侵染加工番茄的BBWV2的分子鉴定及田间检测

利用蚕豆病毒属的兼并引物对23个加工番茄病株进行RT—PCR检测,其中19株检测出被该属病毒侵染。从中选取4个病株的RTPCR产物进行克隆和测序,将所得序列经过基因库检索发现,4个序列均与蚕豆萎蔫病毒2（BBWV2）基因组RNA1的序列同源性最高。然后对病毒分离物XJ14-1基因组进行进一步的克隆和测序,获得RNA1组分3659个核苷酸,RNA2组分1300个核苷酸,序列比对结果显示,它们与BBWV2的RNAl和RNA2具有高的序列同源性,分别为76．6％～94％和76．9％～94．1％,而与BBWVl的RNA1和RNA2的序列相似性都很低。因此分子鉴定结果表明,新疆加工番茄受到BBWV2的侵染。利用BBWV2的单克隆抗体对田间不同品种（品系）加工番茄病株进行ELISA检测,结果显示田间病株带毒率达到53．3％,并且供试20品种（品系）均可被BBWV2侵染,该数据表明,BBWV2在田间发生普遍。     

感染新疆番茄的一种杆状病毒的鉴定

从新疆感病毒番茄分离到一株属于类草花叶病毒组的病毒，感病番茄显示生长阻滞，叶片皱缩花叶畸形以及坏死等系统侵染症状；该病毒可经汁液传播侵染属于１０科的１８种草本植物，但不能经桃蚜传播，感病组织粗汁液和提纯病毒制备物在ＳＤＳ双向免疫扩散试验和酶联免疫吸附试验中与烟草花叶病毒ＵＩ株系抗血肖发生强烈的免疫反应，该病毒的病毒粒子为长２９０ｎｍ，宽２０ｎｍ的直杆状病毒粒子，其体外存活期在粗汁液中２个月，在干组     

几种叶面肥在加工番茄上的应用效果

试验结果表明,几种叶面肥喷洒在加工番茄上均可增产8.3%-28.7%,其中喷洒劲康霖作物营养剂处理区单产比对照提高了32 947.6kg/hm2、增产28.7%,增值8072.16元/hm2,均列第一位,有较大的推广价值。     

一种非洲番茄黄化曲叶病毒DNA的克隆

用ＰＣＲ获得了非洲塞内加尔番茄黄化曲叶病毒（ＴＹＬＣＶ－ＳＥＮ）的全长ＤＮＡＡ，并进行了克隆和部分序列分析，ＤＮＡ序列分析的序列并１３５９ｂｐ，包括外壳蛋白基因，ＡＶ１基因，基因间区（ＩＲ）及部分复制酶基因，计算机分析显示：ＴＹＬＣＶ－ＳＥＮ与其他亚组ＩＩＩ及生理病毒相比，外壳蛋白氨基酸同源性为６７％～８３．４％，ＡＶ１基物氨基酸同源性为６１％～８４％，ＩＲ最大同源性为６０％～６８％，且与非洲和中     

新疆加工番茄生产过程存在问题分析

本文就新疆加工番茄生产过程存在的田间生产管理水平较低,果实浪费严重,种植品种和模式过于单一等问题进行了初步分析,认为在生产中需要针对当前存在问题,建立种植规范,加强田间管理,提高加工番茄的产量,改善果实品质,积极提高加工番茄水肥利用效率,在生产中建立节水、高产、优质、高效的加工番茄水肥一体化的灌溉技术模式,实现新疆加工番茄种植生产的规范化、集约化生产。     

新疆猪瘟病毒分子流行病的研究

采用RT-PCR方法从新疆临床发病猪场采集的病料中扩增了CSFV流行株E2基因的主要抗原位点编码区，测定了15株CSFV的核苷酸序列。应用DNAstar计算机软件对6个地区6个代表株CSFV的核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了比较分析，结果表明：新疆6株CSFV流行株与猪瘟兔化弱毒株(C株)核苷酸序列的同源性为80．9％～82．8％，氨基酸的同源性为86．2％～88．3％，说明新疆CSFV流行株E2基因发生了部分变异，与疫苗株相比抗原性产生一定的差异。     

侵染番茄的中国番茄黄化曲叶病毒致病性相关分子的遗传多样性

对云南番茄中的中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl China virus,TYLCCNV)不同分离物的致病性相关分子DNAβ进行PCR扩增和克隆.全序列比较分析发现滇西北和滇南各分离物DNAβ同源率较高而且进化关系较近,滇西南与之差异较大.获得的16个DNAβ分离物具有一定的地理分布差异.     

