快速鉴别NO3^—,NO2^—离子的方法

本文根据ＮＯ３＾－和ＮＯ２＾－离子的性质差异，归结出了快速鉴别它们的多种简便可行的方法。     

离子色谱测定高Cl-浓度样品中NO2-、NO3-的条件优化

本文研究了用EDTA溶液作淋洗液，用非抑制型离子色谱法测定高Cl^-浓度样品中NO2^-、NO3^-的流动相条件。用均匀设计法设计了实验方案，通过多元回归得出流动相浓度（X1）、流量（X2）、温度（X3）和pH值（X4）等因素对各离子的保留时间tCl^-、tNO2^-、tNO3^-影响的回归方程分别为。用网络法优化了实验条件，筛选出了优化条件，可较好地解决Cl^-峰对NO2^-峰的重叠、干扰的问题。     

水稻高亲和力磷酸盐转运蛋白基因的克隆、表达及检测

以水稻（粳稻）cDNA为模板,设计一对特异性引物,获得编码水稻高亲和力磷酸盐转运蛋白基因的全序列,ORF区编码含535个氨基酸的蛋白,具有磷酸盐转运蛋白保守的蛋白激酶C作用位点、N端糖基化位点与酪蛋白激酶Ⅱ作用位点Southern blot分析显示此基因在水稻基因组中具有多个拷贝,与水稻基因组序列分析结果一致Westernblot预测目的基因表达的蛋白大小约为57．7ku．该基因的真核表达研究正在进行中．     

旱麦草LEA3基因的克隆与序列分析

为了克隆旱麦草LEA3基因,根据小麦的LEA3基因(GenBank登录号为AY148492)cDNA序列设计引物,以干旱胁迫处理的旱麦草幼苗的cDNA为模板,采用RT-PCR克隆了旱麦草LEA3基因,命名为EtLEA3(GenBank登录号为KJ123698),并对基因及其蛋白进行了生物信息学分析。结果表明:EtLEA3基因的ORF全长为600 bp,编码199个氨基酸,推测的蛋白相对分子量为20.38 ku,理论等电点为9.08。其氨基酸序列与小麦、大麦和山羊草LEA3蛋白的相似性分别为83%、82%和81%。信息学分析表明EtLEA3蛋白具有较高的亲水性,没有跨膜结构。蛋白质二级结构和三级结构预测表明α-螺旋结构占主导,与目前已知的多种植物的LEA3蛋白具有相似的结构功能域。该蛋白含有5个完整的11个氨基酸组成的串联重复单元。这些特征均与第3组LEA蛋白的特征相符合。该研究结果为深入了解该基因的功能和旱麦草抗旱的分子机理提供了基础数据。     

15个普通小麦WRKY基因的克隆与表达分析

WRKY转录因子广泛参与了植物对生物与非生物胁迫应答反应、激素响应以及生长发育等一系列生理活动．但是,对小麦WRKY家族基因目前还缺少系统的克隆、表达和功能研究．文中采用EST的电子拼接方法,克隆了15个具有完整开放阅读框的小麦WRKY基因,分属于WRKY家族的3个大类．表达分析发现,除nWRKYIO基因在分蘖节中表达最强外,其他基因的表达水平都是在叶中最高;4个基因随着叶片的成熟和衰老表达量显著增强;8个基因对低温、高温、NaCl或PEG等逆境因子具有响应;另外,WRKY基因在小麦杂交种与亲本之间存在明显的表达差异,并且有些基因对PEG逆境因子的响应在杂种比在亲本中快．表明,小麦WRKY基因参与了叶片衰老和逆境胁迫的响应过程,所检测到WRKY基因在杂种和亲本中的表达差异可能会通过增强杂交种的抗逆性而促进小麦杂种优势的产生．     

高亲和力钠离子依赖二羧酸转运蛋白基因的克隆、表达及亚细胞定位研究

为了研究高亲和力钠离子依赖二羧酸转运蛋白(high affinity sodium-dependent dicarboxylate transporter,SDCT2,NaDC3)的功能,从小鼠肾组织中克隆出了其cDNA基因,并对其结构特征、基因表达谱及细胞内定位情况进行了分析。结果显示NaDC3蛋白由600个氨基酸组成,同源性分析表明其氨基酸序列与大鼠及人NaDC3分别有97％和87％相同。二级结构分析显示,该蛋白有13个跨膜α-螺旋区。Northern杂交显示该基因可在肾、肝、脑、胎盘等多种组织中表达。激光共聚焦显微镜观察显示该蛋白定位于肾小管上皮细胞膜上。     

