质子化甘氨酸二聚物与水分子的相互作用

采用密度泛函方法(B3LYP),在6-31 +G*基组水平上优化质子化的甘氨酸二聚物结合-分子水形成的所有复合物.比较这些复合物的相对能量,并计算了中性与两性复合物相互转化所需要的活化能.结果显示,当水分子结合在H2,H5,H6(左侧甘氨酸)上时,两性复合物要比中性复合物稳定.水分子结合到H5和H6位置时,GGH -c...     

九种黔产植物多糖的体外免疫调节活性研究

目的:评价9种黔产植物多糖的免疫调节作用。方法制备脾淋巴细胞悬液,分别将样品与LPS或ConA共同作用于脾淋巴细胞,用MTT法测定淋巴细胞的增殖情况。将多糖作用于RAW264.7细胞,用ELISA测定细胞上清中TNF-α含量,判断样品对RAW264.7细胞的活化情况。结果:土党参多糖、薯蓣多糖、竹根假万寿竹多糖对LPS刺激B淋巴细胞增殖有促进作用。楮实多糖对ConA刺激T淋巴细胞的增殖有促进作用。轮叶沙参多糖、绞股蓝多糖、党参多糖、金樱子多糖对T、B淋巴细胞增殖均有促进作用。而绞股蓝多糖、薯蓣多糖、金樱子多糖、楮实多糖、竹根假万寿竹多糖能诱导RAW264.7细胞TNF-α表达上调。结论:九种黔产植物多糖在促淋巴细胞增殖和巨噬细胞活化中表现出明显差异,其中绞股蓝多糖有较好的免疫增强活性。     

In vitro screening of immunomodulatory activity of polysaccharides of nine species of plants in Guizhou province

目的：评价9种黔产植物多糖的免疫调节作用。方法制备脾淋巴细胞悬液,分别将样品与LPS或ConA共同作用于脾淋巴细胞,用MTT法测定淋巴细胞的增殖情况。将多糖作用于RAW264.7细胞,用ELISA测定细胞上清中TNF-α含量,判断样品对RAW264.7细胞的活化情况。结果：土党参多糖、薯蓣多糖、竹根假万寿竹多糖对LPS刺激B淋巴细胞增殖有促进作用。楮实多糖对ConA刺激T淋巴细胞的增殖有促进作用。轮叶沙参多糖、绞股蓝多糖、党参多糖、金樱子多糖对T、B淋巴细胞增殖均有促进作用。而绞股蓝多糖、薯蓣多糖、金樱子多糖、楮实多糖、竹根假万寿竹多糖能诱导RAW264.7细胞TNF-α表达上调。结论：九种黔产植物多糖在促淋巴细胞增殖和巨噬细胞活化中表现出明显差异,其中绞股蓝多糖有较好的免疫增强活性。     

CHO细胞中性红试验参数研究

为探讨中性红摄入法测定中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)活性的有效性,为中性红比色法用于卷烟烟气毒理学评价提供参考.采用中性红吸入法,当中性红质量浓度为50～5000μg/mL,培育时间3h,溶解液pH值为3.0～4.0范围内,吸光值(A540nm)与CHO细胞的活细胞数呈正相关,是较为合适的实验参数.结果表明中性红比色法灵敏准确,结果稳定,操作简便,可以用于卷烟烟气细胞毒性的评价.     

人源化AGR2单抗在不同宿主细胞中表达的比较

Anterior gradient-2(AGR2)基因是一种与肿瘤生长、转移、浸润及耐药性密切相关的基因,以AGR2为靶点的人源化单克隆抗体rhAGR2-mAb有望成为一种新型的抗肿瘤药物.本研究为了进行该抗体的成药性评价,通过瞬时转染的方法分别用HEK293F细胞与CHO细胞这两种最常用的表达系统表达rhAGR2-mAb,获得了纯度为95%的抗体蛋白,同时比较了不同宿主细胞生产的蛋白在分子量、等电点、糖型等方面的差异,发现在分子量、等电点和糖基化的糖型种类方面,两种宿主细胞表达的rhAGR2-mAb并无明显差异,但两者表达的产物在糖型比例上有较大不同,这也导致了两种表达系统所表达的蛋白与抗原AGR2的亲和力略有不同,为rhAGR2-mAb将来选择合适的蛋白瞬时表达系统和稳定生产系统提供依据.     

