利用抗生素耐药性突变技术筛选抗菌活性放线菌

利用抗生素耐药性突变,从12株天然无抗菌活性或活性微弱的放线菌中筛选活性菌株,共获得752株突变菌株.通过抑菌活性测定,筛选得到一株野生放线菌J22耐庆大霉素突变菌株,编号为J22-G6.该突变菌株具有强烈的抗细菌活性和较好的传代稳定性.该突变菌株在菌株形态方面与原始菌株有一定的差异.试验证明突变菌株J22-G6具有更强的耐受庆大霉素的能力.分析初步推定J22-G6所产生的抗菌活性物质为聚醚类化合物.     

秦巴山区三尖杉根际土壤放线菌的分离、筛选及活性菌株的鉴定

采用选择性分离方法从秦巴山区三尖杉植物根际土样中分离得到放线菌35株,以白色念珠菌(Candida albicans)、大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、沙门氏杆菌(Salmonella typhl)为靶标菌,采用滤纸片扩散法研究三尖杉根际土壤放线菌发酵液的抑菌活性。结果表明,16株放线菌表现出至少对一种靶标菌有抗性,占总分离菌株的45.7%,其中,菌株CF003对所有靶标菌均具有活性;经形态学和16S rRNA基因序列鉴定,这16株放线菌分属于链霉菌属(Streptomyces)和小单孢菌属(Micromonospora)。     

放线菌生物活性物质的高通量筛选

 放线菌是产生生物活性物质最多的一类微生物.最近3年,我室从云南省采集土样,分离到3000多株放线菌、真菌,选择其中2600株,进行发酵,制备成提取物,利用自建的抗氧化、抑制乙酰胆碱酶、抑制一氧化氮合成酶、AGE等模型和高通量筛选系统进行了筛选,筛选到一些值得进一步研究的菌株.对高通量筛选的有关问题及初步筛选结果进行了讨论.     

汕头南澳海绵Halichondria sp.放线菌分离的研究

海绵相关微生物是药物开发的重要资源.本文利用6种培养基对汕头南澳普遍存在的海绵Halichondria sp.的共附生放线菌进行分离和培养,共得到36株放线菌.基于16S rRNA基因序列的系统发育分析表明,这些放线菌分别属于Streptomyces、Nocardiopsis和Micromonospora属.抗菌活性筛选结果显示,分离菌株分别对Staphylococcus aureus、Bacillus subtilis和Escherichia coli等的生长有抑制作用.同时分子方法筛选显示这些放线菌具有潜在产生聚酮类、角蒽环类和非核糖体多肽类的能力.本研究结果为海绵相关微生物在药物开发方面积累了基础数据.     

百合内生放线菌的抗菌实验及其生理生化的相关研究

对百合中分离得到的一株放线菌进行传代培养,得到生长良好及性状稳定的实验菌株,然后测定其生理生化特性以及对几种不同病原菌的抑菌活性.该实验菌株最适生长温度为23℃,最适生长pH值为9,产淀粉酶和过氧化氢酶,对绿脓杆菌和肺炎双球菌等具有抑制作用.     

一株茶树内生放线菌的分离鉴定及抗菌活性测定

从茶树内生真菌芒果球座菌(Guignardia mangiferae)的菌落表面分离获得1株放线菌菌株BF-01,通过形态学观察和16S rDNA序列分析及抗菌活性测定,初步鉴定该菌株为卡伍尔链霉菌(Streptomycescavourensis).对其代谢产物进行了抑菌活性的初步研究,发现该菌发酵产物对除1株木霉外的7株茶树内生真菌及6株植物病原真菌均表现出不同程度的抑制作用.其发酵液氯仿萃取物对供试的5种病原细菌、1种白假丝酵母菌有较明显的抑制作用,对2种植物病原真菌的孢子萌发也有较强的抑制作用,表明菌株BF-01及其代谢产物具有广谱的抑菌活性.     

西双版纳橡胶,咖啡和胡椒根际放线菌的抗菌作用研究

对分别分离自橡胶、咖啡和胡椒根际的７５－９５株（８－１１属）放线菌所作的拮抗测定表明，有拮抗作用的菌占４４～４６％，作为优势菌群一链霉菌有一半以上有抑菌作用。特别从三作物根际分离到对使柑桔、胡椒、辣椒三种作物致病疫霉菌（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ），咖啡炭疽（Ｃｏｌｌｅｔａｔｒｉｃｈｕｍｌｏｆｔｅａｎｕｍ）和橡胶褐根病菌（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓｎｏｘｉｕｓ）分别有明显抑制作用的６株资源放线菌，有待开发研究。     

