鱼腥草素钠对人脐静脉内皮细胞NO合成及NOS活力的影响

目的:研究鱼腥草素钠对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)NO合成及一氧化氮合酶(NOS)活力的影响.方法:采用15μg/ml LPS作用于HUVECs,共同孵育12h建立炎性损伤细胞模型.考察不同剂量鱼腥草素钠对各组HUVECs细胞存活率、培养上清液中LDH活力、NO含量、内皮型NOS(eNOS)及诱导型NOS(iNOS)表达的影响.结果:鱼腥草素钠可明显提高HUVECs细胞存活率,增加NO的分泌与释放,提高eNOS与降低iNOS活力,从而保护脂多糖诱导的HUVECs炎性损伤.结论:鱼腥草素钠对脂多糖诱导损伤的内皮细胞具有保护作用,其机制与其促进内皮细胞NO分泌与释放,增强eNOS活性和表达,改善血管内皮功能状态相关.     

同型半胱氨酸对钙离子激活状态下内皮细胞eNOS活性及NO含量的影响

研究同型半胱氨酸(HCY)在钙离子导体(A23187)刺激下,对内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性及一氧化氮(NO)含量的影响及机制。收集人脐静脉内皮细胞(HUVEC)进行细胞培养,取第二代细胞分4组:对照组,HCY组,A23187组和HCY A23187组。继续培养24h后,测定细胞培养液中NO、丙二醛(MDA)含量和eNOS、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果显示:1)与对照组相比,HCY组培养液中NO含量降低、eNOS活性减弱、MDA含量升高、SOD活力增强(P<0.05);A23187组NO含量升高、eNOS活性增强、MDA含量降低、SOD活力增强(P<0.05)。2)与A23187组相比,HCY A23187组NO含量降低、eNOS活性减弱、MDA含量升高(P<0.05),HCY不影响A23187激活状态下SOD活力的升高(P>0.05)。结论:HCY在静息及钙离子导体(A23187)激活状态下,使HUVEC中NO含量降低e、NOS活性减弱、MDA含量升高,SOD活力代偿性升高。其机制可能与HCY导致的氧化应激抑制eNOS活性及降低NO的生物利用度有关。     

黄连素调节eNOS/NO保护软脂酸诱导的HUVECs损伤作用机制研究

目的研究黄连素对软脂酸诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制.方法采用500μmol/L软脂酸培养HUVECs 24 h,建立内皮细胞损伤模型,MTT法观察黄连素对细胞存活率的影响;检测细胞培养上清液中一氧化氮(NO)含量;RT-PCR法检测内皮型一氧化氮合酶(e NOS)mRNA水平;Western blot方法检测e NOS和磷酸化e NOS蛋白的表达.结果与对照组比较,软脂酸组细胞存活率降低(P0.05),培养液中NO含量下降(P0.05),细胞内e NOS mRNA水平、e NOS及磷酸化e NOS蛋白表达水平均显著下降(P0.01,P0.05).与软脂酸组比较,黄连素组细胞存活率增加,培养液中NO含量明显提高(P0.05),细胞内e NOS mRNA水平和磷酸化蛋白表达水平均显著提高(P0.01,P0.05).结论黄连素对软脂酸引起的血管内皮细胞损伤有显著的保护作用,并可能与上调e NOS、促进NO生成有关.     

橙皮苷、橙皮素单葡萄糖苷和橙皮素的平衡溶解度和油水分配系数的测定

采用HPLC法测定橙皮苷、橙皮素单葡萄糖苷和橙皮素在水和不同pH缓冲溶液中的平衡溶解度;结合摇瓶法测定其在正辛醇-水体系和正辛醇-不同pH缓冲溶液体系中的油水分配系数。37 ℃时,橙皮苷、橙皮素单葡萄糖苷和橙皮素在水中的平衡溶解度分别为18.94、632.34、15.37 μg·mL^-1;pH值升高,橙皮苷平衡溶解度逐渐降低,对橙皮素单葡萄糖苷和橙皮素无影响,但在pH 7.4时,二者均有最大值,分别为836.57、71.82 μg·mL^-1。橙皮苷、橙皮素单葡萄糖苷和橙皮素在正辛醇-水体系中lg P值分别为0.094、0.573、2.876,在不同缓冲溶液中（pH3.4 ~ 7.4）的lg P值范围分别为0.069 ~ 0.281、0.603 ~ 0.664、2.459 ~ 2.905。橙皮素单葡萄糖苷的平衡溶解度远大于橙皮苷和橙皮素,其lg P值在0.6左右,具有一定的亲水亲脂性,预测其在胃肠道中有较好的吸收;橙皮苷的lg P值小于0.3,推测其不易被胃肠吸收;橙皮素的lg P值大于2,其脂溶性极强,易通过主动转运进入生物膜。上述结果可为3个单体成分的成药性,以及中药陈皮中的橙皮苷酶转化为橙皮素单葡萄糖苷的研究,提供实验基础和科学依据。     