Ni~(2+)催化甘氨酸质子迁移机理的理论研究

采用B3LYP/6-31++G(d,p)方法研究Ni~(2+)催化甘氨酸质子迁移机理.优化得到了7个中性配合物和1个两性配合物;两性的最稳定,结合能为-927.3 k J/mol.分子内单键旋转和羧基H在2个羧基O原子间的迁移导致中性构型转化,C-C键旋转的能垒低于21.9 k J/mol,C-O键旋转的能垒在23.1-46.4 k J/mol范围内,羧基H在O原子间迁移的正逆反应能垒分别为175.0和108.3 k J/mol.羧基H迁移到氨基生成两性构型,能垒为19.3k J/mol.Ni~(2+)导致氨基N原子负电荷减少0.48,削弱了N原子对羧基H原子的库仑吸引,钝化了共价键B_(O3–H6),动力学上不利于羧基H迁移;但是羧基H迁移后,形成的两性构型却是热力学最稳定体系.最稳定中性构型N1转化为最稳定两性构型Z1的路径为:N1→N1-N7→N7→N3-N7→N3→N3-N5→N5→N5-Z1→Z1,该路径的最高能垒为124.8 k J/mol.     

龙葵糖蛋白对MCF -7细胞内[Ca2+]i的影响

研究龙葵糖蛋白对乳腺癌MCF -7细胞内[Ca2+]i的影响.通过MTT法测定龙葵糖蛋白对MCF -7细胞的细胞毒作用;Hoechst33258染色荧光显微镜下观察龙葵糖蛋白作用MCF -7细胞的形态学变化;采用Fluo - 3/AM探针标记,激光共聚焦技术观测龙葵糖蛋白对MCF -7细胞内[Ca2+]i的影响.结果表...     

虾青素通过线粒体抑制高糖诱导的HBZY-1细胞凋亡

为了探究虾青素是否能有效改善高糖诱导的HBZY-1细胞的凋亡及其抗凋亡的机制,本研究采用CCK8法测定了正常糖和高糖环境下,不同浓度的虾青素对HBZY-1细胞活力的影响,并运用相关试剂盒测试了细胞死活比例和细胞凋亡的变化,在光镜下观察了HBZY-1细胞形态的变化,使用JC-1探针在荧光显微镜下观察了HBZY-1细胞线粒体膜电位的变化,运用Western Blot技术检测了HBZY-1细胞中促细胞凋亡蛋白bax和抑制细胞凋亡蛋白bcl-2的表达水平,运用caspase 3/7活细胞荧光实时法检测了HBZY-1细胞中的caspase 3/7活性.结果表明:虾青素可有效逆转高糖引起的细胞活力降低,能抑制高糖引起的HBZY-1细胞凋亡和细胞形态异常,并能改善线粒体膜电位和影响参与调控HBZY-1细胞的凋亡相关蛋白.由此认为:虾青素可以通过影响线粒体膜电位来改善高糖引起的肾小球系膜细胞凋亡,其有可能成为改善糖尿病肾病的潜在药物.     

