DNA变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的实验教学改进

DNA变性聚丙烯酰胺凝胶电泳在现代生物技术中的地位十分重要,但在实验中,聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作难度比较大,影响因素比较多,耗时比较长。为了使DNA变性聚丙烯酰胺凝胶电泳适合于实验教学,对聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳技术相关操作流程进行了研究和探索,对实验进行了改进和优化。改进和优化后的实验操作简易、详细,试剂配方更合理,成功率得到提高,学生能在4学时内完成,为进行实验教学提供了基本条件。     

河南汉族人群 4个Y-STR基因座及单倍型遗传多态性分析

采用 PCR扩增和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及DNA序列分析河南汉族102名无血缘关系、健康男性个体的4个Y-STR基因座基因及单倍型频率分布.结果显示：4个基因座共发现了24个等位基因,频率分布在0.0098～0.7745. 102个个体共检测到55个单倍型 ,单倍型多样性为0.8939.     

不同分子质量软骨多糖对K562细胞的增殖抑制作用

研究不同分子质量的软骨多糖对慢性髓系红白血病K562细胞的增殖抑制作用。用不同浓度的酒精对软骨提取物进行分级沉淀，得到不同分子质量的软骨多糖，并用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测所得软骨多糖的纯度及分子质量；采用噻唑蓝（MTF）比色法测定细胞的增殖活性；用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA电泳特征。结果显示，短链软骨多糖（分子质量约为30ku）对K562细胞具有明显的增殖抑制作用，这种抑制作用呈现明显的时间依赖性，且琼脂糖凝胶电泳出现明显的DNA梯状条带。     

条斑紫菜叶状体嵌合性的分子生物学证据

利用微卫星标记的共显性特点,选用5对微卫星引物对65个条斑紫菜叶状体个体的嵌合性,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行了分析.结果显示:聚丙烯酰胺凝胶电泳中既有两条带又有一条带,也即条斑紫菜叶状体个体中既有嵌合体又有纯合体,其中58.5%为纯合体,41.5%为嵌合体.这为条斑紫菜叶状体的嵌合性提供了分子生物学方面的证据.     

甘蓝SSR-PCR技术体系的优化

以甘蓝自交系15R(南宝)和14S(北黑大平头)为材料,对SSR-PCR扩增程序进行了优化,分别利用不同浓度的聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳对SSR-PCR扩增产物进行了检测.结果表明:适宜的扩增程序为94℃变性45 sec,60℃退火,72℃延伸1 min,每个循环较低0.5℃,进行20个循环,94℃变性45 sec,55℃退火45sec,72℃延伸1 min,进行15个循环,72℃延伸10 min,16℃保存,10%的聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖凝胶电泳更适合对甘蓝SSR-PCR扩增产物的检测.     

PCR-DGGE在真菌群落研究中的应用解析

论述了变性梯度凝胶电泳(DGGE)在真菌群落结构研究中的技术应用的主要步骤:从样品中直接提取真菌DNA,选取5′端含GC夹的特异性引物对18S rDNA或IST序列等的部分片段进行扩增,得到合适的目的DNA片段,并在变性梯度的聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳,使不同来源的真菌DNA片段有效分离,再进行各种分类分析。     

玉米胚胎发育初期蛋白质凝胶电泳技术

蛋白质凝胶电泳目前常用的方法有两种,一是聚丙烯酰胺凝胶电泳,二是十二烷基磺酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳。使用的电泳槽有圆盘和平板电泳二类。我们使用的是垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳。此种生化技术,在蛋白质的分析鉴定中,灵敏度高,分辨清晰,应用十分普遍。由于在实践操作中,要求严谨,因此在操作过程中,常因各种因素干扰,以致影响效果,事先如何加以预防,目前虽有些报道,但未见有关胚胎电泳     