正常人脐静脉内皮细胞的原子力显微镜观察

目的:利用原子力显微镜(AFM)在单细胞水平分析正常人脐静脉内皮细胞的形貌特征和机械性质,为了解内皮细胞结构与功能的关系奠定基础.方法:新鲜人脐静脉内灌注质量分数为0.25%胰蛋白酶消化,获得人脐静脉内皮细胞(HUVECs),M199培养基进行培养,免疫细胞化学检测内皮细胞第Ⅷ因子的表达.将体外培养的HUVECs用质量...     

芹菜素对RAW264.7细胞增殖、分泌NO和吞噬功能的影响

为研究芹菜素(Apigenin,AP)对RAW264.7细胞增殖、分泌一氧化氮(nitrogen monoxidum,NO)和吞噬功能的影响,首先培养RAW264.7细胞至细胞对数生长期,然后MTT法检测不同浓度(25、50、100、150和200μmol/L)的AP对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激的RAW264.7细胞增殖的影响,再用Griess试剂盒检测上述浓度AP对LPS刺激的RAW264.7细胞分泌NO的影响,并用荧光微球检测其吞噬功能的变化.结果显示25-200 μmol/LAP显著抑制LPS刺激的RAW264.7细胞的增殖,并明显抑制LPS刺激的RAW264.7细胞分泌NO,同时明显抑制LPS刺激的RAW264.7细胞的吞噬功能(P<0.01),且呈剂量依赖关系.故在一定浓度范围内,AP显著抑制LPS刺激的RAW264.7细胞增殖、分泌NO和吞噬功能,故有望通过进一步研究将其开发成为免疫调节药物.     

人脐静脉内皮细胞原代培养方法的建立

目的：探索并建立人脐静脉内皮细胞（删Ⅶc）体外稳定培养的方法。方法：以1％Ⅱ型胶原酶消化收集人脐静脉内皮细胞，用嘲加10％的胎牛血清进行培养，免疫细胞化学方法鉴定内皮细胞。结果：原代培养的内皮细胞镜下呈典型的铺路石或者鹅卵石样排列，3～4d时生长最快。5d左右融合；免疫细胞化学染色显示内皮细胞Ⅷ因子相关抗原表达阳性。结论：酶消化法获得的原代血管内皮细胞有较高的存活率，可以作为基础和临床研究的良好模型。     

微生物转化法生成橙皮素的研究

用以橙皮苷为转化底物和主要碳源的培养基筛选到能高效转化橙皮苷生成橙皮素的青霉菌C-21.并利用"复杂系统状态定向调控技术"对种子培养和发酵条件进行优化,使发酵时间缩短至58 h,转化率达到99.55%.根据茵种的动力学曲线发现优化后的培养条件可以提前起始产酶时间,增强产酶能力.     

“去细胞”羊膜基质与人脐静脉内皮细胞相容性的实验研究

测定“去细胞”羊膜基质（human acellular amniotic membrane，HAAM）与人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endotholica lcell，HUVEC）的相容性，为提高内皮细胞在血管支架上的粘附率提供新的途径。     

桦树皮提取物抑制血管生成作用的研究

研究桦树皮提取物对血管生成的抑制作用.应用MTT法检测桦树皮提取物对人脐静脉内皮细胞的增殖抑制作用,采用Realtime PCR方法检测桦树皮提取物对人脐静脉内皮细胞中VEGFmRNA表达的影响,应用ELISA测定细胞上清液中VEGF的分泌情况.实验表明,桦树皮提取物能显著抑制人脐静脉内皮细胞增殖,最高浓度150 μg/mL其抑制率达48.4%,能明显抑制人脐静脉内皮细胞内VEGFmRNA的表达及VEGF分泌.结果表明桦树皮提取物可通过抑制细胞内VEGF mRNA的表达及VEGF的分泌有效抑制人脐静脉内皮细胞的增殖.     

