人类基因工程研究新进展

在1953年前,人们还不知道脱氧核糖核酸(DNA)分子的顺序在化学上是如何排列的;1953年开始了 DNA革命——基因重组;1975—1976年吉伯特和桑格分别建立了两种新的高效 DNA 测序方法,两者结合开创了人类基因工程的新阶段。美国国立人类基因研究中心主任沃森博士和克莱杰博士发明了著名的 DNA 双螺旋结构。现在基因工程仍是一     

菠菜性别差异NUPTs序列的克隆及分析

质体DNA向核基因组转移能够形成核质体DNA,核质体DNA序列的插入是推动动植物基因组及染色体组演化的重要动力.但是核质体DNA的插入和植物性染色体起源及演化之间的关系仍不清楚.以雌雄异株植物菠菜为材料,利用基因组消减杂交技术筛选分离菠菜雌雄基因组差异的NUPTs序列,并进行验证和分析.结果表明,从构建的菠菜消减杂交文库中共得到39条长度为75~308 bp的雌雄差异序列,其平均长度约为154 bp.对获得的序列进行Blastn同源比对发现了12条序列为叶绿体基因组来源序列,这些序列与菠菜叶绿体基因组相似度在98%以上,说明所获得的差异片段为核质体DNA序列.将筛选出的核质体DNA序列进行进一步验证后获得了两个稳定的长度分别为146 bp和199 bp的雄性偏好核质体DNA序列,说明所获得的两个NUPTs序列在菠菜雄性基因组中有更多的累积.     

克隆西农莎能奶山羊的微卫星DNA分析

目的利用微卫星DNA技术对通过体细胞克隆技术获得的两只西农莎能奶山羊进行鉴定。方法提取两只克隆西农莎能奶山羊、两只受体西农莎能奶山羊母羊、西农莎能奶山羊供体细胞和两只对照组西农莎能奶山羊母羊的基因组DNA,通过5对具有显著多态性差异的引物扩增微卫星DNA序列,并对其进行微卫星DNA分析。结果两只克隆西农莎能奶山羊和供体细胞的基因型完全一致,受体母羊和对照组母羊的微卫星DNA多态性则与前两者均不相同。结论两只克隆西农莎能奶山羊基因组DNA来源于供体细胞。     

螺旋藻基因组DNA制备方法的摸索与比较

为了得到高质量的螺旋藻基因组DNA,采用超声波法和溶菌酶法两种方法提取基因组DNA,并对实验方法进行了摸索与比较。结果表明:影响螺旋藻基因组DNA制备质量和得率的重要因素之一是螺旋藻细胞壁的破壁程度。本实验中采用两种破壁方法均可得到高质量高得率的螺旋藻基因组DNA,但超声波法破壁不易掌控,而适当浓度的溶菌酶法可获得较理想的结果。     

毛竹DNA的纯化和检定

<正> 要从事DNA分子的转化、重组及表达等方面的研究,首先须获得一定纯度和天然态的DNA分子,而且要求纯化DNA的方法简易有效。 六十年代Marmur等人介绍了一个制备具有转化活性的DNA方法,但步骤多,操作烦。1969年Bernardi报道了用羟基磷灰石柱层析方法分离纯化了小牛胸腺DNA,获得了天然态的DNA分子。 本试验用高氯酸钠法从毛竹笋中制得DNA粗制品,通过羟基磷灰石(HA)柱层析分离、纯化,获得了纯净的双链DNA。是一种简易而有效的纯化DNA的方法。 材料和方法 1.毛竹(Phyllostachys pubescens)取25厘米高的竹笋,去箨,切成小块,用SSC洗涤两次,贮存在冰箱的冰隔层内,预冷24小时。 2.羟基磷灰石 按照上海生物化学研究所代谢调节控制组(1976)所述方法自行合成。     