山羊ZP3基因的cDNA克隆、序列分析及组织表达研究

对高繁金堂黑山羊和低繁藏山羊ZP3基因cDNA进行克隆、序列分析,并采用Real-time PCR技术对其在发情前期母羊卵巢组织的表达进行研究.结果表明:山羊ZP3基因编码区全长为1269bp,共编码422个氨基酸,两品种间有2处碱基差异,但未导致氨基酸的差异.山羊的ZP3基因在卵巢表达量高,与其他组织差异极显著(P＜0.01),但两个品种间差异不显著(P＞0.05).说明ZP3基因主要在卵巢中表达,但可能不是影响山羊多羔性状的主基因.     

小鼠IL—6基因的克隆及表达载体的构建

采用常规的分子生物学技术,从小鼠骨髓细胞中克隆了含信号肽序列的IL－6,并构建了表达载体,序列分析表明所克隆的IL－6序列与献已报道的一致,构建的表达载体经鉴定正确。     

耐热碱性磷酸酯酶基因的亚克隆及其在大肠杆菌中的表达

根据耐热碱磷酸酯酶基因的酶切图谱和ＤＮＡ序列,分别在基因的起始密友子和终止密码子设计２个突变引物。引物的５‘端分别带有ＮｄｅⅠ和ＢａｍＨⅠ酶切全点。通过ＰＣＲ从质粒ｐＴＡＰ１１８Ｂ中扩增获得了ＦＤ－ＴＡＰ基因的全序列。经过酶切将基因亚克隆于高达载体ｐＪＬＡ５０３。     

神经营养素-3的克隆与真核表达

目的　构建人神经营养素 - 3(NT 3)的真核表达质粒 .方法　由于NT 3基因中无内含子 ,因此直接运用PCR技术从人基因组DNA中分离出人NT 3完整基因 ,与 pcDNA3.1(- )载体重组并测序 ,获得pcDNA NT3.用脂质体介导法将重组质粒转染人胚肾 2 93A细胞株 ,经G4 18筛选后 ,用RT PCR和免疫荧光法在转录和翻译两个水平上检测表达产物 .结果　测序证实所获得的是正确的重组质粒 .它的转录和翻译产物均可在细胞中检测到 .结论　成功地进行了NT 3的克隆与真核表达 ,NT 3基因修饰后的胚胎细胞有可能对神经轴突的生长起指导作用 .该实验结果为深入研究NT 3的生物学作用创造了条件 ,为基因修饰细胞移植治疗神经疾病的实验研究奠定了基础 .     

野生－粒小麦着丝粒RCS1相关序列的克隆鉴定

用水稻着丝粒重复序列RCS1为探针，与3072个克隆进行菌落杂交，得到了32个阳性克隆，用RCS1与拟斯卑尔脱山羊草着丝粒重复序列Tcs250为探针进一步筛选，在32个RCS1相关的阳性克隆中任选10个克隆进行点杂交，分别有6个和5个阳性克隆．为了克隆RCS1相关片段，依据RCS1的序列设计了三对引物，将引物3从上述阳性克隆中扩增的一个543bp的片段克隆测序，发现与水稻RCS1部分片段达到约83％的同源，与大麦的反转座子(Ty3／gypsy)部分序列同源性达到了92％，与节节麦中着丝粒的整合酶基因部分序列同源性达到了96％，命名为TBRCS1．TBRCS1可能是野生一粒小麦着丝粒区的组成部分．     

小麦液泡质子焦磷酸酶基因EST的克隆与分析

通过RT-PCR的方法在矮苏3小麦的总cDNA中克隆到一个与大麦液泡质子焦磷酸酶基因(VP)高度同源的EST。以该序列为基础,利用生物信息学的方法构建了一个编码小麦VP蛋白的全长EST重叠群,长2764bp,其包含一个长2355bp的完整开放读码框(ORF),编码785个氨基酸多肽。通过Southern杂交,将该VP基因定位在小麦染色体的第7同源群上。     

紫外分光光度法测定地下水中NO3^——N的含量

饮用水中NO3^-－N的含量对人体有重要影响，因此测定地下水中NO3^-－N的含量具有重要意义。本用UA－1600紫外可见分光光度计，通过标准曲线法，在204nm波长处测定地下水中硝酸盐氮的含量。     

