大肠杆菌甜菜碱醛脱氢酶基因的测序及对烟草的转化

对利用聚合酶链式反应所克隆的大肠杆菌ｂｅｔＢ基因进行了序列测定,结果证实获得了该基因的克隆ｐＸＹ０１,ｐＸＹ０５以及亚克隆ｐＸＹ１１。将该基因置于ＣａＭＶ３５Ｓ启动子调控下,导入根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４中,叶盘法转化烟草,在含卡那霉素的选择培养基上筛选抗性芽,并进一步诱导小植株的再生。利用ＰＣＲ技术检测基因整合到烟草基因组中。     

外源基因（bar）在转基因燕麦（AvenasativaL.）后代中的遗传与表达

通过微弹轰击获得的含有ｂａｒ基因的转基因燕麦植株自交产生转基因后代。利用ＰＣＲ方法检测ｂａｒ基因在后代中的传递情况。     

转基因马铃薯植株中外源基因PCR扩增和拷贝数测定

本文报道一种简便、快速、可靠，同时又适合大量转基因植株中外源基因测定的ＰＣＲ检测技术，同时改进了转基因植物中总ＤＮＡ提取方法，并且用窄缝转移杂交测定了转基因植株中外源基因拷贝数。     

外源基因在转基因油菜后代中的表达及遗传学分析

以转基因油菜后代（Ｒ１和Ｒ２代）株系为材料，系统地研究了苏云金杆菌杀虫蛋白基因ＣｒｙⅠＡ和选择标记基因ｎｐｔⅡ导入油菜后的遗传规律，表达强度和抗虫效应。结果表明：Ｒ１代卡那霉素抗性为３：１分离方式，在Ｒ２代卡那霉素抗性植株中，有三分之一为ｎｐｔⅡ基因纯合型（Ｔ：Ｔ）另三分二为复合型（Ｔ：Ｏ），其遗传方式符合孟德尔单因子显性遗传；转化植株可耐受１５０ｍｇ／Ｌ那卡霉素的选择压力，约一半的转化植株具有杀     

金鱼草Del基因影响烟草花色素苷的研究

采用根癌农杆菌介导法,获得转Ｄｅｌ基因的转基因烟草植株．对９株可能的转基因植株（Ｔ０代）ＤＮＡ进行ＮＰＴⅡ基因的ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析,其中８株显示ＮＰＴⅡ基因阳性．对其中５株开花的阳性植株进行ＤｅｌＤＮＡ的ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析,全部显示ＤｅｌＤＮＡ阳性．Ｋｍ抗性Ｔ１代转基因植株ＤＮＡ进行ＤｅｌＤＮＡ的ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析,结果显示全部含有ＤｅｌＤＮＡ．在５３０ｎｍ处测量Ｔ０代转基因植株中花色素苷含量和分布情况,３株转基因烟草的花萼、花冠和雄蕊部位花色素苷含量增加,而在雌蕊和叶中减少．在一定程度上验证了Ｄｅｌ基因的生物学功能,证实并补充了Ｇｏｏｄｒｉｃｈ等关于色素沉积模式的论述．     

基因枪法获得可育抗除草剂转基因小麦

用基因枪法对两个春小麦品种进行了遗传转化，获得１９株独立转化的，抗除草剂Ｂａｓｔａ的小麦植株，其中１５株自交可育，ＰＣＲ和ＤＮＡ印迹检测证实了该基因在转化植株中的表达，转基因及其表达已遗传到子三代，在已检测的７个转基因后代中，有４个植株其抗除草剂性状以单位点，显性性状的孟德尔方式遗传。     

PCR检测伪狂犬病病毒的研究

用ＰＣＲ的方法，扩增了伪狂犬病病毒ｇｐ５０基因的一段较为保守区。检测了不同ＰＲＶ毒株感染的ＢＨＫ细胞以及接种的家兔，并对ＰＣＲ检测的灵敏性作了初步研究。结果表明，ＰＣＲ法扩增ｇｐ５０基因具有较高特异怀和灵敏性，是检测ＰＲＶ的有效方法。     

应用PCR技术检测结核菌的临床研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对２４４例呼吸疾病患者临床标本进行结核菌ＤＮＡ检测，并同时与涂片抗酸染色结果进行比较。结果显示：１１２例结核标本涂片和ＰＣＲ检测阳性率分别为１６．１％和５２．７％，两者差别有显著性（Ｐ＜０．０１）。９４例涂阴结核标本ＰＣＲ阳性达４５．７％。结果表明应用ＰＣＲ技术检测结核杆菌ＤＮＡ具有快速敏感、特异性较高等优点，尤其对涂阴病人具有较大诊断价值     

绿色荧光蛋白基因在烟草植株中的表达

用冻融法将含有绿色荧光蛋白基因的质粒ｐＧＬ２－ＧＳ导入农杆菌菌株ＬＢＡ４４０４ （ｐＴＯＫ２３３），两个质粒发生同源重组，形成一个新的二元载体ｐＴＯＫ２３３－ＧＳ．农杆菌菌株ＬＢＡ４４０４ （ｐＴＯＫ２３３－ＧＳ） 经叶盘法转化烟草，筛选具有卡那霉素抗性的愈伤组织，诱导成苗．ＰＣＲ 扩增发现，绿色荧光蛋白基因在９０％ 的再生植株中存在．在荧光显微镜下，使用蓝色激发光观察再生植株的徒手切片和压片发现，８０ ％ 以上的再生植株都能不同程度地发出绿色荧光．多数植株的根尖和叶脉都发光，一些植株的气孔、叶表皮或叶绒毛也发光     