高粱微卫星两种PAGE银染方法的比较

实验比较了高粱SSR-PCR产物聚丙烯酰胺凝胶电泳2种改良银染方法,为初次实验时选择银染方法提供参考。采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,对高粱抗丝黑穗病(恢复系分离群体2381R/矮四)SSR-PCR产物进行检测,分别利用改良过的硝酸银染色方法和改良过的银氨染色方法进行染色,分析2种染色方法的特点。实验结果表明,改良过的硝酸银染色具有操作时间较短、背景颜色浅等优点,适合大量筛选引物时的染色方法;改良过的银氨染色方法具有灵敏度高,显像效果好等优点,适用于基因定位等研究。为今后利用SSR-PCR标记技术研究分析高粱抗丝黑穗病奠定了基础。     

一种快速、经济、有效纯化人工合成寡核苷酸片段的方法

采用DEAE-52纤维紊小柱，纯化了7个人工合成的寡核苷酸引物．纯化效果栗用岛津(uy-265)分光光度计扫描，8mol／L尿素-12%聚丙烯酰胺凝胶电泳及自提的模板DNA经PCR检测．该法分传统的HPLC法及PAGE法相比，具有快速、经济、有效的优越性。     

东亚飞蝗不同龄期解毒酶和靶标酶活性研究

对东亚飞蝗(Locusta migratoria manilensis(Meyen))各龄期酯酶、乙酰胆碱酯酶、谷胱甘肤 S-转移酶活性进行了比较研究,同时对酯酶进行了非变性聚丙烯酰胺凝胶检测.酯酶活性测定结果表明,不同龄期酯酶的比活力不同,五龄若虫最高,一龄若虫最低.酯酶非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结果发现,各龄期酯酶同工酶酶谱主带比较一致,在谱带上存在有细微的差异;乙酰胆碱酯酶的比活力二龄若虫最高,四龄若虫最低;一龄若虫谷胱甘肽S-转移酶的比活力最高,三龄若虫最低.据此推测,东亚飞蝗不同龄期解毒酶和靶标酶的活性差异可能是由于各龄期生长发育代谢机能的不同所致.     

聚丙烯酰胺凝胶电泳检测水稻SSR标记

以水稻为试验材料,提取水稻基因组DNA,选择多态性SSR标记,并将标记产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,最后硝酸银染色,试图建立了一种行之有效、简便、快捷的应用于水稻SSR标记的PAGE银染检测方法。     

鄂尔多斯盆地劳山油田W110井区长6储层敏感性分析

针对劳山油田W110井区长6储层低孔、特低渗的特征,通过系统的岩心流动实验,评价了储层敏感程度。研究结果表明:W110井区长6储层整体存在中等盐敏、中等偏弱酸敏和弱水敏、强碱敏和无速敏的特征。储层敏感性相对较弱,对研究区开采影响较大的为酸敏和碱敏,中等偏弱的酸敏使得研究区可适当进行酸化改造,强碱敏导致在注入液时需注意注入液pH值对储层的伤害。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳检测大豆SRAP标记

以大豆为试验材料,提取了大豆的基因组DNA,对大豆进行SRAP-PCR扩增,并对产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,最后硝酸银染色。建立了一种行之有效、简便快捷的应用于大豆SRAP标记的PAGE银染检测方法。     

褐牙鲆耐热性状相关的微卫星分子标记筛选

采用微卫星分子标记技术分析褐牙鲆耐热相关特性,为耐高温褐牙鲆的分子辅助育种提供合适的分子标记.褐牙鲆经过热处理,将其区分为耐热组与不耐热组,用于实验分析.采用酚-氯仿抽提法抽提褐牙鲆肌肉组织的DNA,进行微卫星引物PCR(SSR-PCR)扩增,所用引物为已知的20个褐牙鲆微卫星位点的侧翼保守序列.对PCR扩增出的差异条带进行个体统计,最后进行微卫星位点与耐热性状的相关性分析.结果表明,有6个微卫星位点的某等位基因片段与褐牙鲆耐热性状存在一定的正相关性,其中位点Po13(AB046746)跟耐热性有极显著的正相关性,相关系数为0.466;有3个微卫星位点的某等位基因片段与耐热性存在负相关性,其中位点Po42(AB046754)与其有极显著的负相关性,相关系数为-0.408.微卫星位点Po13与Po42所扩增出的等位基因片段可作为分子标记指导耐热褐牙鲆的辅助育种.     

