增加被孢霉菌丝体中γ-亚麻酸含量的研究

为增加被孢霉产生γ-亚麻酸的含量,给出了最佳培养基配方和生产条件,实验证明,新的培养基配方及生产条件使被孢霉脂肪油中γ-亚麻酸的质量分数由原工艺的4.053 1%增加到7.269 7%.     

甘油和乙醇对γ-亚麻酸生产菌被孢霉M11发酵的影响

对γ－亚麻酸生产菌 Ｍ１１进行了摇瓶实验。结果表明,在培养基中糖浓度 １００～１２０ｇ／Ｌ,乙醇浓度４ｇ／Ｌ,甘油浓度２ｇ／Ｌ条件下,细胞和油脂产量较高。     

脲包法富集被孢霉菌丝油γ-亚麻酸工艺条件的研究

探讨了采用脲包法富集被孢霉菌丝油脂中γ-亚麻酸过程中原料与尿素和溶剂配比、结晶温度、包合时间及包合次数等主要操作条件对γ-亚麻酸富集效果的影响．实验研究结果表明：通过二次包合处理，菌丝油中γ-亚麻酸含量由6．12％提高到73．66％，富集了12倍．     

γ-亚麻酸产生菌的低能离子束诱变选育

为了得到γ-亚麻酸(GLA)高产菌株,以深黄被孢霉As3.3410为出发菌株,利用氮离子(N+)注入诱变,并采用马来酰肼抗性筛选和红四氮唑(TTC)法相结合对突变株进行筛选。试验结果表明:当能量为10 ke V时,最佳氮离子诱变剂量为1.56×1015cm-2;当马来酰肼的添加量为40 mg/L时,出发菌株的抑制率为100%;TTC法酶活测定的最佳条件为:温度35℃、p H为8.4、TTC浓度为8 g/L、反应时间为1 h,以此作为摇瓶初筛的条件。经过反复诱变筛选获得一株遗传稳定的高产突变株F312,其γ-亚麻酸产量为1 236 mg/L,比出发菌株(480 mg/L)提高了157.5%。     

深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因敲除及鉴定

以产油丝状真菌深黄被孢霉M6-22(Mortierella isabellina 6-22)为出发菌株,利用亚硝基胍诱变技术筛选到一株对潮霉素药物敏感的菌株Mortierella isabellina 6-22-4,同时构建了含有潮霉素抗性基因表达单元和深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因5'与3'端部分同源序列的重组质粒PD4MI6,用于对深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基鼠的敲除.通过PEG/CaCl2介导的原生质体转化法,将质粒PD4MI6转化入深黄被孢霉M6-22-4菌株.转化子经潮毒素抗性选择平板筛选、分子检测获得了一个△6-脂肪酸脱氢酶基因缺失的突变株Mut6.气相色谱分析结果显示,该突变株γ-亚麻酸特征峰消失,相应地亚油酸产量显著增加.培养结果表明该突变株的菌落形态、颜色及生长状况与出发菌株M6-22或M6-22-4相比均有显著改变.