人脐带静脉血管内皮细胞的体外培养及其凋亡的研究

本文从提取生长因子入手，建立人脐带静脉血管内皮细胞系，用电镜进行了细胞鉴定，然后用去除生长因子（FGF和胎牛血清）的方法诱导细胞凋亡，利用荧光显微技术、DNA凝胶电泳、电镜技术和流式细胞分光光度技术，研究了血管内皮细胞凋亡过程中超微结构和细胞周期的变化。发现去除生长因子3h后，在细胞发生明显的DNA片段化和形成凋亡小体的同时，细胞核与细胞质的超微结构发生了明显的变化，S期细胞显著减少，G1期无明显变化，G2细胞显著增多，说明用去除生长因子的方法诱导血管内皮细胞凋亡时，细胞从G2期脱离细胞周期进入凋亡程序，本文的人血管内皮细胞在体外的成功培养和对该细胞凋记的研究对深入研究其凋亡的分子调控机制具有重要的参考价值。     

人脐静脉内皮细胞原代培养方法的建立

目的：探索并建立人脐静脉内皮细胞（删Ⅶc）体外稳定培养的方法。方法：以1％Ⅱ型胶原酶消化收集人脐静脉内皮细胞，用嘲加10％的胎牛血清进行培养，免疫细胞化学方法鉴定内皮细胞。结果：原代培养的内皮细胞镜下呈典型的铺路石或者鹅卵石样排列，3～4d时生长最快。5d左右融合；免疫细胞化学染色显示内皮细胞Ⅷ因子相关抗原表达阳性。结论：酶消化法获得的原代血管内皮细胞有较高的存活率，可以作为基础和临床研究的良好模型。     

酸性成纤维细胞生长因子对人脐静脉血管内皮细胞一氧化氮生成的影响

目的：观察人酸性成纤维细胞生长因子（haFGF）及其非促分裂型突变体（nmhamF）对人脐静脉血管内皮细胞（HEC）一氧化氮（NO）生成的影响。方法：实验分3组,分别为haFGF组、nmhaFGF组和对照组。用Griess反应法检测细胞培养上清NO相对含量（N嘎）。结果：haFGF和nmhaFGF都能诱导内皮细胞NO的生成,但同样条件下,nmhaFGF组诱导产生NO的相对含量与对照组比较在0．10、1．00、10．00、50．00、100．00ng／mL时均高（P〈0．01）。与haFGF组比较在0．10、1．00、10．00、50．00ng／mL时nmhaFGF组诱导产生NO的相对含量明显下降（P〈0．01）,在0．01和100．00ng／mL时也有降低（P〈0．05）。结论：nmhaFGF仍保留一定的诱导内皮细胞产生NO的作用,但NO生成量有显著下降。     

同型半胱氨酸对钙离子激活状态下内皮细胞eNOS活性及NO含量的影响

研究同型半胱氨酸(HCY)在钙离子导体(A23187)刺激下,对内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性及一氧化氮(NO)含量的影响及机制。收集人脐静脉内皮细胞(HUVEC)进行细胞培养,取第二代细胞分4组:对照组,HCY组,A23187组和HCY A23187组。继续培养24h后,测定细胞培养液中NO、丙二醛(MDA)含量和eNOS、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果显示:1)与对照组相比,HCY组培养液中NO含量降低、eNOS活性减弱、MDA含量升高、SOD活力增强(P<0.05);A23187组NO含量升高、eNOS活性增强、MDA含量降低、SOD活力增强(P<0.05)。2)与A23187组相比,HCY A23187组NO含量降低、eNOS活性减弱、MDA含量升高(P<0.05),HCY不影响A23187激活状态下SOD活力的升高(P>0.05)。结论:HCY在静息及钙离子导体(A23187)激活状态下,使HUVEC中NO含量降低e、NOS活性减弱、MDA含量升高,SOD活力代偿性升高。其机制可能与HCY导致的氧化应激抑制eNOS活性及降低NO的生物利用度有关。     