放线菌F401菌株杀虫活性研究

从江苏茅山地区竹林土壤中分离筛选到一株具有杀虫活性的放线菌F401号菌株。在扫描电镜下,该菌株的孢子丝呈紧密和松敞的小螺旋形,孢子椭圆形及圆柱形,表面光滑。气生菌丝灰褐色,菌落薄绒状,基内菌丝无色,不产生可溶性色素。摇瓶发酵菌丝抽提物稀释后对桑蚕(Bombyxmori)、大叶黄杨尺蠖(Abraxasmiranda)、褐刺蛾(Setorapostornata)及松褐天牛(Monochamusalternatus)等昆虫进行测试,均具有较强的杀虫活性。试验研究表明,此菌株是一种具有杀虫活性的链霉菌(Streptomicessp.)。     

博落回生物碱成分及其抗菌活性的研究

为研究罂粟科植物博落回的生物碱成分,采用硅胶柱层析、重结晶等方法对其进行了分离纯化,结果获得了5个生物碱,分别经波谱分析鉴定为:原阿片碱(I),pancorine(II),去甲基白屈菜红碱(III),6-丙酮基二氢血根碱(IV),6-丙酮基二氢白屈菜红碱(V),其中化合物(II)为首次从该植物中分离得到.抗菌圈检测发现博落回总生物碱抗菌作用较强,对金黄色葡萄球菌的抑制作用尤为显著.     

羧甲基壳聚糖银噻苯咪唑的制备及其抑菌性能

研究了一种新型广谱复合抗菌剂羧甲基壳聚糖银噻苯咪唑的制备与性能.抗菌实验结果表明:该新型复合抗菌剂能综合其单一组分抗菌剂或二元组分(羧甲基壳聚糖银和羧甲基壳聚糖噻苯咪唑)复合抗菌剂的优点,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉和毛霉等代表性微生物的最小抑菌浓度分别为20×10-6、25×10-6、20×10-6、40×10-6和450×10-6 g/mL,具有优良的广谱抗菌效果;同时,克服了银离子的变色缺陷;银和噻苯咪唑分别与高分子羧甲基壳聚糖中的胺基和羧基发生了键合作用.     

红树林内生真菌Penicillium sp.生物碱类次级代谢产物研究

7,18-dihydroxy-16,18-dimethyl-9-methoxy-10-phenyl（7,13E,16S,18S,19R）[11]cytochala-sa-6（12）13-diene-1,21-dione（1）,7-hydroxy-16-18-dimethyl-10-phenyl[11]cytochalasa-6（12）13-diene-1,21-dione（2）和viscumamide（3）3个生物碱类次级代谢产物来自于红树林内生真菌Peni-cillium sp.,通过一维和二维的核磁共振技术确定其结构,药理活性筛选结果表明,化合物1,2,3均对金黄葡萄球菌,和白色链球菌等有不同程度的抑制活性.     

舟山海域海泥细菌的分离及抗水产病原弧菌的筛选

采集中国东海舟山海域海底不同层次9个海泥样品,通过稀释培养分离纯化得到海洋细菌78株。采用滤纸片琼脂扩散法测定上述分离所得海洋细菌对鳗弧菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌、创伤弧菌、费氏弧菌等5种水产病害常见病原弧菌的抑制作用,获得具有抑弧菌作用的海洋细菌17株,占21.8%。其中6株菌株对费氏弧菌有明显的抑菌作用,占7.7%。7株菌株对哈维氏弧菌的抑菌作用较显著,占9.0%。2株菌株对创伤弧菌有明显的抑菌作用,占2.6%。2株菌株对溶藻弧菌和鳗弧菌显示一定的抑制作用,各占1.3%。研究结果表明:通过稀释培养法能分离到一定数量和种类的海洋细菌;来自海底泥的海洋细菌中存在较多的具有水产病原弧菌拮抗活性的菌株。     

反丁烯二酸单糠醇酯钠的合成及抗菌活性

合成了一种具有α,β-不饱和羰基结构的新型水溶性防腐剂反丁烯二酸单糠醇酯钠,并对其抗菌活性进行了研究,确定合成工艺条件如下：顺丁烯二酸酐与糠醇等摩尔比混合,于90℃反应2．5h实现糠酯化,然后加入无水三氯化铝在90℃反应4h后得单糠醇酯,过量的单糠醇酯再与碳酸钠溶液煮沸反应得产物．抗菌活性试验表明,反丁烯二酸单糠醇酯钠对常见细菌和霉菌的抑制作用较强,相比而言对酵母的抑制作用稍弱．另外,它可以有效抑制牛奶酸败混合微生物,使其需较长时间才能到达生长适应期,同时可降低微生物的生长量,且效果优于苯甲酸钠．     

变压器介质油中放线菌对油介损的影响

用自制的JOA液体培养基首次从报废的大型变压器介质油中分离到两种放线菌: 枝动菌和罗思氏菌, 它们都能以介质油为惟一碳源进行生长繁殖, 枝动菌对变压 器油介损的影响更为显著. 研究结果表明, 油介损随油中菌浓度的升高而升高, 随运行时 间的增加而增加.     