35种大型真菌的血凝活性测定

凝集素(Lectin)是非免疫原的，与糖专一性结合的，能凝集细胞或沉淀含糖大分子的蛋白质或糖蛋白。     

新型丝素凝胶和丝素支架的生物相容性评价研究

目的:综合评价新型丝素凝胶和丝素支架的生物相容性和生物安全性.方法:采用溶血实验评价丝素凝胶和丝素支架对红细胞功能和代谢的影响;采用皮肤刺激和皮内刺激实验评价丝素凝胶和丝素支架对皮肤的刺激作用;通过热源实验来判断丝素凝胶和丝素支架中所含热源量是否符合人体的要求;通过给小鼠背部皮下植入丝素凝胶和丝素支架,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法分析丝素凝胶和支架对小鼠血清免疫球蛋白IgM和IgG抗体水平的影响、采用液相芯片法分析凝胶和支架对血清炎性细胞因子质量浓度的影响、采用流式细胞法分析丝素凝胶和支架对脾脏和骨髓免疫细胞异常的影响.结果:丝素凝胶和丝素支架的溶血率分别为4.239%和2.312%(均5%),两种材料不引起溶血反应,并且对红细胞形态无影响;丝素凝胶和丝素支架的皮肤刺激实验和皮内刺激实验的结果均为阴性,表明对皮肤没有刺激作用;热源实验结果显示大白兔体温升高均低于0.6℃,并且体温升高总数低于1.4℃.小鼠皮下分别植入两种材料后结果显示,植入1周和5周后小鼠血清抗IgM抗体水平与阴性对照组无显著性差异,抗IgG抗体水平在植入后1周时与阴性对照组无显著性差异,植入后5周丝素凝胶的IgG抗体水平比阴性对照组显著升高.植入后5周23种小鼠血清细胞因子质量浓度与阴性对照组无显著性差异,脾细胞和骨髓细胞中嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、B细胞、B1细胞、B1a细胞、B2细胞、CD3~+ T细胞、CD4~+ T细胞、CD8~+ T细胞、巨噬细胞和树突状细胞的表达量均与阴性对照组无显著性差异.结论:新型丝素凝胶和丝素支架无溶血作用,对红细胞形态无影响,对皮肤无刺激作用,所含热源量符合人体要求;体内植入后分子和细胞实验证实新型丝素凝胶和丝素支架不会引起小鼠免疫细胞异常反应,也不会引起抗体异常升高,同时不会导致血清炎性细胞因子质量浓度升高.通过综合评价,显示丝素凝胶和丝素支架具有良好的生物相容性.     

BOG初次免疫联合结核分枝杆菌Ag85A DNA疫苗加强免疫效果的研究

为探讨BCG初次免疫,结核分枝杆菌Ag85A DNA疫苗加强免疫的序贯免疫策略对小鼠的免疫效果。采用BCG及结核分枝杆菌Ag85A DNA疫苗依次免疫小鼠,在末次免疫后的4、6、8周通过检测小鼠血清总IgG抗体、特异性淋巴细胞增殖．细胞因子的水平,观测BCG初次免疫,Ag85A DNA疫苗加强免疫的策略对小鼠的免疫效果。结果显示,采用BCG初次免疫,结核分枝杆菌Ag85A DNA疫苗加强免疫的策略组的小鼠与其它免疫方式组相比,IgG明显升高（P〈0．05）、特异性淋巴细胞明显增殖、IFN7、IL-2、IL-4水平明显增高（P〈0．05）。由此可知,在采用BCG初次免疫,结核分枝杆菌Ag85A DNA疫苗加强的免疫策略后,能增强对小鼠的免疫效应,尤其是Thl型细胞免疫反应增强明显,为进一步在动物体内进行保护性效应试验的研究提供了实验依据。     

The study on the immune response induced by expressing recombinant plasmid of dengue virus type 2 NS3 protein

The PSV·NS3, an expressing recombinant plasmid of dengue virus type 2 NS3 protein, was injected directly into the quadriceps of Balb/C mice to explore whether it could inducing immune response. The splenic T cell subsets of two groups was analysed by flow cytometry. It was found that the percentage of CD4⁺ and CD8⁺ T cells of experimental group were significantly higher than those of the control group. The titer of IgG antibody was as high as 1∶5 120 in experimental group, but it couldn’t be detected in control group by ELISA. The western blot further proved that the IgG antibody was specific for NS3 protein. Those results Suggested that inoculation Balb/C mice with PSV·NS3 could inducing immune response, and the NS3 protein might be used as the candidate protein of DNA vaccine of dengue virus. Foundation item: Supported by Foundation of American Chinese Medicine Biography, LI Xiang-qun(1963−), male, M.D, Research direction: molecular and clinical virology.     