小凹蛋白-1和钙受体在人的脐静脉内皮细胞的表达

为探讨人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中小凹蛋白-1与细胞外钙受体表达及定位,为进一步功能研究提供理论依据,采用Western-blot和Rt-PCR及免疫荧光技术检测HUVEC中小凹蛋白-1与细胞外钙受体mRNA和蛋白表达及定位.结果显示:(1)形态学观察和免疫细胞化学法测Ⅷ因子抗原,95%以上的细胞呈阳性着色,证实细胞为HUVEC.(2)RT-PCR检测到HUVEC中459bp和260bpmRNA表达,Western-blot测到HUVEC中22KD和150-160KD蛋白表达.(3)免疫荧光检测到小凹蛋白-1与细胞外钙受体定位于人脐静脉内皮细胞膜.由此可知,人的HUVEC中有小凹蛋白-1与细胞外钙受体表达,两者是否共定位及其功能有待进一步研究.     

纳米级载药微泡的制备及其超声介导下的抑瘤研究

具有超声造影剂和药物载体双重功能的聚乳酸(PLA)微泡存在着载药率较低以及不能有效地透过肿瘤组织等缺点.对此,以PLA和卵磷脂为药物载体,采用改良的超声复乳法制备载紫杉醇的PLA-卵磷脂纳米级微泡.考察了卵磷脂对载药微泡理化特性(包括:形态、粒径、载药量、包封率和体外释药特性)的影响,利用X-射线衍射分析(XRD)考察了药物在微泡中的状态,最后在超声介导下对荷瘤小鼠的抑瘤率进行了研究.结果表明,卵磷脂与PLA质量比为50∶250时可制备得到平均粒径615 nm、内部空心的纳米级微泡,药物包封率达(90.90±5.79)%,载药率为(8.26±0.53)%,紫杉醇以无定型状态分布在微泡的壳中.微泡的体外药物释放具有缓释、零级释放以及超声介导加快药物释放的特性,而通过对H22肝癌荷瘤小鼠的实验研究表明,相对于紫杉醇针剂而言,超声介导下载药PLA-卵磷脂纳米级微泡注射剂能减小对小鼠的毒副作用,提高抑瘤率.     

“去细胞”羊膜基质与人脐静脉内皮细胞相容性的实验研究

测定“去细胞”羊膜基质（human acellular amniotic membrane，HAAM）与人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endotholica lcell，HUVEC）的相容性，为提高内皮细胞在血管支架上的粘附率提供新的途径。     

重组人血管内皮细胞生长因子的表达及活性研究

目的 :用基因工程的方法在大肠杆菌中诱导表达人血管内皮生长因子 (VEGF) ,分离纯化并检测其生物学活性 ,以研究其在药学领域潜在的药用价值。方法 :利用PCR技术扩增VEGF基因片段 ,克隆到pQE30表达载体中 ,转化E .coliM15菌株后用IPTG进行诱导表达。经裂解细胞、变性、复性和Ni-NTAagarose金属螯合柱层析等方法纯化得到VEGF。用鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)血管生成实验检测VEGF的生物活性。结果 :重组表达质粒在大肠杆菌中成功地表达了相对分子质量为 2 0 6 0 0的融合蛋白 ,它以不溶性的包涵体形式存在 ,占菌体总蛋白的 30 %左右。经分离纯化融合蛋白SDS -PAGE显示为单一区带。CAM结果表明给药组血管生成数 (2 1 7± 3 1、39 3± 2 8)与对照组 (15 4± 1 9、2 9 2± 4 2 )相比有明显增加 (P <0 0 5 )。结论 :利用原核表达系统得到血管内皮生长因子具有天然VEGF生物学活性 ,为进一步的应用研究奠定了基础。     

鱼腥草素钠对人脐静脉内皮细胞NO合成及NOS活力的影响

目的:研究鱼腥草素钠对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)NO合成及一氧化氮合酶(NOS)活力的影响.方法:采用15μg/ml LPS作用于HUVECs,共同孵育12h建立炎性损伤细胞模型.考察不同剂量鱼腥草素钠对各组HUVECs细胞存活率、培养上清液中LDH活力、NO含量、内皮型NOS(eNOS)及诱导型NOS(iNOS)表达的影响.结果:鱼腥草素钠可明显提高HUVECs细胞存活率,增加NO的分泌与释放,提高eNOS与降低iNOS活力,从而保护脂多糖诱导的HUVECs炎性损伤.结论:鱼腥草素钠对脂多糖诱导损伤的内皮细胞具有保护作用,其机制与其促进内皮细胞NO分泌与释放,增强eNOS活性和表达,改善血管内皮功能状态相关.     