中国不同地区蜂胶的抑菌性研究

蜂胶具有显著的抑菌性,常被做成药品或保健品.为了解中国蜂胶的抑菌性,本实验以采自中国23个省的29种蜂胶(根据采集地气候区域分为5类)为研究对象,分别提取获得蜂胶醇提物(EEP),并测定了EEP对枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、产气杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、毛霉、青霉、曲霉、根霉的抑菌圈大小和最小抑菌浓度,比较不同气候区域蜂胶的抑菌性差异.结果表明,EEP对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌均有明显的抑菌性,平均抑菌圈直径分别为:9.88mm±1.47 mm、8.75 mm±1.56 mm和10.01 mm±0.65 mm,EEP对真菌的抑菌性最强,其次为革兰氏阳性菌,最弱为革兰氏阴性菌;9个菌种中,EEP对变形杆菌的抑菌性最差,对根霉的抑菌性最好;不同气候区域蜂胶的EEP抑菌性没有显著差异.     

硒矿区土壤中真菌的分离培养及抗肿瘤活性筛选

利用单菌落挑选与划线培养技术,从硒矿区土壤样品中分离纯化真菌。通过摇床发酵培养,提取制备发酵样品。采用MTT法,用MDA-MB-231细胞、Hela细胞、SMMC-7721细胞测试发酵样品的抗肿瘤活性。从采自湖北恩施全球唯一独立硒矿床区的6个不同土样中分离真菌73株。其中,对人宫颈癌Hela细胞的IC_(50)小于90μg/m L的菌株32株,对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的IC_(50)小于90μg/m L的菌株13株,对人肝癌SMMC-7721细胞的IC_(50)小于90μg/m L的菌株9株。这些活性菌株为筛选抗肿瘤天然产物提供了良好的药源菌株。     

琼脂扩散法测定罗布麻韧皮中酮类物质的抑菌活性

罗布麻在生物法脱胶方面存在一定困难.主要原因是因为有抑菌物质的存在.对青海罗布麻韧皮中的酮类物质进行了分离提取,用梯度稀释法测定了酮类物质对金黄葡萄球菌的最小抑菌浓度,用琼脂扩散法对金黄葡萄球菌、大肠杆菌、啤酒酵母菌、黑曲霉的抑菌活性进行了研究.结果表明,罗布麻酮类化合物对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为1.563 μg·mL-1,浓度为1 g·L-1的罗布麻酮类化合物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、啤酒酵母菌、黑曲霉的抑菌活性分别为32.835,15.734,21.521,21.322IU·mg-1.从抑菌活性看,罗布麻酮类化合物对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌有较强的抑制作用,对革兰氏阴性菌黑曲霉的抑制作用较弱.证实罗布麻酮类化合物对细菌和真菌有抑制作用.     

抗菌肽及其应用前景

抗菌肽具有分子量小、热稳定性和广谱抗菌等特点。由于抗菌肽具有全新的抗菌机制，所以．它不仅能抗多种细菌和真菌，而且还抗原虫、病毒和肿瘤细胞。抗菌肽的开发和应用已成为科学研究热点，在动植物转基因工程及药物开发领域具有广阔的应用前景。     

一株具有广谱抑菌活性的兵马俑芽孢杆菌HS-15的筛选及其抑菌活性研究

采用高浓度土壤菌悬液涂平板法筛选出45株具有抑菌活性的菌株;以其中一株具有较强抑菌活性的菌株为研究对象,通过细胞形态特征、生理生化实验及16S rDNA序列分析等方法,将其鉴定为兵马俑芽孢杆菌,并命名为Bacillus bingmayongensis HS-15;分别用点植法和平板对峙法检测HS-15对细菌和真菌的抑菌活性,结果发现,该菌株对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌都有较强的抑制作用,是一株广谱微生物拮抗菌;发酵条件优化结果表明,28 ℃发酵20 h时,发酵液对金黄色葡萄球菌的抑菌活性最强;经透析袋处理,抑菌活性没有变化,而胰蛋白酶和蛋白酶K处理后,抑菌活性丧失,初步推测抑菌物质为蛋白质类.本研究丰富了产抑菌活性物质微生物菌种资源库,为天然防腐剂的开发提供理论基础.