血管内皮生长因子在低氧运动中的效应及一氧化氮的介导作用

血管内皮生长因子(VEGF)是内皮细胞特异性的有丝分裂原,具有促进内皮细胞增生、迁移和增加血管通透性等多种重要生物学作用。研究表明,VEGF在发挥这些生物学作用的过程中一氧化氮(NO)起着必不可少的作用。随着高原训练理论研究的不断深入,低氧运动条件下VEGF对机体机能影响的研究倍受关注,其中VEGF和NO关系的探讨有助于低氧运动状况下对VEGF作用机制的进一步阐述。     

一氧化氮对食管癌细胞核DNA的损伤作用

以硝普钠 ( Sodium Nitroprusside,SNP)作为 NO( Nitric oxide)的体外供体 ,以食管癌细胞系 EC1 0 9作为细胞模型 ,采用单细胞凝胶电泳法检测不同浓度的 NO作用不同时间后 ,食管癌细胞核 DNA被损伤的情况 .检测结果表明 ,在一定的条件下 ,NO对食管癌细胞核 DNA的损伤作用具有明显的浓度和作用时间依赖性特征 ,总的来讲 ,NO的浓度越大 ,NO对细胞作用的时间越长 ,细胞核 DNA所遭受的损伤越重 .     

一氧化氮调节癌细胞中钙离子动力学

一氧化氮(NO)既能促进又能抑制癌细胞的增殖与转移,但是NO在癌细胞增殖与转移过程中所起作用的分子机理尚未明确.采用微孔板荧光检测技术观察NO对癌细胞钙离子浓度的调节作用,实验结果显示,外源性NO能使细胞内钙离子荧光强度显著增强,且增强程度与NO质量分数呈正相关;此外,NO引起的细胞内钙离子浓度增大主要是源于细胞内钙库的钙释放.研究结果有助于在细胞分子层面认识NO在癌细胞增殖与转移中的作用机制.     

太极拳锻炼对中老年人血清NO含量和NOS活性的影响

对长期坚持太极拳锻炼的中老年人血清NO含量及NOS活性进行测定.结果显示:(1)长期规律的太极拳锻炼可以纠正和延缓中老年人因增龄引起的血清NO含量下降,从而预防心血管疾病的发生;(2)长期规律的太极拳运动明显增强老年人血清NOS的活性,进而增加NO的合成.     

一氧化氮参与附睾上皮细胞感染后的宿主防御

 以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus感染附睾上皮细胞的体外感染模型,分别采用RT-PCR和western blot等 方法研究一氧化氮（NO）在附睾上皮细胞宿主防御中的作用。结果表明附睾上皮感染后上调iNOS RNA和蛋白水平的表达,并产生 大量的NO,采用iNOS的抑制剂L NMMA和AGE预处理后,NO水平显著降低,与空白处理组相比,抑制剂处理组的S aureus数量显著增加,这表明NO参与了附睾上皮细胞的宿主防御过程,在附睾上皮细胞的宿主防御中具有重要的作用。     

一氧化氮、一氧化氮合成酶及其抑制剂在缺血性脑损伤研究中的进展

脑血管疾病是严重危害人类健康的疾病,是人类致残和死亡的最重要原因之一,其中以缺血性脑损伤最为多见。近年来,一氧化氮(nitric oxide,NO)在急性脑缺血损伤中的作用日益受到人们的关注[1,2]。NO是目前公认的一种信息传递分子,在脑缺血损伤中具有神经保护和神经毒性双重作用[3,     