冻干辐照人脐动脉的制备及其物理性能的实验研究

为寻找理想的冠状血管移植物——同种异体小口径血管移植材料，１９９３年７月至１９９４年５月，自行制备采用冻干辐照方法处理人脐动脉血管并进行物理性能的比较．结果表明，经冻干辐照处理之后，该脐动脉血管的物理性能改善，弹性和顺应性都明显提高，仍然保持良好的耐压能力，能够满足移植血管物理性能方面的要求，是一种较好的中小型血管移植物     

微波对不同浓度EDTA骨脱钙的影响

目的:探索微波在持续高沸状态下对不同浓度EDTA骨脱钙的影响;方法:对不同浓度的EDTA脱钙液进行恒定功率处理,常规制样染色。结论:持续高沸状态下EDTA脱钙与单纯室温相比无明显差异,采用10 EDTA液进行骨组织脱钙效果理想。     

黄瓜香水提物体外抗氧化活性实验

采用体外实验检测黄瓜香水提物对·ＯＨ自由基和ＭＤＡ的影响,结果表明:黄瓜香水提物30,15,7.5 ｇ/L剂量组能显著清除·OH自由基和降低ＭＤＡ水平(Ｐ<0.01).说明黄瓜香水提物具有较强的抗氧化作用.     

叉毛蓬体外抗氧化活性的研究

从植物中探寻能够清除自由基的天然抗氧化剂是目前天然产物化学研究热点之一,本文研究了新疆藜科植物叉毛蓬的抗氧化活性成分。本研究采用乙醇加热回流法提取叉毛蓬中的有效成分,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,再分别以DPPH、邻苯三酚自氧化和FRAP三种抗氧化活性分析方法对乙醇粗提物及各段提取物进行抗氧化评价,且与阳性对照抗坏血酸(AA)和叔丁基对苯二酚(TBHQ)进行比较分析,结果表明:叉毛蓬不同溶剂提取物均有清除DPPH自由基、O2-·自由基的能力,也有一定的还原能力,但均弱于阳性对照AA和TBHQ。     

几种神经递质对蟾蜍离体胃电和胃内压的影响

本实验用缝合电极和插入气囊法,观察几种神经递质和阻断剂对蟾蜍离体胃电和胃内压活动的影响,结果如下:Ach使胃内压升高,此效应为阿托品所阻断;Ach使胃电慢波振幅降低,频率加快,此效应不能被阿托品阻断。NE和Ad均使胃内压降低,胃电振幅降低,频率减慢,心得安不能阻断这一效应,心得宁对胃内压的阻断作用大于regitina,而对胃电的作用小于regitina。单独使用阿托品、心得安、心得宁和regitina均影响胃电和胃内压活功,说明胃壁内神经丛参与胃运动的调节。     

萘乙酸和吲哚丁酸对胡颓子扦插生根的影响

为摸索萘乙酸(NAA)和吲哚乙酸(IBA)有效促进胡颓子扦插生根的最佳处理,以河沙为基质,用不同浓度和不同配比的NAA和IBA溶液处理插穗基部,统计分析不同处理对插穗生根率、生根数、根长及根粗的影响。结果表明,浓度处理上,生根数和根粗均是浓度为100 mg·L~(-1)的处理极显著高于浓度分别为150 mg·L~(-1)、50 mg·L~(-1)和200 mg·L~(-1)的三个处理,后三者间差异不明显;生根率和根长均是浓度为100 mg·L~(-1)和150 mg·L~(-1)的处理显著高于浓度为50 mg·L-和200 mg·L~(-1)的处理,100 mg·L~(-1)的处理和150 mg·L~(-1)的处理间差异不明显。不同配比处理上,根长间差异显著,生根率、生根数、根粗间差异均不显著;生根率和根长、生根数均是IBA及其混合液好于NAA,混合液以6份NAA+4份IBA和5份NAA+5份IBA效果比较好;根粗是NAA及其混合液好于IBA,混合液以8份NAA+2份IBA效果最好。可见,用浓度为100 mg·L~(-1)的NAA和IBA按6∶4或5∶5的比例混合处理胡颓子插条生根效果最佳。     

