红豆杉细胞悬浮培养及动力学研究

对红豆杉细胞在５Ｌ通气机械搅拌式反应器中的培养过程及动力学进行了研究。经２４ｄ培养，细胞生物量增加３倍，紫杉醇含量可达细胞干重的１．０３５×１０＾－３，建立了描述细胞生长过程的模型，采用分段多项式函数逼近关联ｕ与ｕｍ的函数Ｆ（ｓ），建立了描述产物合成的动力学方程，采用多项式函数逼近关联产物合成速率与细胞生长速率的函数，确定了部分动力学参数。     

南方红豆杉细胞悬浮培养动力学研究

考察了南方红豆杉悬浮培养细胞生长的动态变化，以及各种理化因子对细胞生长和紫杉醇生产的影响。实验结果表明：紫杉醇的积累与细胞生长不表现为部分相关性，在生长的延迟期紫杉醇积累量最高，达到0.1873mg/g。     

红豆杉细胞培养与紫杉醇形成的研究

研究表明红豆杉细胞培养物中含有紫杉醇（Taxol);采用苯基柱．甲醇：乙醇：水（20：32：48）为流动要的HPLC测定条件,细胞培养物中的Taxol与其他化合物的分离效果较为理想;25度,pH5.8的培养条件较适合红豆杉细胞生长和Taxol的形成,减少KNO3,CaCl2.2H2O浓度,增加（NH4）2SO4浓度均能促进红豆杉细胞生长,增加Taxol的形成量。     

红豆杉细胞培养生产紫杉醇的研究进展

综述了近年来红豆杉细胞培养生产紫杉醇的研究进展, 包括红豆杉细胞培养生产紫杉醇的代谢调节、无机盐、植物生长调节因子、糖分及其它因素对红豆杉细胞生长和紫杉醇生产的影响等.着重介绍了前体饲喂、添加抑制剂和添加诱导子对红豆杉细胞生长及紫杉醇生产的影响.     

红豆杉细胞悬浮培养及动力学研究

对红豆杉细胞在５Ｌ通气机械搅拌式反应器中的培养过程及动力学进行了研究．经２４ｄ培养，细胞生物量增加３倍，紫杉醇含量可达细胞干重的１．０３５×１０－３．建立了描述细胞生长过程的模型，采用分段多项式函数逼近关联ｕ与ｕｍ的函数Ｆ（ｓ），建立了描述产物合成的动力学方程，采用多项式函数逼近关联产物合成速率与细胞生长速率的函数，确定了部分动力学参数     

气升式反应器中红豆杉细胞培养动力学的研究

设计了８Ｌ规模的气升式生物反应器,应用该生物反应器悬浮培养红豆杉细胞,经３０ｄ培养,细胞鲜重达２６ｇ／Ｌ,干重细胞紫杉醇含量达１．１７×１０＾３ｇ／ｇ。建立了细胞生长动力学模型,结果表明该生物反应器适合红豆杉细胞的生长、代谢和产物合成。     

南方红豆杉细胞培养中紫杉醇代谢调节的研究

对南方红豆杉悬浮培养细胞的生长动力学和紫杉烷类物质积累的动力学进行了探讨．紫杉醇合成途径中由巴卡亭Ⅲ生成紫杉醇的反应是受阻的．加入pH稳定剂MES可以减少巴卡亭Ⅲ向胞外的分泌，提高了紫杉醇总量和在细胞内的积累．     

云南红豆杉细胞培养和紫杉醇生产

研究了在固体和液体培养条件下云南红豆杉 (Taxusyunnanensis)细胞系TY6生长和紫杉醇积累的动态及培养基中无机氮源形式对其生长的紫杉醇形成的影响 .结果表明 ,在固体和液体培养条件下 ,云南红豆杉细胞的生长和紫杉醇积累动态相似 ,但液体培养时细胞生长周期缩短了 7d,紫杉醇含量降低了 1倍 ;新形成的细胞需要经过一段时间生长后才有较高的紫杉醇合成能力 ;培养基中硝态氮浓度高有利于细胞生长 ,铵态氮浓度高有利于紫杉醇形成 ;在培养第 1 2d时用铵态氮培养基更换硝态氮培养基可使悬浮细胞的紫杉醇产量达到 8.5mg·L- 1 ,比对照高 1 .6倍     

