谱法纯化赤霉素Ａ３（ＧＡ３）的研究表明，用强碱阴离子交换树脂Ｄ２９０能很好地分离ＧＡ３及其杂质，采用粒径ｒ０＝０．４０ｍｍ的细粒树脂装柱，用ｐＨ＝３．５、ｌｍｏｌ／Ｌ的ＮａＣｌ溶液洗脱，洗脱空间流速为２％ｍｉｎ－１，负载质量分数约为４％时，ＧＡ３与杂质可获得较好的分离，富含ＧＡ３的流出液中ＧＡ３质量分数为９４％，收率为９６％。     

SARS-CoVS基因表达及纯化

严重急性呼吸道综合症是由一种新的冠状病毒SARS-CoY引起的．作者通过PCR扩增得到了S蛋白的6个编码片段，并利用表达载体pET28a( )在E．coli BL21中进行了原核表达．通过亲和层析纯化了包含大部分ACE2结合区域的S蛋白片段(S4)．ELISA分析结果表明S4与SARS病人恢复期血清具有良好的反应能力．     

高速逆流色谱分离纯化波棱瓜子中化学成分

采用高速逆流色谱对波棱瓜子乙酸乙酯提取物进行分离纯化,以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(体积比2:6:3:5)为溶剂,上相为固定相,下相为流动相,流速2 mL/min,转速850 r/min,共分离得到2个高纯度化合物,经过高效液相色谱检测,纯度均高于95%。该方法简便、快速、节省溶剂,可以对波棱瓜子中的化学成分进行快速有效的分离纯化。     

蛋白纯化膨胀床内的流动特性

针对膨胀床内的亲和层析分离中的流动过程 ,基于一维两相流动模型提出一种宏观动量平衡模型。应用该模型导出速度 -液含率关系式 ,并解析膨胀床的床膨胀机理。结果表明 ,提出的关系式与Richardson-Zaki经验关系一致 ,预测值与文献中实测液含率相符良好 ,平均相对误差为 42% ;膨胀床内颗粒处于静定悬浮的机理是床中单颗粒实际受到的流体动力学曳力与经修正的颗粒有效重力平衡 ,相应给出了力平衡关系的有明确物理意义的表达式 ,讨论了影响分离效果的流体动力学因素。     

鹿角盘蛋白的分离纯化与活性研究

通过超微粉碎技术使坚硬的鹿角盘粉碎,再运用生物化学技术,经过浸提、盐析、透析、分子筛层析等生物技术,分离纯化出一种鹿角盘蛋白APPB,然后通过动物实验考察其活性作用.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,检测其分子质量在20.1～31.0 KD之间,通过动物活性实验证明,分离得到的鹿角盘蛋白有一定的抗炎镇痛作用.     

重组人肿瘤坏死因子粗提取工艺的研究

通过研究重组人肿瘤坏死因子α(rhTNF-α)的粗提取工艺中各操作条件对目标蛋白纯化的影响,发展了一条纯化rhTNF-α的集成化工艺.该工艺组合细胞破碎,热变性与硫酸铵分级沉淀,有效节省离心步骤,缩短工艺流程,所得粗提物中目标蛋白占总蛋白含量的57%,目标蛋白回收率为90.3%,活性回收率为85.8%,各项指标均比未集成的工艺有较大程度的提高.