活性污泥基因组DNA快速提取新方法及其指纹分析

建立了从活性污泥中快速提取基因组DNA的新方法,过程包括粗提与精制两个步骤,简化了繁琐的提取程序,提高了提取效率．用该方法提取的基因组DNA做模板,进行扩增核糖体限制性酶切片断分析（ARDRA）及核糖体基因间区序列分析（RISA）,均获得了理想的多态性指纹图谱;采用两对特异性引物（鞘氨醇单胞菌属和氨加氧酶基因）对所提污泥基因组DNA进行扩增,均获得了正确的PCR产物．该方法提取的污泥基因组DNA不但适用于研究污泥系统中菌群多样性分析,而且还可以对特定基因进行跟踪监测。     

经大豆DNA溶液处理后选育的变异水稻基因组RAPD分析

利用花粉管通道法和浸种及苗期浇灌法,将供体大豆DNA直接导入受体水稻,获得两种水稻变异株系。采用RAPD技术对供体大豆、受体水稻和两种水稻变异株系的基因组进行了多态性分析。所用31种10碱基随机引物中有24种扩增出清晰的DNA条带。分析比较了4个样品DNA扩增条带的相似率。根据试验结果分析,外源大豆DNA导入受体水稻能引起后代基因DNA序列变化,扩大水稻的遗传组成;作者还分析了由外源大豆DNA导入引起受体水稻产生变异现象的原因。     

爱恨DNA

克林顿的性丑闻使全世界的人在一夜间知晓了DNA的威力,不过DNA和DNA技术的应用早在数年前就开始了。日前,中国又宣布在上海建立“罪犯DNA数据库”走进司法部司法鉴定科学技术研究所,我们看到的, 一个个DNA的故事,实际上就是一个个爱与恨的故事。 对美国总统克林顿来说,真是恨是DNA,     

基于闭环DNA的边着色问题DNA算法

提出一种新的DNA计算模型——闭环DNA计算模型。引进了批删除实验。讨论了其实现过程;提出并证明了边着色问题的基本定理,设计并实现了闭环DNA计算算法．该算法将边的DNA编码分为两部分,一部分存储边和色位置的二维数据,另一部分存储色号值;在DNA计算的主体部分用批删除实验得到全部正常的边着色,并通过电泳实验和检测实验获得χ′^-正常边着色．举例说明了算法的有效性和可行性．     

一种简便高效的古代动物毛皮DNA提取方法

采用试剂盒QIAamp DNA Mini Kit从距今4000年前新疆小河墓地出土的黄牛毛皮中提取出古DNA,并对黄牛线粒体D-loop区部分片段进行了PCR扩增和序列测定.结果表明:所提取的古DNA真实可信;且该方法简便、高效,适用于古代动物毛皮DNA的提取.     

拟步甲昆虫基因组DNA提取的比较研究

对拟步甲科8种昆虫的新鲜标本及无水乙醇浸泡标本，分别用SDS-蛋白酶K消化法和乙酸钾抽提法进行基因组总DNA的提取．经5次重复实验，结果表明，用两种方法均能从新鲜标本中获得较完整的DNA，且DNA得率较高；而对于无水乙醇保存的标本，提取出的DNA用琼脂糖凝胶电泳检测不出DNA条带，说明标本在保存过程中DNA可能发生了变化，致使提取出的DNA量太少或未分离出DNA．通过对比实验，分析原因，阐明了两种方法的优缺点，并提出了该类昆虫用于DNA提取的标本的保存方法．     

重组Tth DNA聚合酶基因的克隆表达及活性鉴定

Tth DNA聚合酶具有聚合酶与反转录酶两种功能,而且耐高温,但是国内并未实现高效生产.本研究以粗提的嗜热栖热菌Thermus thermophilus基因组为模板,采用PCR分段扩增和酶切连接的方法获得Tth DNA聚合酶基因全长序列;然后构建重组质粒pXT99b/Tth并转化表达菌E.coli DH5α,利用IPTG诱导Tth基因表达,并采用热处理、Ni2+柱纯化融合His-tag的Tth DNA聚合酶,最后利用PCR、RT-PCR鉴定其活性.结果显示,本研究获得Tth DNA聚合酶基因全长2 505bp,成功表达并获得高纯度高活性的重组Tth DNA聚合酶,1L发酵液所得粗酶液中,酶活性约有800 000U,酶的比活约为6 315U/mg.本研究最终实现了Tth DNA聚合酶的高效国产化并降低了实验成本.     