金属阳离子选择电极测定弱酸强碱盐水解常数方法研究

对弱酸强碱盐水解平衡体系进行讨论 ,导出了弱酸强碱盐水解平衡常数、金属离子浓度和溶液pH值之间的相互关系 ,提出了一种利用金属阳离子选择性电极测定弱酸强碱盐水解平衡常数的方法 ,并用Ca2 + 选择电极对Na2 CO3和Na2 C2 O4 的水解平衡常数进行测定 ,测定值和文献值相一致 .     

强碱和弱碱在形成移动中和反应界面中的差异

弱碱及强碱均可与强酸在一定的条件下形成移动中和化学反应界面(Moving Neutrilization Chemical ReactionBoundary,MCRB) .从理论上说, 其界面移动速度因为它们的电离度不同而存在差异. 实验表明,这种差异是存在的, 且实验的结果与移动化学反应界面速度的理论计算值相吻合.     

猪肝铜锌超氧化物歧化酶的分离纯化与理化性质研究

利用硫酸铵盐析分级分离、乙醇．氯仿沉淀除杂、丙酮再沉淀分级得到含铜锌超氧化物歧化酶（CuZnSOD）的粗酶液,通过DEAE-52离子交换层析和G-75凝胶层析实现了CuZnSOD的分离纯化,得到电泳纯产品CuZnSODI对猪肝CuZnSOD的理化性质、酶学特征和光谱性质进行了研究．     

韭菜凝集素的纯化及部分性质的研究

用葡聚糖凝胶柱层析法从韭菜的叶片组织分离出一种对新鲜兔红细胞有强烈凝集作用的凝集素，ＰＡＧＥ鉴定和高碘酸－Ｓｃｈｉｆｆ试剂反应均显单一条带。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明该凝集素含有３个亚基，其相对分子质量分别约为３１０００、２４０００和２１０００。韭菜凝集素具有一定的热稳定性，在酸、碱处理中该凝集素对碱处理较酸处理稳定，氨基酸组成分析表明韭菜凝集素含有１４种氨基酸，其中半胱氨酸含量较高。     

线粒体基因种属鉴定复合扩增体系

针对cyt b基因和ND6基因序列,设计两对引物,以14种常见动物（包括人）生物性检材为对象进行PCR扩增,产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、硝酸银染色进行分析。结果证明,两条电泳条带者为人样本,分别是cyt b基因片段（358 bp）和ND6基因片段（181 bp）;一条电泳条带者为动物来源,是358 bp cyt b基因片段。在37.5μL PCR反应体系中最小检出模板量为0.25 pg基因组DNA。检材在4℃、室温和37℃温度下,经过4个月后均可获得正确的种属区分。高度潮湿环境中放置50 d的检材、形成于水泥地面、墙面、泥土等基质上的血痕,本方法可得到正确区分。由此建立的种属鉴定的线粒体基因复合扩增体系,其检测片段短、灵敏度高、操作简易,适合法医学上微量、降解、陈旧检材的种属判定。     

胆红素氧化酶凝胶电泳活性染色法

胆红素氧化酶能够特异地将胆红素氧化成胆绿素,利用酶与底物的这种特殊关系可以在凝胶上进行底物染色来直接显示酶的活性区带,这种方法称为胆红素氧化酶的活性染色法.这种活性染色可以采用胆红素直接溶入分离胶后电泳(胆红素-PAGE),也可以在电泳后置于胆红素溶液中染色(PACE-胆红素).其中PAGE-胆红素方法在20 min后即在凝胶上出现深绿色的胆红素氧化酶条带,随着时间延长,凝胶上的绿色酶条带逐渐扩散,最终形成透明条带;而运用胆红素-PAGE的方法则在12 h后才能在凝胶上看见透明的胆红素氧化酶所在的条带.相比之下,前者更为简便、快速、灵敏.