新疆天山北部地区加工番茄上ToMV和CMV的动态分析

为研究加工番茄上ToMV和CMV消长动态,采用RT-PCR方法对新疆天山北部6个地区采集的加工番茄样品进行了分子检测。结果表明:不同地区的138份加工番茄样品中,石河子、奎屯、乌苏的样品在存在CMV和ToMV,并以CMV为主,ToMV次之;从石河子蔬菜研究所,按不同品种不同时间采集的加工番茄660份样品中,CMV的检出率为21.5%,ToMV的检出率为12.1%,2种病毒的复合检出率为8.9%,病毒的检出率明显低于往年;CMV和ToMV分别在6月25和7月11日左右开始发生,CMV比ToMV早发生10-15 d。2种病毒的发生高峰期都在8月中下旬,复合侵染发病期在7月下旬;品种间2种病毒的消长动态没有明显的差异。     

新疆甜菜上两个病毒分离物的研究

在新疆甜菜的根部和叶片分离到两种病毒分离物。回接到甜菜上均产生环斑和沿脉线纹。最后形成坏死斑。病毒粒体为20面体,平均直径28nm。除侵染甜菜外还侵染苋色藜,昆诺阿藜、番杏、菠菜等,引起局部坏死斑,在普通烟、心叶烟、菜豆、黄瓜、番茄上无症状侵染,病毒致死温度为70℃,10分钟,体外存活期13天以上,冻干病叶三年后仍有侵染力。通过PEG沉淀。差速离心,琼脂糖柱层折及蔗糖梯度离心,可得到较高浓度的纯化病毒,病毒的紫外吸收最低值在245nm,最高值在260nm。病毒外壳蛋白的分子量为54000道尔顿,病毒基因组核酸为两个组份。在琼脂双扩散实验中,能与番茄黑环病毒(TBRV)抗血清产生较弱的沉淀线,与黄瓜花叶病毒(CMV),烟草坏死病毒(TMV)。烟草环斑病毒(TRSV)不发生反应,从上述结果可以初步认为这两种分离物为番茄黑环病毒侵染甜菜的一个株系。     

一种马铃薯病毒RT-PCR诊断新方法

对传统的植物病毒RNA苯酚提取法进行改进;同时设计并优化单管RT-PCR(O ne-tube RT-PCR)方法,使传统的RT-PCR两步反应在一个反应体系中同时进行,依据马铃薯Y病毒和马铃薯S病毒的基因组RNA保守序列设计2套特异性引物,采用上述新建立的检测方法对染病的马铃薯叶片组织进行病毒检测,结果与G eneB ank中报道的这两种马铃薯病毒核苷酸序列进行B last比较,同源性达到96%以上,用这种新型诊断方法对马铃薯病毒核酸进行了浓度检测,实验结果证明,这种新型马铃薯病毒诊断方法具有可靠、快速、简便等特点.     

植物病毒分子检测方法研究进展

介绍了双链RNA、核酸杂交、多聚酶链式反应、核酸序列扩增、基因芯片等分子检测方法在植物病毒检测中运用的成功技术,并具体介绍了各种分子检测方法的原理和特点。     

大熊猫粪便样品中犬瘟热病毒的检测

根据GenBank中登录的犬瘟热病毒(CDV)N基因序列,设计合成1对特异性引物,以犬瘟热病毒疫苗中提取的RNA为阳性模板建立了快速检测CDV的RT-PCR方法,结果显示,所建立的CDV RT-PCR扩增得到与理论设计值大小一致的456 bp的特异性片段,对犬细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、牛轮状病毒(BRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、大肠杆菌(E.coli)和新城疫病毒(NDV)的扩增结果均为阴性;最低可检出约1.53×10~2拷贝/μL的核酸;重复性试验结果表明,该方法检测重复性好.此方法对成都大熊猫繁育研究基地的37份眼观正常的大熊猫粪便样品检测,未检测出犬瘟热病毒,与胶体金试纸卡检测结果一致.     

犬瘟热病毒RT-PCR检测方法的建立与应用

根据Barrett发表的犬瘟热病毒 (CDV)Onderstepoort弱毒株融合蛋白 (F)基因序列 ,设计合成了一对寡聚核苷酸引物 ,并以南京农业大学惠赠的Onderstepoort标准株反转录产物为模板 ,建立了CDV的RT PCR方法 ,并应用于CDV的诊断。结果表明 ,以该对引物 ,只能从CDV ONP标准株反转录产物中扩增出大小为 32 4bp的核苷酸片段 ,与理论设计值大小一致 ,而正常Vero细胞和同为副粘病毒科的新城疫病毒 (NDV)作为对照 ,病毒扩增结果为阴性。RT PCR可检出 1μl作 10 6倍稀释的CDV ONP标准株反转录产物 ,说明其具有很高的敏感性。应用试验结果 ,可从感染CDV犬的组织病料中提取RNA ,反转录产物中也扩增出 32 4bp的核苷酸片段。通过本研究不仅建立了敏感性、特异性好的CDV的RT PCR检测方法 ,也为F基因的克隆和序列测定及表达奠定了基础。     

