一种快速有效检测SSR标记的非变性聚丙烯酰胺凝胶的银染方法

聚丙烯酰胺凝胶银染法是一种具有高分辨率检测SSR标记的有效方法,然而传统的银染方法存在操作步骤较多、所需时间较长及试剂种类与用量较多等不足.本研究利用菜心和烟草SSR标记为研究对象,建立一种能快速有效检测其PCR扩增产物的非变性聚丙烯酰胺凝胶的银染方法.该方法包括染色和显影2个主要操作步骤,整个银染流程耗时6~7 min,只需要AgNO_3、NaOH和甲醛3种试剂,所检测SSR标记的DNA条带清晰、易辨.与其他银染法相比,本研究建立的银染法具有易于操作、耗时少、所需试剂种类和用量少及检测效果好的优势.     

温度对聚丙烯酰胺溶胶与凝胶粘度的影响

实验表明，聚丙烯酰胺溶胶与凝胶粘度与温度的关系均符合ＭｃＡｌｌｉｓｔｅｒ方程。溶胶的粘度随温度升高而降低，但凝胶的粘度则随温度升高而升高。此外，溶胶与凝胶的热稳定性也有明显的不同。     

高粱微卫星两种PAGE银染方法的比较

实验比较了高粱SSR-PCR产物聚丙烯酰胺凝胶电泳2种改良银染方法,为初次实验时选择银染方法提供参考。采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,对高粱抗丝黑穗病(恢复系分离群体2381R/矮四)SSR-PCR产物进行检测,分别利用改良过的硝酸银染色方法和改良过的银氨染色方法进行染色,分析2种染色方法的特点。实验结果表明,改良过的硝酸银染色具有操作时间较短、背景颜色浅等优点,适合大量筛选引物时的染色方法;改良过的银氨染色方法具有灵敏度高,显像效果好等优点,适用于基因定位等研究。为今后利用SSR-PCR标记技术研究分析高粱抗丝黑穗病奠定了基础。     

一种从聚丙烯酰胺凝胶上回收DNA片段的简易方法

从聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA片段是分子生物学中的常用技术，本文在对目前几种常用回收方法作深入细致分析的基础上通过设计对比实验找到一个既简单又经济、实用而有效的回收方法。     

聚丙烯酰胺凝胶上SDH的活染

粗心选择了电泳系统及活染条件，得到较清晰的活染结果，从活染胶析 米叶ＳＤ途中 形式，而根部只有一种形式，可能在叶及根部都存在的那种ＳＤＨ形式具有更重要的生理意义。     

聚丙烯酰胺凝胶的研制

合成了带有芳香环的丙烯酰胺单体，使其与双甲叉丙烯酰胺共聚，改善聚丙烯酰胺凝胶的分子骨架结构，探讨了两类致孔剂的致孔机理．     

聚丙烯酰胺水凝胶注射后的并发症及治疗

目的:探讨聚丙烯酰胺水凝胶(PAHG)注射隆乳并发症的处理策略。方法:对注射PAHG注射隆乳258例术后并发症就医者的临床资料及诊治方法进行总结分析。结果:注射隆乳取出术后,有3例切口延迟愈合,其余1期愈合良好,术后一年内随访,乳房未触及明显硬结。同其植入就医者的乳房形态好,乳房外形极手感均感满意。结论:在MR I扫描照片引导,手术直视下清除PAHG及切除变性组织,才是最大限度地取出PAHG的方法。在就医者有强烈要求且术中清除较彻底,局部组织较为完整的前提下可考虑同期行假体植入。否则取出至少3个月后重新评价局部情况,判断是否行假体植入。     

用正交试验法优化聚丙烯酰胺水凝胶的机械性能

报道了关于运用正交试验法对水凝胶机械性能优化的研究,选用丙烯酰胺作为单体,与交联剂N,N'－亚甲基双丙烯酰胺在过硫酸铵作为引发剂的作用下,以水为溶剂,进行封管聚合。然后将所合成的水凝胶在浸水溶胀后进行悬挂断裂强度的测试,并采用正交试验法选取合成水凝胶的最佳条件,通过热机械分析仪（CMA－2）对水凝胶进行载重形变及回复性能的测试,从而证明正交试验法在水凝胶机械性能优化组合中应用的可行性。     

高弹性聚丙烯酰胺水凝胶的制备及拉伸性能研究

为了提高水凝胶的弹性性能,采用微凝胶法制备了高弹性的聚丙烯酰胺(PAAM)水凝胶.先采用沉降聚合法制备了PAAM微凝胶,再以此充当交联剂代替传统的化学交联剂和引发剂,制备了高机械性能的PAAM水凝胶.同时探讨了丙烯酰胺浓度、凝胶成型温度、微凝胶与水的体积比对PAAM水凝胶弹性性能的影响.结果表明:随着丙烯酰胺的浓度的增大,凝胶柱的弹性模量变大;随微凝胶成型温度越高,形成的水凝胶的弹性模量越小;当微凝胶与水的体积比为1︰1时,水凝胶的弹性模量较大,增加或减少微凝胶的量均会使得水凝胶的弹性模量变小.     