小麦泛素融合降解蛋白基因全长cDNA的克隆及分析

实验利用RT-PCR技术，在小麦矮苏3品种中克隆了1个编码泛素融合降解蛋白基因的cDNA，并且含有完整的5′端，将该基因命名为Tufd1，利用RACE技术克隆了该cDNA的3′端。根据这2段cDNA克隆，设计特异引物，利用RT-PCR扩增出了Tufd1完整的开放读码框(ORF)，其编码区长948bp，编码315个氨基酸的多肽，在NCBI中运行BLAST。分析表明，Tufd1蛋白同拟南芥的UFD1蛋白有74％的同源性，在所编码的多肽链的N-端有UFD1保守结构域，可作为催化蛋白降解的信号。     

柑橘溃疡病相关基因CitEX3的克隆与表达分析

利用RT-PCR和PCR扩增技术,获得纽荷尔脐橙富亮氨酸重复序列受体样蛋白激酶EXS(EXTRA SPOROGENOUS CELLS)基因CDs全长,命名为Cit EX3.生物信息学分析表明,该基因CDs全长2 667bp,编码888个氨基酸,最大开放阅读框2 667bp,属于富亮氨酸重复序列蛋白激酶家族(LRR-RLKs).Cit EX3基因所编码蛋白EXS3分为胞外域、跨膜域和胞内激酶结构域,胞外域中存在保守的LRR重复序列,胞内激酶结构域中存在一个保守的丝/苏氨酸催化域重复序列.Southern Blot分析表明,在纽荷尔、椪柑、四季桔和金柑中该基因都以单拷贝形式存在.实时荧光定量PCR分析表明,接种溃疡病病菌后,该基因受溃疡病诱导上调表达,推测该基因可能与柑橘溃疡病抗性相关.     

六安地区高粱花叶病毒P3基因的克隆和序列测定

从六安产甘蔗病叶中提取总RNA,逆转录获得甘蔗花叶病毒(Sorghun mosaic virus,SrMV)基因组cDNA。设计P3基因特异引物,通过PCR扩增P3基因,并将P3基因cDNA克隆、测序。     

广西产眼镜王蛇毒α-神经毒素基因的分子克隆及序列分析

为获得眼镜王蛇（Ophiophagus hannah，简称Oh）蛇毒α－神经毒素（α-NT）的基因序列，依据眼镜蛇科不同毒蛇种类来源的α－NT基因有较高的同源性，设计1对上下游引物，为克服引物带来模糊扩增，在蛋白编码部分再设计1对上下游特异引物，用Nacleospin RNA Kit法从3条活眼镜王蛇毒腺中提取mRNA，以3′端引物合成的cDNA作为模板进行PCR扩增反应，测定产物的核苷酸序列，得到全长474bp的眼镜王蛇cDNA基因核苷酸序列。该核苷酸序列的信号肽与眼镜蛇树属Pseudonnaja textilis(Pt)、海蛇Laticauda semifasciata(Ls)100%同源，与眼镜蛇南洋亚种Naja sputatrix (Ns)、银环蛇（Bungarus multicinctus)(Bm)96.8%同源；蛋白密码部分有83．3％与Ns、79．2％与Pt、76．4％与Ls、74．1％与Bm同源。信号肽后紧接着的72个氨基酸有90．3％与已发现的眼镜王蛇毒长链α-NT Toxin a同源，大约有73．6％与Toxin b、69．7％与Oh-4、66．7％与Oh-5、56．9％与Oh-6A和6B同源，并与α－银环蛇毒素54．2％同源。说明新发现的眼镜王蛇cDNA是一条长链α-NT基因。     

南瓜甘油—3—磷酸转酰酶基因cDNA的克隆及限制性图谱分析

依据国外有关文献,采用ＲＴ－ＰＣＲ技术成功地从南瓜子叶中分离了甘油－３－磷酸酰基转移酶（ＧＰＡＴ）基因的ｃＤＮＡ片段并克隆到了ｐＧＥＭ－Ｔ载体系统的多克隆位点上．限制性内切酶分析表明确属该基因．ＧＰＡＴ对植物的抗冷性有着重要的作用,该基因的克隆为进一步研究该酶和该基因及其与植物抗冷性关系迈出了第一步     

野蚕DH—PBAN基因启动子的克隆及序列分析

为研究昆虫滞育激素－性信息素合成激活肽基因在进化过程中的变化以及基因表达调控的异同，用ＰＣＲ方法克隆了野蚕的ＤＨ－ＰＢＡＮ基因的启动子并测序，