新疆辣椒上一种球状病毒的鉴定

1990年,从辣椒上分离到一个病毒分离物,代号P—9003。人工接种可侵染6科14种植物,回接辣椒产生轻微花叶,不被蚜虫传播,可通过汁液摩擦传染。致死温度80—85℃,稀释限点为10~(-7),体外保活期18天左右。病毒粒体球状,密集时呈多角形,直径33—34nm。该病毒在寄主体内浓度较大,通过差速离心和蔗糖梯度离心容易获得较高浓度的纯化病毒,病毒衣壳蛋白分子量为一个组份,约为27500道尔顿。核酸分子量为三组份,分子量分别为1.24,0.55和0.37×10~6道尔顿。与黄瓜花叶病毒(CMV),蚕豆萎蔫病毒(BBWV),烟草坏死病毒(TNV),烟草环斑病毒(TRSV),香石竹环斑病毒(CRSV)的抗血清不发生反应。与番茄黑环病毒(TBRV)抗血清产生微弱的沉淀线。衣壳蛋白分子由211个氨基酸组成。根据多项测定结果认为,虽P—9003与TBRV抗血清有微弱反应,但其它各项特性与TBRV相差甚远,为非特异反应。P—9003的核酸和蛋白分子量与已知的几个球状病毒组的数据均不相符,因此认为P9003为一种木报导过的球状病毒,暂定名为辣椒轻花叶病毒(PepperMild Mosaic Virus,PMMV)。     

新疆白蒜洋葱黄矮病毒的分子鉴定

从新疆吉木萨尔县采集具有条纹花叶、畸形等症状的大蒜叶片提取总RNA,利用洋葱黄矮病毒的特异性引物进行RT-PCR扩增,可得到大小为1402bp片段。将获得的片段克隆到PMD18-T载体进行序列测定和同源性比较,结果表明,OYDV新疆吉木萨尔分离物为1402个核苷酸,可编码467个氨基酸,与GeneBank中的12个OYDV核苷酸序列相比,序列同源性为80%～99%,由此推导的氨基酸序列同源性为88%～99%。     

番茄黄化曲叶病毒自然种群的分子变异和进化研究

研究目的：创新要点：研究方法：重要结论：2006年我国上海首次发现番茄黄化曲叶病毒（TYLCV），随后TYLCV迅速蔓延至全国13个省份和自治区。本研究分析了2006至2010年期间TYLCV在我国首发地上海市的分子变异规律。本研究持续五年追踪田间TYLCV，分析TYLCV的全长基因组序列、分子变异及种群遗传结构，为防控TYLCV提供理论依据。2006至2010年从上海采集了26个TYLCV的分离物，利用高保真性的滚环扩增技术获得TYLCV分离物的全长基因组。应用MEGA5等生物信息学软件分析TYLCV的分子变异。TYLCV自然种群具有与RNA病毒相似的突变率，以基因间隔区的分子变异最大，平均突变率为4．81×10-3（见图2和表2）。TYLCV的大部分基因都处于负向选择，但包含在c1开放阅读框内的C4，却与c1承受着不同的选择压而处于正向选择（见图3和表6）。     

加工番茄田间果实发病与腐烂的研究与分析

在夏季果实成熟期,加工番茄果实发病和腐烂造成大幅度减产减收以及加工制品的品质下降的问题尤为突出。本研究根据2003—2004年新疆北部加工番茄病害的情况,2005年有针对性地选点、抽样和跟踪调查,重点研究了加工番茄田间果实发病和腐烂的主要类型、特点及病因、病原菌;调查研究了田间发病情况及其与果实发病与腐烂的关系;研究了人工接种条件下主要病原菌对果实的侵染情况。通过研究与分析,对加工番茄田间果实发病与腐烂问题有了进一步的认识,为生产上解决该问题提供了依据。     

一种文件型病毒的检测与清除

本文通过对ＰＲＧＫＩＬＬＥＲ病毒特征的分析，给出了几种检测和消除该毒病的方法。     

用微量单管RT－PCR快速检测及定型脊髓灰质炎病毒

介绍一种逆转录─聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）的简单快速检测和定型脊髓灰质炎病毒（ＰＶ）的方法，无需提取ＰＶＲＮＡ，共用一种缓冲系统，将ＲＴ和ＰＣＲ试剂混合在２０μＬ反应体系中，整个操作可置于一不间断温度循环程度程序中完成。一步法ＲＴ－ＰＣＲ与常规ＲＴ－ＰＣＲ及中和抗体试验对ＰＶ的检测结果完全一致，它的检测敏感度可达５ＴＣＩＤ（５０）／ｍＬ。该法需要的时间，费用和污染的都大大减少，而且特别适于临床常规诊断和鉴别ＰＶ的需要。