红豆杉细胞培养生产紫杉醇粗品制备紫杉醇原料药的研究

通过考察紫杉醇提纯的多种方法,优化结晶析出法和柱层析法的工艺参数,首次将红豆杉细胞培养生产的65%的紫杉醇粗品分离纯化为符合美国药典USP标准的紫杉醇原料药.以红豆杉细胞培养生产的65%的紫杉醇粗品为原料提纯制备紫杉醇原料药的方法,重复性好、工艺合理、操作简单、绿色安全,有望解决紫杉醇原料药的药源供应严重不足的问题.     

双载体固定化中国红豆杉细胞的初步研究

对采用海藻酸钠和聚乙烯醇（ＰＶＡ）混合的双勒体包埋中国红豆杉悬浮细胞的条件进行了初步研究,建立了一套合适的国家化细胞条件,海藻酸钠浓度为３０ｇ／Ｌ,聚乙烯醇（ＰＶＡ）浓度为７０ｇ／Ｌ,ＣａＣｌ２浓度２０／Ｌ,包埋浓度为０．１８ｇ／Ｌ,接种密度为０．１２ｇ／Ｌ,在此基础上,对中国红豆杉细胞固定化２的培养基进行了优化,实验结果表明,从红豆杉树皮中分离出的真菌物作为诱导物能限制细胞生长,且明显促进紫杉醇     

中国红豆杉悬浮细胞固定化培养生产紫杉醇

对海藻酸钠包埋法固定中国红豆杉悬浮细胞的条件进行研究,建立了一套合适的固定化操作条件,即海藻酸钠浓度为３０ｇ／Ｌ,聚乙烯醇（ＰＶＡ）浓度为８０ｇ／Ｌ,ＣａＣｌ２浓度为２０ｇ／Ｌ,包埋密度为０．２ｋｇ／Ｌ,接种密度为０．１ｋｇ／Ｌ．在此基础上,对中国红豆杉细胞固定化培养的培养基进行了优化,结果表明,从红豆杉树皮中分离出的真菌培养物作为诱导物能限制细胞生长,且明显促进紫杉醇合成,并诱导紫杉醇分泌到培养液中．在培养基中适量地添加前体亦能提高紫杉醇的产量．对红豆杉细胞固定化培养中紫杉醇合成与分泌进行了动力学研究．     

种子细胞的生长时相和紫杉醇生产的关系研究

处在生长周期不同时相的红豆杉细胞作为种子细胞,接入含来自红豆杉树皮的真菌诱导子的生产培养基中,紫杉醇的生产和种子细胞的生长时相有明显的对应关系.来自对数生长后期和稳定前期的细胞,胞内紫杉醇含量分别为26.8μg·g-1和58.1μg·g-1;来自稳定后期的细胞对诱导子反应最敏感,紫杉醇含量比来自延迟期和对数生长初期的细胞中的紫杉醇含量提高了两个数量级,达421μg·g-1.     

Chitosan对红豆杉PAL及Taxol合成的影响

研究了Ｃｈｉｔｏｓａｎ（聚氨基葡糖）对红豆杉悬浮培养细胞ＰＡＬ（苯丙氨酸解氨酶）活性及Ｔａｘｏｌ（紫杉醇）生物合成的影响．种胚来源的红豆杉细胞培养在改良ＭＳ液体培养基中,于培养的第１８ｄ添加不同浓度的Ｃｈｉｔｏｓａｎ．Ｃｈｉｔｏｓａｎ浓度为１００～１０００ｍｇ·Ｌ－１时对红豆杉细胞ＰＡＬ活性有明显的诱导作用,且诱导作用随浓度的增加而增强,在诱导作用下ＰＡＬ活性在１６ｈ达到峰值;Ｃｈｉｔｏｓａｎ浓度在１００ｍｇ·Ｌ－１时对红豆杉细胞的生长基本无抑制作用,增产效果最显著（约为对照组的１０倍）,Ｃｈｉｔｏｓａｎ可作为Ｔａｘｏｌ合成的诱导子．     