吉林人参低聚肽的免疫调节作用

 为研究吉林人参低聚肽(GOP)对小鼠的免疫调节作用, 选取280 只SPF 级雌性BALB/c 小鼠, 随机分为7 组:空白对照组、乳清蛋白组(150 mg/kg)及5 个GOP 组(37.5、75、150、300、600 mg/kg)。连续灌胃30 d 后, 进行免疫7 项实验测定, 观察GOP 对小鼠免疫器官相对重量、细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能和NK 细胞活性的影响。结果表明:GOP 显著提高了ConA 诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力、迟发型变态反应能力、抗体生成细胞数、小鼠碳廓清指数、巨噬细胞吞噬率和吞噬指数、NK 细胞活性(P<0.05), 且效果优于乳清蛋白。由此可知, GOP 可以通过增强细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞吞噬能力和NK 细胞活性, 起到增强免疫力的作用。     

北沙参免疫活性多糖制备方法研究

为了确定北沙参免疫活性多糖的最佳制备方法,采用4种方法制备北沙参多糖样品,并进行体外小鼠脾淋巴细胞增殖实验,对各样品进行免疫活性比较。以提取率及体外小鼠脾淋巴细胞增殖率为指标,分析95%乙醇回流除去小分子、除蛋白及不同浓度醇沉等步骤的必要性,确定北沙参免疫活性多糖最佳制备方法。通过提取率及体外小鼠脾淋巴细胞增殖率比较,经沸水提取、浓缩和干燥后获得的北沙参免疫活性多糖样品提取率最高,达33.15%;且该样品对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用最强,在62.5 μg/mL浓度下增殖率达到33.93%。结果显示北沙参免疫活性多糖的最佳制备方法为沸水提取、浓缩并干燥即可,无需进行95%乙醇回流除去小分子、除蛋白及不同浓度醇沉等步骤。     

抗巨片形吸虫同型抗体在动物巨片形吸虫感染所致的抗体依赖性细胞介导的细胞毒反应( ADCC )免疫应答作用的研究

以印尼短尾羊（ITT）和美利奴细毛羊（Merino）两种品系的绵羊为实验动物，研究动物感染巨片形吸虫后所产生的抗体依赖性细胞介导的细胞毒反应的免疫应答。结果显示：对巨片形吸虫感染具有抗性的印尼短尾羊不产生特异性的IgG2，而易感品系的美利奴细毛羊感染巨片形吸虫后体内产生高滴度特异性IgG2抗体、特异性IgG2抗体在免疫应答中起着封闭抗体的作用，抑制巨噬细胞抗体依赖性细胞介导的细胞毒反应。由于印尼短尾羊不产生特异性IgG2抗体，对巨噬细胞抗体依赖性细胞介导的细胞毒反应不产生抑制作用，因此印尼短尾羊对巨片形吸虫的感染具有一定的抵抗力。使用纯化的IgG1和IgG2进行体外杀虫试验，结果IgG1有很强的促进体外杀虫效果，而自感染巨片形吸虫的美利奴细毛羊血清标本纯化的IgG2没有体外杀虫作用。体外实验还显示嗜酸性粒细胞在免疫血清、补体和IL-5的共同参与下具有较强的杀虫作用。     

Molecular characterization of single memory B cells

Primary antigenic exposure results in an initial antibody response and the T cell-dependent induction of B-cell memory. Memory B-cell differentiation is characterized by somatic hypermutation in antibody variable region genes (V) and selection of B cells expressing high-affinity variants of this antigen receptor. Despite our current understanding of B-cell memory, the origin of memory B cells and the regulation of their differentiation remain elusive. This is largely due to the difficulties in observing and purifying this minor component of the immunized spleen. Further, molecular characterization of memory B cells requires hybridoma formation which restricts analyses to only those clones capable of fusion and does not allow isolation of cells in a normal physiological state. We have therefore developed a unique system which allows isolation and unambiguous enumeration of IgG1+ memory B cells, based on six-parameter flow cytometry, secretion of antibody in clonal cultures and analysis of clonally expressed V genes using the polymerase chain reaction. Here we report that single IgG1+ antigen-binding B cells from an early secondary immune response proliferate in lipopolysaccharide-driven microcultures and produce antigen-specific IgG1 antibodies. Individual B-cell clones in these cultures express somatically mutated heavy chain V genes, confirming their designation as memory B cells. Although isolated memory B cells undergo extensive proliferation in vitro, V gene sequence analysis of their individual progeny shows that further hypermutation does not occur.     