聚丙烯酰胺水凝胶的制备及pH敏感性的研究

以N,N-亚甲基双丙烯酰胺为交联剂,过硫酸铵为引发剂,N,N,N',N'-四甲基乙二胺为助剂,采用自由基水溶液聚合方法,合成了一系列配比不同的聚丙烯酰胺(PAAm)水凝胶.通过对不同配比的PAAm水凝胶进行比较,发现水凝胶透明度与交联剂的含量有关.交联剂含量占单体摩尔含量的0.5～5％时,凝胶的透明度随交联剂的增加明显下降;当交联剂含量小于0.5％时,透明度增大明显.同时,对PAAm水凝胶的pH敏感性进行了研究.通过溶胀比实验发现,水凝胶的溶胀比随pH的增加呈现出三个不同的阶段,低平区(pH 0～7),峰值区(pH 10～13),衰减区(pH＞13).最后,本文分析了水凝胶的溶胀机理,认为水凝胶的溶胀过程主要受聚合物网络结构内的静电排斥作用以及离子屏蔽效应所控制.     

PCR-ELISA和PCR-PAGE法检测血液肿瘤细胞株的端粒酶活性

目的：通过端粒酶聚合酶链反应—酶联免疫测定(PCR—ELISA)和聚合酶链反应—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PCR—PAGE)方法检测血液肿瘤细胞株HL—60、K562、Raji的端粒酶活性，探讨其临床应用价值。方法：PCR—ELISA方法是将端粒重复序列PCR变性产物与地高辛标记且对端粒重复片段特异的探针杂交，杂交产物通过ELISA进行测定。PCR—PAGE法是将端粒重复序列PCR产物直接进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，通过硝酸银染色测定端粒酶活性。结果：在端粒酶PCR—ELISA方法检测中，PCR在25-35次循环之间，吸光度A值与循环次数呈线性关系，35-45次循环己达到平台期。PCR—ELISA法检测显示HL—60、K562、Raji细胞均表达高水平的端粒酶活性，吸光度A均值分别为2．362、2．336、2．145。对HL—60、K562、Raji细胞的端粒重复序列扩增的PCR产物直接进行PAGE电泳、银染均呈现3条以上间隔6bP的特征性阶梯状条带。结论：对端粒重复序列PCR产物可同时进行ELISA检测和PAGE—银染，两种方法均可用于恶性肿瘤的临床诊断，ELISA法更为灵敏而简单，且可相对定量。     

凝胶萃取浓缩分离大分子物质

用四种不同交联度的交联聚丙烯酰胺凝胶,研究了它们在去离子水及牛血清白蛋白、牛血红蛋白、精氨酸酶、聚乙二醇等大分子溶液中的溶胀速率和平衡溶胀比的变化规律。发现其平衡溶胀比越大,溶胀速率也越快;凝胶在大分子溶液中的平衡溶胀比总是小于它在水中的值,且随大分子溶液浓度增大,平衡溶胀比的减小程度增大;温度升高,溶胀速率和平衡溶胀比均增大。凝胶交联度越大,对大分子物质的分离效率越高,浓缩精氨酸酶时的最大值为53.4%。凝胶的再生可用加少量盐或丙酮或调节pH值等方法。     

碱金属阳离子对硅酸盐溶液激发的碱矿渣水泥浆体粘度的影响

分别研究了不同硅酸根与碱金属阳离子比(Si/M比)的钠、钠钾复合硅酸盐溶液和由硅酸盐溶液激发的碱矿渣水泥浆体的黏度和凝结时间。并结合硅酸盐溶液的傅里叶红外光谱试验对溶液中硅酸根离子的聚合度进行研究。结果表明：硅酸盐溶液的Si/M比越低,硅酸根的聚合度越小。在硅酸钠溶液体系中掺入一定量的K_⁺离子可以降低体系中硅酸根离子的聚合度,显著降低溶液和浆体的黏度,使碱矿渣水泥获得更好的工作性能。同时,在较低Si/M比(Si/M≤1.5)情况下,K_⁺离子还能够延长碱矿渣水泥的初凝时间。     

Separation of DNA fragments by cross-linked polymer coating capillary electrophoresis with non-gel sieving matrix

A new type of flush/fill equipment driven by high-pressure (1MPa) nitrogen gas for filling the capillary is demonstrated. High-viscous and microlitre grade volume solution can be filled into a capillary by means of this equipment. The capillary coated by cross-linked polyacrylamide and filled with “interpenetrating polymer networks” non-gels sieving matrix (0.8% hydroxyethyl cellulose, 10% sucrose in 1×TBE buffer) was applied for separating DNA fragments. All 11 fragments of Ø174/Hae III DNA were successfully separated. The man-made circle plasmid from E. coli were separated and detected.     