红豆杉细胞聚集体悬浮培养生产紫杉醇

建立了中国红豆杉(Taxuschinensis)细胞聚集体两步法悬浮培养生产紫杉醇的培养体系.红豆杉细胞于含LH1g/L,NAA0.1mg/L,2,4-D0.5mg/L及6-BA0.8mg/L的细胞聚集体形成的培养基中生长并形成聚集体,10d后转入生产培养,较大细胞聚集体的生物量比和紫杉醇产量分别较对照组提高了53.7%和82.1%;提高细胞聚集体的生物量比能显著增加紫杉醇产量.四种基本培养基中B5最适合诱导细胞聚集体的形成.生长培养12d后细胞悬浮培养物按1∶1(体积比)直接转入生产培养对细胞生长、细胞聚集体和紫杉醇形成最有利.在100μmol/L茉莉酸甲酯作为诱导子下本体系紫杉醇产量较对照组提高了一倍.     

红豆杉细胞培养中抗褐变剂的筛选

研究了８种药剂对红豆杉愈伤组织的抗褐变影响,结果证实：活性炭（１０００ｇ／Ｌ）、水解乳蛋白（６００ｍｇ／Ｌ）、植酸（１００ｍｇ／Ｌ）等３种药剂的抗褐变效果最好,且对多酚氧化酶的抑制效果也最好．     

诱导促进中国红豆杉细胞培养中紫杉烷的积累

通过甲苯莉酮酸酯（MJA）或二氢甲基苯莉酮酸酯（HMJA）的诱导，有效增强了中国红豆杉（Taxus chinensis）悬浮细胞培养中新型生理活性物质云南紫杉烷（taxuyunnanine C,Tc）的积累。在培养第7天添加500μmol/L MJA后，产物的胞内最大含量为每克干细胞含29.5ng Tc，但细胞生长受到明显抑制；在添加100μmol/LMJA时，Tc的总产量达最大，为300mg/L。紫杉烷生物合成途径中的关键酶紫杉二烯合成酶的活力在被诱导后也获得大幅度提高。     

红豆杉细胞的筛选培养基优化

运用正交试验优化小细胞团法筛选红豆杉细胞系的筛选培养基 .培养基为改良的MS培养基 ,培养基质量浓度为硝酸钾 1 90 0mg·L-1,硝酸铵 82 5mg·L-1,磷酸氢二钾 1 70mg·L-1,蔗糖质量浓度 30 g·L-1,葡萄糖质量浓度 5 g·L-1,并且添加适量的酵母提取物、甘氨酸、维生素C、叶酸、氯化胆碱、泛酸钙等 .该培养基明显提高了细胞生长率 ,并能增加紫杉醇的含量     

红豆杉胚源细胞株的培养和紫杉醇的生产

研究了建立适用于紫杉醇生物合成的红豆杉 ( Taxus chinensis)胚源细胞株的方法 .红豆杉成熟种子 ,用自来水冲洗 9d,培养 1 0 d,萌发率可达 1 0 0 %.已萌发的种胚在诱导培养基中培养 6d,愈伤组织的诱导率达 1 0 0 %,使用红豆杉茎源细胞株看护培养诱导出的愈伤组织使愈伤组织的继代成活率提高一倍 .红豆杉茎源细胞株生长 1 5d的条件培养液也能使愈伤组织继代成活率提高 60 %.对建立的胚源细胞株进行了筛选和培养 ,其中细胞株 E2和 E3生长快 ,紫杉醇含量也较高     

脉冲电场对悬浮中国红豆杉细胞的影响

以中国红豆杉悬浮细胞为植物细胞的模型,研究了低频脉冲电场对植物细胞生长和次生代谢的影响.不同生长时相的红豆杉细胞在不同时间的脉冲电场作用下,其生长和紫杉烷积累的情况表现出明显差异.对数前期的细胞经30 min的电场诱导后,细胞生长没有明显变化,但紫杉烷的含量提高了近30%.并发现, 脉冲电场和补糖的组合策略能更有效地促进细胞积累紫杉烷.