由TMV 54×10~3蛋白基因构建的转基因番茄及其对TMV的抗性

通过土壤农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）的介导,将烟草花叶病毒（ＴＭＶ）的５４×１０３蛋白ｃＤＮＡ转入番茄植物中,得到了转基因植株．这些植株抗卡那霉素,具有胭脂碱合成酶的活性．ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　ｂｌｏｔ分析表明,５４×１０３蛋白基因已整合到番茄基因组上．攻毒实验表明,未转基因的对照组接种病毒２周后即出现花叶,并且随着时间的推移,花叶症状更加典型．而转基因的植物接种病毒后一直到开花结果都未见发病,即没有花叶出现．     

利用花粉管通道途径获得转基因小麦

将带有NPT-Ⅱ基因的质粒PGV用花粉管通道途径转化小麦烟农103,共结实1025粒,其中有718粒种子可以萌发出幼苗,在这718株幼苗中,经卡那霉素筛选,得到75棵绿色抗性植株,提取这些抗性植株的叶片总DNA,作NPT-Ⅱ基因的PCR扩增,有37株为阳性,转化率为5.16％,对其中9个PCR阳性植株的Southern杂交检测结果表明它们均为转基因植株.     

利用人内皮抑素基因构建植物表达载体及对烟草的遗传转化

将人内皮抑素(endostatin)基因重组于植物双元表达载体pGA 643,得到重组质粒pGE.用三亲融合法将其导入农杆菌LBA 4404中,采用叶盘法转化烟草,经诱导与筛选,获得了卡那霉素抗性植株.提取抗性植株总DNA,通过PCR扩增和Sou thern杂交检测,筛选出了整合有外源基因的转化植株.为进一步研究人内皮抑素在烟草中的表达及生物学功能奠定了基础.     

盐藻GPDH基因的载体构建及在烟草中的表达

作者用冻融法，将构建有盐藻3-磷酸甘油脱氢酶基因的植物高效表达载体DsGPDH导入感受态的根癌农杆茵EHA105中．叶盘法转化烟草，在含卡那霉素的MS培养基上进行选择性培养，生根率达到80％．用POR的方法对再生苗进行了初步筛选，阳性率约为50％．对PCR阳性苗，进行RT-PCR分析，证实整合到烟草基因组中的GPDH基因表达产生了mRNA．     

农杆菌介导的白芥防御素基因对甘蓝型油菜的转化

通过根癌农杆菌介导将正向和反向插入白芥防御素基因的pBI121重组质粒转入甘蓝型油菜的下胚轴,经组织培养和抗性筛选获得再生植株. PCR检测后,初步鉴定为阳性植株.     

利用番茄U3snRNA基因上游启动区构建植物表达载体及对烟草的转化

利用番茄U3snRNA基因上游启动区和ACC合成酶反义RNA-核酶嵌合基因DNA片段,构建含U3snRNA基因上游启动区-ACC合成酶的反义RNA-核酶嵌合序列的表达载体,重组于植物双元表达载体pGA643中,得到pGU3R.用三亲融合法导入农杆菌LBA4404中,采用叶盘法转化烟草,诱导再生小植株,获得了卡那霉素的抗性植株.提取抗性植株总DNA,通过PCR、PCRSouthern杂交检测并分别用启动区序列和ACC合成酶的反义RNA-核酶嵌合序列作探针,通过Southern杂交检测,已筛选出整合有外源基因的转化植株.为进一步研究U3snRNA上游启动区增强反义RNA-核酶基因的表达奠定了基础.     

Multiple transgenes Populus xeuramericana ''''Guariento'''' plants obtained by biolistic bombardment

A JERF36 regulation gene, a selection marker gene (NPT-II), and the foreign genes levansucrase (SacB), Vitreoscilla hemoglobin (vgb), and Binary coleopterus insect resistance (BtCry3A OC-I) were co-transferred into Populus xeuramericana 'Guariento' using biolistic bombardment; 25 kanamycin resistant plants were obtained. The results of PCR and Southern hybridization showed that the foreign genes had been integrated into the genome of P. xeuramericana 'Guariento' and 5 genes were all transferred into 7 poplar plants. The results of a BtCry3A ELISA experiment indicated that the BtCry3A gene was expressed in the 7 transgenic poplar plants, and these plants grew well on coastal saline land.     

反义ACC合成酶基因导入番茄的研究

 采用农杆菌介导法将携带有反义ACC合成酶基因和NPT II的表达载体pKAC导入番茄栽培品种美国大红五星102、美国大红108、美国大红王、大红II号等中.经过卡那霉素筛选后,获得了一批抗性苗,其中有3株PCR检测为阳性.实验证明,不同激素配比对番茄子叶不定芽的诱导有一定影响,适宜的农杆菌侵染时间和浓度是番茄基因转化成功与否的关键,延迟选择有利于番茄基因转化细胞的生长.     

辣椒的离体再生及抗虫基因转化的研究

研究建立起一套简单、高效的辣椒遗传转化系统。利用根癌农杆菌介导带柄子叶,将豇豆胰蛋白酶抑制剂（CpTI)基因转入辣椒栽培品种“益都羊角椒”中。对获得的33株卡那霉素（Km)抗性植物进行PCR检测,证明有6株为转CpTI基因植株。通过对转基因植株进行抗虫性研究,发现R1代植株对棉铃虫表达出一定的抗性,但不同转化体之间其抗性存在着差异。     

OsNHX1基因转化84K杨的研究

采用农杆菌介导的方法开展了水稻Na /H 逆向转运蛋白基因OsNHX1转化84K杨的研究.建立了84K杨的叶外植体高频再生系统,经诱导不定芽及诱导生根阶段卡那霉素连续筛选,获得了大量卡那霉素抗性转化植株.PCR检测和Southern杂交检测表明,OsNHX1基因已成功整合到84K杨基因组.耐盐实验表明,转基因植株能在200 mmol NaCl条件下正常生长.