水稻细胞核DNA含量和倍性的流式细胞术测定

以3种不同细胞核分离缓冲液制备了水稻幼叶样品,通过流式细胞术比较了其DNA分辨率效果.结果发现:利用Otto buffer制备细胞核悬浮液的效果最好,不仅变异系数较低,碎片少,还对多倍性细胞核的完整性具有很好的稳定作用.该法可用于对水稻根和种子的快速准确的DNA含量测定和倍性鉴定.     

从两栖类少量胚胎细胞中快速制备细胞质RNA

介绍一种用于从两栖类动物少量胚胎细胞中快速制备细胞质RNA的简便方法。首先利用NP-40溶解细胞,去掉细胞核后的细胞质溶解物用SDS及尿素变性处理蛋白质,酚提后即可从上相中用酒精沉淀出细胞质RNA。整个制备过程可在微离心管中进行,1h左右可完成。由此法制备的细胞质RNA,可用于各种目的的分析。     

杉木炭疽菌遗传转化及附着孢发育过程的细胞核行为观察

[目的]建立高效的杉木炭疽菌遗传转化体系,并观察附着胞发育过程中的细胞核行为.[方法]通过菌丝体酶解的方法制备原生质体,PEG介导的原生质体转化法将含有伯莱霉素抗性的细胞核表达质粒NL1::GFP转入受体材料杉木炭疽菌SMCG1#C菌株,通过荧光显微镜跟踪观察附着胞发育过程中的孢子、芽管和附着胞等结构中的细胞核行为.[结果]获得了稳定表达NL1::GFP质粒的杉木炭疽菌阳性转化子;杉木炭疽菌附着胞发育过程伴随着细胞的有丝分裂与细胞核的转移;附着孢发育成熟后,孢子和芽管菌丝中的细胞核仍然保持完整.[结论]建立了高效的杉木炭疽菌遗传转化体系;杉木炭疽菌与稻瘟病菌、希金斯炭疽菌的附着胞发育过程的细胞生物学特性显著不同.     

从几种动物组织制备细胞核及可提取性核抗原的初步尝试

本文叙述了几种动物组织细胞核及可提取性核抗原的制备。发现小牛胸腺细胞核含量相当于小鼠和兔肝的5～6倍,但仅相当于小牛肝脏和猪脾脏的2倍。对流免疫电泳证明,所有自上述动物组织制备的可提取性核抗原均含Sm和RNP。     

SDS、Cu~(2+)复合污染对蟾蜍蝌蚪血红细胞核异常及抗氧化酶活性的影响

以中华大蟾蜍蝌蚪为试验对象,采用暴露试验法,研究了亚急性条件下十二烷基硫酸钠(SDS)、Cu2+单一及复合污染对蝌蚪血红细胞核异常率及肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。结果表明:单一SDS、Cu2+处理条件下,随着SDS、Cu2+暴露浓度增加,蝌蚪血红细胞核异常率及肝脏的抗氧化酶SOD与对照组相比均呈浓度-效应关系;SDS、Cu2+复合处理条件下,污染物对蝌蚪肝脏的SOD活性及血红细胞核异常率的影响表现为一定的协同作用,但污染物不同质量浓度的组合对SOD活性及血红细胞核异常率影响程度不同。     

杉木炭疽菌遗传转化及附着胞发育过程的细胞核行为观察

【目的】建立高效的杉木炭疽菌遗传转化体系,并观察附着胞发育过程中的细胞核行为。【方法】通过菌丝体酶解的方法制备原生质体,PEG介导的原生质体转化法将含有伯莱霉素抗性的细胞核表达质粒NL1::GFP转入受体材料杉木炭疽菌SMCG1#C菌株,通过荧光显微镜跟踪观察附着胞发育过程中的孢子、芽管和附着胞等结构中的细胞核行为。【结果】获得了稳定表达NL1::GFP质粒的杉木炭疽菌阳性转化子; 杉木炭疽菌附着胞发育过程伴随着细胞的有丝分裂与细胞核的转移; 附着孢发育成熟后,孢子和芽管菌丝中的细胞核仍然保持完整。【结论】建立了高效的杉木炭疽菌遗传转化体系; 杉木炭疽菌与稻瘟病菌、希金斯炭疽菌的附着胞发育过程的细胞生物学特性显著不同。     

栎属植物流式细胞术实验体系的建立与优化

为建立适于栎属植物的流式细胞核实验体系,分别利用Tris-MgCl2、Galbraith’s、Marie’s和Otto’s细胞核分离缓冲液对麻栎、栓皮栎、白栎和短柄枹栎制备细胞核悬浮液。检验发现:Tris-MgCl2、Galbraith’s缓冲液所制备样品未能检测出DNA峰,Otto’s缓冲液制备的样品中,除白栎外其他3个样品的测试结果均较差,Marie’s缓冲液所制备的4个样品测试DNA峰的变异系数(CV)均大于10%。采用正交设计方法对经典Marie’s缓冲液中的β-巯基乙醇和Tween 20组分进行了优化,发现麻栎、栓皮栎、白栎和短柄枹栎的最适β-巯基乙醇浓度和Tween 20体积比分别为45 mmol/L和2.5%、15 mmol/L和2.0%、60 mmol/L和1.0%及30 mmol/L和1.0%。运用改进后的最适Marie’s缓冲液进行流式细胞核测定,4种样品的变异系数均显著下降(在3.52%~4.81%之间),表明改进后的Marie’s缓冲液对4种栎属植物的测试结果准确可信。     

免疫外科法分离牛卵巢颗粒细胞核

实验旨在用制备的兔抗牛脾脏细胞免疫血清去除牛颗粒细胞膜,将得到的完整的细胞核分离纯化以应用于核移植胞质内注射.首先用牛脾脏细胞免疫健康成年兔,注射五周后将兔子放血,分离得到高效价的免疫血清,分装冷藏;然后,解冻适量血清,与牛颗粒细胞反应,观察凝聚现象和破膜反应.结果表明,免疫学方法可以批量破除细胞膜,该法为体细胞核移植方法的改进提供了一条新的思路,值得为相关研究所借鉴.     

纤毛虫胞质微管及大核的FLUTAX-EB荧光标记方法

以游仆虫、尖毛虫和尾柱虫三种腹毛目纤毛虫为材料,在应用FLUTAX方法显示纤毛虫细胞微管结构的标本制备过程中,增加了EB染色的歩骤,使标记纤毛虫细胞皮层微管的同时也显示了细胞核的结构.并提出了实验中对EB浓度及渗透时间等需注意的方面.     

烟草悬浮细胞细胞核及核骨架中存在有肌动蛋白和肌球蛋白的证据

自烟草悬浮培养细胞中分离出细胞核,提取核总蛋白后,用DNase Ⅰ消化去除核酸和2M NaCl抽提后制备成细胞核骨架.以抗β-actin的抗体作一抗,辣根过氧化物酶标记(HRP)的羊抗兔抗体作二抗进行免疫印迹.结果证实,在细胞质、细胞核与核骨架中均存在与肌动蛋白抗体呈阳性反应的抗原.以抗myosin Ⅰβ抗体作一抗,辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔抗体作二抗进行免疫印迹.也证实了细胞核中存在与肌球蛋白抗体呈阳性反应的抗原.上述结果证明,肌动蛋白和肌球蛋白是烟草悬浮细胞细胞核及核骨架的组成成分.来源于老鼠纤维原细胞细胞核中的肌球蛋白Ⅰ存在于烟草细胞核中也表明细胞核中的肌动蛋白和肌球蛋白在生物进化过程中是相当保守的.