A DNA vaccine induces SARS coronavirus neutralization and protective immunity in mice

Public health measures have successfully identified and contained outbreaks of the severe acute respiratory syndrome (SARS) coronavirus (SARS-CoV), but concerns remain over the possibility of future recurrences. Finding a vaccine for this virus therefore remains a high priority. Here, we show that a DNA vaccine encoding the spike (S) glycoprotein of the SARS-CoV induces T cell and neutralizing antibody responses, as well as protective immunity, in a mouse model. Alternative forms of S were analysed by DNA immunization. These expression vectors induced robust immune responses mediated by CD4 and CD8 cells, as well as significant antibody titres, measured by enzyme-linked immunosorbent assay. Moreover, antibody responses in mice vaccinated with an expression vector encoding a form of S that includes its transmembrane domain elicited neutralizing antibodies. Viral replication was reduced by more than six orders of magnitude in the lungs of mice vaccinated with these S plasmid DNA expression vectors, and protection was mediated by a humoral but not a T-cell-dependent immune mechanism. Gene-based vaccination for the SARS-CoV elicits effective immune responses that generate protective immunity in an animal model.     

丹参提取物对氧化衰老模型小鼠的免疫保护作用

采用小鼠氧化衰老模型探讨丹参提取物的免疫保护作用及抗氧化作用 .用小鼠脾脏淋巴细胞增殖试验检测免疫细胞的功能状态 ;用免疫组化法和HE染色观察胸腺的氧化情况及形态学变化 ;用流式细胞仪检测细胞表面CD2 8分子及其他分子的变化 ,来探讨免疫分子的变化情况 .结果表明丹参提取物能明显恢复由氧化应激造成的免疫功能低下状态 .淋巴细胞增殖功能得到了明显改善 .胸腺内核酸氧化产物 8-OHdG染色阳性细胞明显减少 ,胸腺皮质恢复良好 .免疫细胞表面CD2 8分子明显增加 ,CD4阳性细胞也明显增多     

Mouse Ia antigens are receptors for lactate dehydrogenase virus

Infection of mice with lactate dehydrogenase virus (LDV) leads to elevation of plasma lactate dehydrogenase, lifelong viraemia and perturbations of cell-mediated and humoral immune responses. The virus replicates exclusively in a restricted set of macrophages, but the basis for restricted cell susceptibility is unknown. By immunofluorescence techniques we have found that the per cent infected was the same as the per cent expressing antigens encoded by the I region of the major histocompatibility complex (Ia). Infection of CBA strain I-A+ peritoneal macrophages was blocked when cells were treated simultaneously with monoclonal antibody to I-A and I-E, but not with either antibody separately. LDV infectivity was inactivated when virus was treated with purified rat glycoprotein homologous to mouse I-A and I-E antigens. These results indicate that the receptors for LDV are I-A and I-E antigens. Selective infection of Ia-positive macrophages may have an important effect on the immunological capability of infected mice.     

5'-核苷酸对小鼠获得性免疫调节作用研究

 为了评价5’-核苷酸对小鼠获得性免疫功能的影响,将健康雌性BALB/c小鼠以普通饲料、无核苷酸饲料（NF）及不同剂量5’-核苷酸的饲料（0.0025%,0.01%,0.04%,0.16%）喂养4周后,观察小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能、血清免疫球蛋白水平以及脾脏淋巴细胞亚群的改变。结果显示无核苷酸饮食可以显著减弱淋巴细胞增殖能力（OD差值0.06±0.03）和足跖肿胀度（0.12±0.06）mm;CD4+/CD8+（1.90±0.12）显著下降,T调节细胞比例（5.56±0.11）%显著升高;溶血空斑数（1.48±0.21）有减弱趋势。饲料中添加5’-核苷酸后,免疫水平有所回升。当添加到0.04%时,小鼠的各项免疫水平均比NF组有显著提高,达到正常对照组水平。总之,无核苷酸饲料喂养小鼠免疫功能降低。在无核苷酸饲料中添加5’-核苷酸能恢复小鼠免疫功能,当饲料中核苷酸含量为0.04%时小鼠免疫功能恢复到最佳水平。