克隆西农莎能奶山羊的微卫星DNA分析

目的利用微卫星DNA技术对通过体细胞克隆技术获得的两只西农莎能奶山羊进行鉴定。方法提取两只克隆西农莎能奶山羊、两只受体西农莎能奶山羊母羊、西农莎能奶山羊供体细胞和两只对照组西农莎能奶山羊母羊的基因组DNA,通过5对具有显著多态性差异的引物扩增微卫星DNA序列,并对其进行微卫星DNA分析。结果两只克隆西农莎能奶山羊和供体细胞的基因型完全一致,受体母羊和对照组母羊的微卫星DNA多态性则与前两者均不相同。结论两只克隆西农莎能奶山羊基因组DNA来源于供体细胞。     

Comparative Studies on Preparation of Large Plant DNA Fragments by Pulse Field Gel Electrophoresis

The preparation of large plant DNA fragments is extremely important to the construction of large insert DNA libraries (YAC, BAC, PAC and TAC). Although several techniques have been developed in each step of large plant DNA fragments preparation, the whole processing remains complicated and difficult. Based on authors‘ research experience and the recent worldwide development in this field, the following aspects are discussed in this paper: techniques of plant high molecular weight (HMW) DNA purification by pre-electrophoresis, the optimal conditions for the partial digestion of the HMW DNA by HindⅢ, the isolation effects of of large plant DNA fragments (100-400 kb) with different parameters of pulse field gel electrophoresis (PFGE), and the recovery of large DNA fragments. Through comparative studies, the advantages and disadvantages of each technique are discussed and some recommendations are proposed for preparing high quality large plant DNA fragments. The suggested techniques have been used in preparing the large DNA fragments of maize, rice, moss, laver, sea tangle and peach, and similar resuits are obtained among all the materials. This paper only reports the results using maize as material.     

Analysis of Male Sterility-Related Proteins of Young Panicle in Rice （Oryza sativa L. ） by Two-Dimensional Electrophoresis

For searching out male sterility-related proteins (polypeptides) in rice (Oryza sativa L.), we examined the difference of panicle protein (polypeptides) between hybrid rice (Wujin2A/R168, Wujin5A/R988) and their parents (male-sterile line Wujin2A, Wujin5A, and restorer line R168, R988) at the formation stage of pollen mother cell by two-dimensional electrophoresis (2-DE). The results revealed that the 2-DE polypeptide maps were similar among these experimental materials. A small group of polypeptides were disappeared in 2-DE polypeptide maps of male-sterile line (Wujin2A, Wujin5A) by comparing to restorer line (R168, R988) and the first filial (F₁) generation (Wujin2A/R168, Wujin5A/R988). The isoelectric points of these polypeptides were pI 5.8–6.5 molecular, weight 42.7×10³−66.2×10³. Foundation item: Supported by the National Natural Science Foundation of China (30340079) and the Science and Technology Key Research Foundation of the Education Ministry of China (03109) Biography: HU Yao-jun (1960-), male Ph. D candidate, research direction: molecular cytogenetics.     

Analysis of Male Sterility-Related Proteins of Young Panicle in Rice (Oryza sativa L.) by Two-Dimensional Electrophoresis

0Introduction Malesterilityisacomplicatedphenomenoninhigherplants,whichestablishesthebiologicalbasisofhetero sisutilizationincropsbreeding,especiallyinrice(Oryzasati vaL.).Themolecularandphysiologicalresearchinplantmalesterility,especiallythediscoveryofth…     

密点麻蜥冬眠期和繁殖期几种器官组织中乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的比较研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,对冬眠期和繁殖期密点麻蜥(Tremies multidcelate)6种器官组织中乳酸脱氢酶(LDH)同工酶酶带和酶活性进行了测定和分析研究.结果表明:不同组织的酶带明显不同,且有多画带现象;6种器官组织中LDH同工酶的相对活性表现出明显的季节差异.     

近交系大鼠DNA指纹图和微卫星DNA多态性的分析

实验动物常规生化标记监测方法主要是通过蛋白质的变化来推测相应的基因的变化 ,而在某种程度上存在着一定的局限性。而DNA指纹图和微卫星DNA是对遗传物质DNA的直接监测 ,比生化标记更准确、更可靠 ,更直观。实验中选取国内常用的SHR、SHRSP、WKY、F344、RCS、LEW等 6个近交系大鼠群体 ,采用DNA指纹图和微卫星DNA技术对 6个近交系大鼠群体进行DNA多态性分析 ,以期筛选出具有精确可靠、快速简便、灵敏性高的遗传监测方法。结果 :(1)DNA指纹图①在 4 0kb— 2 3 1kb之间各组的平均图带数在 14— 19条 ,同一群体不同个体间的相…