人造染色体首次合成

50年前,科学家首次把各种普通的化学成分组合在一起,在试管里成功合成了脱氧核糖核酸（DNA）。50年后,科学家着手跨越一个巨大障碍：完全用人造DNA创造生物。     

按大肠杆菌高表达序列设计的人干扰素α-2b基因的化学合成和克隆

根据大肠杆菌高表达序列重新设计了人干扰素α-2b基因编码区的核苷酸序列,应用化学合成的方法合成了多个互补DNA片段,经互补片段分别退火和连接后,将完整编码区分两段分别克隆于pUC19质粒中,进行DNA序列分析,分别选取序列完全正确的两种克隆片段进行重组.获得了与设计序列完全一致的含有完整编码区的人干扰素α-2b基因.     

亚当夏娃与DNA

在《圣经》里,亚当是人类的父亲,夏娃是人类的母亲;而DNA是遗传学上脱氧核糖核酸,重要的生物遗传物质。长期以来,宗教信徒们坚信人类是在6千年前由上帝创造出来的;而古生物学家则从古化石和古骨发现,人类早在100万年前就生活在亚洲和非洲。谁是谁非?DNA就是一把解谜的钥匙。     

浅析DNA双螺旋结构发现的社会条件

介绍了DNA双螺旋结构发现的背景与经过,分析了DNA双螺旋结构发现的社会条件,论述了从DNA双螺旋结构的发现过程中获得的有益启示。     

Charon30噬菌体DNA

Charon 30噬菌体是由Rimm D.L等改造的,其DNA长度为46.76Kb。经限制性内切酶BamH I切去中间非必需的DNA片段后,其左右两臂分别为22.6Kb和9Kb长,可作为真核基因文库的载体。能容纳15—20Kb的真核基因片段。Charon30噬菌体DNA制备中,通常采用氯化铯密度梯度离心分离纯化噬菌体,而超速离心的时间需20小时以上,或两次超离心,既费时间又不经济;另一种快速方法即预先制备氯化铯的梯度溶液,然后再超速离心两小时。我们实验了这两种方法,获得了     

两种贝类基因组DNA的提取及RAPD分析

研究了福建沿海两种常见贝类波纹巴非蛤(Paphiaundulata)和菲律宾蛤仔(Ruditapesphilip-pinarum)的性腺和斧足的DNA提取方法,并且对它们进行了RAPD分析,结果显示性腺DNA得率较斧足高,并且成功获得了效果较好的2种随机引物及其相应的反应条件,能够在分子水平上为它们及其近源种的比较研究提供初步的资料.     

笼养蓝孔雀两个种群的随机扩增多态DNA分析

利用随机扩增多态DNA技术对英吉利孔雀场和广州动物园两个蓝孔雀Pavocristatus种群进行了分析。用 2 3个随机引物 ,共获得 173和 15 7个扩增片段 ,多态率分别为 47 40 %和 9 5 5 %     

按大肠杆菌高表达序列设计的入干扰素α—2b基因的化学合成和克隆

根据大肠杆菌高表达序列重新设计了人干扰素α—2b基因编码区的核苷酸序列，应用化学合成的方法合成了多个互补DNA片段，经互补片段分别退火和连接后，将完整编码区分两段分别克隆于pUC19质粒中，进行DNA序列分析，分别选取序列完全正确的两种克隆片段进行重组，获得了与设计序列完全一致的含有完整编码区的人干扰素α—2b基因。