喙尾琵琶甲提取物体外抗菌作用研究

目的:研究喙尾琵琶甲不同极性组分的抗菌活性,筛选出抗菌活性部位。方法:通过硅胶柱层析得到不同极性的组分,采用试管稀释法测定不同组分对6种临床常见的病原菌的MIC及MBC。结果:乙酸乙酯、丙酮洗脱组分有较好的体外抗菌作用,乙酸乙酯组分活性强于丙酮组分;石油醚、氯仿、甲醇组分对所测菌株没有体外抗菌作用。结论:喙尾琵琶甲提取物具有良好的体外抗菌作用,乙酸乙酯组分为体外抗菌活性部位。     

两种硝酸盐浓度下威氏海链藻和盐生杜氏藻硝酸还原酶活力研究

把盐生杜氏藻(Dunaliella salina)和威氏海链藻(Thalassiosira weissfilgii)培养在两种硝酸盐浓度下(800μmol／L和200μmol／L),比较研究了它们在培养液中硝酸盐及亚硝酸盐的变化及细胞硝酸还原酶活力变动情况．结果表明,在两种硝酸盐浓度下,两种微藻培养液中硝酸盐及亚硝酸盐的变化基本相同．在高硝酸盐浓度下,两种微藻培养液中的硝酸盐减少并维持较高的浓度,且细胞叶绿素a含量较高;而在低硝酸盐浓度下,培养液中的硝酸盐在培养的第二天即被耗尽,且细胞叶绿素a含量很低．培养液中亚硝酸盐的变化在高浓度呈现逐渐增加的趋势,而在低浓度则呈现先增加后减少的趋势;两种微藻的硝酸还原酶活力在培养的第二天即达到最大值,随后迅速下降并维持一低值,但威氏海链藻的硝酸还原酶活力要略高于盐生杜氏藻．本研究结果表明,在不同硝酸盐浓度下藻类细胞内部的硝酸盐的吸收同化机制不同,从而导致营养盐的变化也各不相同．     

不同氮磷质量浓度对鳗池优势藻生长的影响

以铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)、水华微囊藻(Microcystis flos-aquae)、小球藻(Chlorella vulgaris)、四尾栅藻(Scendesmus quadricauda)4种鳗池常见优势藻为实验对象,研究不同N、P质量浓度对4种藻生长的影响.结果表明:铜绿微囊藻和水华微囊藻最适生长的N、P质量浓度范围分别为150～350mg/L和0.005～5mg/L,小球藻的最适N、P质量浓度范围分别为25～250mg/L和75～100mg/L,四尾栅藻的最佳N、P质量浓度范围分别为25～150mg/L和50～100mg/L.从实验结果来看,蓝藻和绿藻对N、P的需求差异较大.     

In Vitro Biossay for Assessing Estrogenic Activity of Sewage Treatment Works

The estrogenic activity of influents and effluents of five municipal sewage treatment works(STWs)in Nanjing was investigated.The water samples were enriched by solid phase extraction,then eluted with different polar solvents,and finally three fractionated extracts were obtained.Estrogen receptor recombinant yeast screen was used to evaluate the estrogenic activity of individual fractionated extracts and their mixture.The results show that the influents and effluents of the two STWs mainly receiving industri...     

不同种公牛精液对牛卵母细胞体外受精效果影响的研究

分别利用不同个体的海伏特、安格斯和荷斯坦种公牛精液进行体外受精，观察了不同品种不同个体种公牛精液的体外受精效果，利用五种海伏特种公牛精液进行体外受精后卵裂率为１７．６％～７４．７％，囊胚发育率为１．０％～３２．６％，不同个体间差异极显（Ｐ〈０．０１）。利用五种安格斯种公牛精液进行体外受精后卵裂率为３４．７％～８５．３％，囊胚发育率为６．２～４０．５％，不同个体间具极显差异（Ｐ〈０．０１）。利用