晚期糖基化终产物对大鼠阴茎海绵体组织中一氧化氮含量及其合成酶活性的影响

通过观察大鼠阴茎海绵体组织中晚期糖基化终产物(AGEs)含量的变化对一氧化氮(NO)含量及其合成酶(NOS)活性的影响,探讨AGEs在糖尿病性勃起功能障碍(DMED)发生发展中的作用.成年雄性SD大鼠60只,随机取40只用于制作糖尿病模型,造模成功的大鼠分为两组:糖尿病(DM)组和糖尿病 氨基胍给药(DM AG)组;另20只大鼠亦分为两组:正常对照(CONTROL)组和正常对照 氨基胍给药(CONTROL AG)组;氨基胍(AG)给药组大鼠造模后即在其饮水中按1 g/L剂量加入AG.饲养8周后取各组大鼠阴茎海绵体组织,匀浆后检测AGE-肽(AGE-P)含量、NO含量及各型NOS酶活性.DM组阴茎海绵体组织中AGE-P含量、NO含量及诱导型NOS(iNOS)活性明显高于CONTROL组(P＜0.05),而结构型NOS(cNOS)活性则明显低于后者(P＜0.05),而AG则明显减少了DM大鼠阴茎海绵体组织中AGE-P、NO的生成和减弱了iNOS活性,增强了cNOS活性;CONTROL组与CONTROL AG组间比较在各项指标上则无明显差异(P＞0.05).糖尿病状态下AGEs可以引起大鼠阴茎海绵体组织中cNOS活性减弱,iNOS活性增强,过量的NO生成,可能引起阴茎组织细胞的凋亡,导致阴茎勃起功能的损伤.     

天然药物槟榔碱对氧化低密度脂蛋白致血管内皮细胞损伤的保护作用研究

研究天然药物槟榔碱对培养的牛主动脉内皮细胞氧化损伤时MCP-1和ICAM-1mRNA表达水平的影响,探讨其抗动脉粥样硬化的作用机制。用血管内皮细胞与不同浓度槟榔碱预孵育20h后,给予氧化低密度脂蛋白损伤,提取各组细胞总RNA,通过逆转录-聚合酶链式反应技术,以β2-微球蛋白为内参照,检测内皮细胞MCP-1和ICAM-1mRNA表达水平的变化。得到内皮细胞与槟榔碱预孵育后,其MCP-1和ICAM-1mRNA的表达水平明显低于与氧化低密度脂蛋白直接接触的细胞。说明氧化低密度脂蛋白可诱导牛主动脉内皮细胞MCP-1和ICAM-1mRNA表达水平增加,槟榔碱可以减轻其过量表达,保护内皮细胞。     

天然药物川芎嗪对脂质过氧化内皮细胞的保护作用研究

研究天然药物川芎嗪对内皮细胞氧化损伤时细胞存活率以及MCP-1、ICAM-1mRNA表达水平的影响,探讨其抗动脉粥样硬化的可能机制。用血管内皮细胞与不同浓度川芎嗪孵育,给予氧化低密度脂蛋白损伤,通过MTr和RT—PCR技术,检测内皮细胞存活率和MCP-1、ICAM-1mRNA表达水平的变化。结果显示内皮细胞与川芎嗪预孵育后,其细胞存活率明显增加,MCP-1和ICAM-1mRNA的表达水平明显下调。说明氧化低密度脂蛋白可诱导内皮细胞存活率下降,MCP-1和ICAM-1mRNA表达水平增加,川芎嗪可以减轻其过量表达,保护内皮细胞。     

NOS3多态性与高血压继发左心室肥厚的关系

目的:探讨内皮型一氧化氮合酶基因(NOS3)的第4内含子串联重复序列多态性(eNOS4a/b)与原发性高血压患者左心室肥厚的关系.方法:采取病例对照研究,应用PCR技术对高血压患者(2179人,包括1061名左心室肥厚和1118名左心室非肥厚患者)及正常对照人群(812人)进行基因分型,并经测序验证;用a表示含有4个串联重复序列的基因型,用b表示含有5个串联重复序列的基因型.测量所有病例的超声参数.结果:NOS3的eNOS4a/b基因型频率符合Hardy-Weinberg平衡;a/a、a/b、b/b基因型频率在高血压肥厚、非肥厚患者及正常人群中分布分别为0.7%、12.5%、86.8%;0.5%、10.9%、88.6%和0.6%、12.8%、86.6%.a等位基因频率分别为6.9%、6.0%和7.0%,b等位基因频率分别为93.1%、94.0%和93.1%.各基因型频率与等位基因频率在三组之间无统计学差异(P>0.05).携带不同基因型的患者的临床指标和超声参数均无差异(P>0.05).结论:本研究认为NOS3的eNOS4a/b并不增加高血压继发左心室肥厚的易感性.