大鼠肝癌细胞系5-羟色胺及其受体的免疫细胞化学定位

近年已发现除神经内分泌细胞肿瘤外,其它肿瘤也能分泌神经肽和经典的神经递质,某些结肠癌的癌细胞已被检出-羟色胺(5-HT).而且有人证明,5-HT能刺激结肠癌细胞的分裂增殖,5-HT1受体介导了这种作用.然而,5-HT及其受体在肝癌细胞的定位尚未见报道.我们以大鼠肝癌细胞系FSK 7902作为研究对象,采用免疫细胞化学方法观察了5-HT及其受体的分布,为进一步研究5-HT在肝癌细胞中的意义提供形态学依据.     

炎症微环境与肝癌转移

肝癌形成以及肿瘤侵袭和转移过程中癌细胞和癌旁基质之间的相互调节作为一个动态系统已被广泛研究。肝 肿瘤微环境一般分为细胞成分和非细胞成分,细胞成分包括肝实质细胞、肝星状细胞、成纤维细胞、免疫细胞、内 皮细胞、间充质干细胞;非细胞成分包括生长因子、细胞因子、细胞外基质、激素和病毒等。目前研究认为肝脏细 胞成分在经历外界不同刺激后,通过促进细胞坏死、凋亡以及分泌多种蛋白形成炎症微环境,从而参与肝肿瘤的发 生和发展。由于肝细胞癌引起死亡的主要原因是肿瘤的进展和转移,因此深入研究肿瘤转移过程中肝细胞与炎症微 环境之间的相互作用将有助于系统性阐述肝癌转移的分子机理。     

人外周白细胞糖皮质激素受体的昼夜节律

生物节律,特别是昼夜节律,作为生物适应自然界周期性变化的一种生命现象。已经有了许多研究,但关于受体的昼夜节律的研究还不多,目前为止还仅限于少数几种,如大鼠松果腺的β-肾上腺素受体、大鼠脑的α-、β-肾上腺素受体、M-胆碱受体、多巴胺受体和鸦片样受体等。最近我们报告了大鼠肝胞液和肝核糖皮质激素受体(GCR)的昼夜节律。至于人的     

大鼠胃溃疡自愈过程中颌下腺GCT细胞的超微结构观察

在家兔实验性胃溃疡等内脏疾患自愈过程的研究中,证实了机体存在着自然抗病机制.近十余年的一系列研究证明,内分泌是实现这个机制的重要因素.已知颌下腺是小鼠和大鼠体内含生物活性多肽最多的器官之一,在机体生理和病理过程中显示出越来越重要的调节作用.已有的研究表明,这些多肽主要定位在颌下腺颗粒曲管(GCT)细胞内,其中表皮生长因子(EGF)与胃肠道及溃疡关系十分密切,而GCT细胞又是EGF合成的主要所在.     

大鼠胃粘膜EGF受体基因表达的原位杂交定位

表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)与胃粘膜的关系十分密切,对胃粘膜主要的生物效应是刺激细胞增殖和抑制胃酸分泌.已从分离的胃腺检测到EGF受体的存在,揭示EGF可能通过结合胃粘膜腺细胞上的 EGF受体而发挥其生物效应.本文首次用核酸杂交组织化学放射自显影法在胃粘膜原位证实了EGF受体基因的表达.活性表达主要在胃腺颈部细胞,并可见壁细胞内呈现EGF受体基因表达活性.研究结果表明,胃粘膜腺细胞具有合体EGF受体的功能.本实验为EGF对胃粘膜的效应提供了可靠而直接的证据.     

胰岛素受体研究进展

胰岛素受体属多肽类的细胞膜受体之一,为了确定胰岛素如何在细胞内转变为细胞的代谢活动,人们对该受体的纯化及其结构特点研究做出了巨大的努力.在研究时发现:v-erb-B 肿瘤基因与人类上皮生长因子(EGF)受体是相同的,而胰岛素受体与肿瘤基因的产物尽管不同,但在氨基酸排列顺序上有很多相似之处,因此在了解胰岛素受体结构时,往往借助于肿瘤基因和EGF 来进行研究.目前通过DNA的氨基酸顺序已间接测定了胰岛素受体的氨基酸顺序.胰岛素受体是     

肝氨甲酰磷酸合成酶I基因转录起始位点的测定

氨甲酰磷酸合成酶I(CPSI)是尿素循环的第一个酶,主要存在于肝细胞线粒体中,是肝组织特异酶,与肝细胞的分化有关.我们曾观察到在大鼠肝癌诱发过程中,CPSI酶活性降低,实验证明癌变过程中CPSI基因表达的异常与基因转录调控可能有关.真核基因的转录的调控是通过反式作用因子(trsns-acting factor)与顺式作用元件(cis-acting element)的相互作用而实现的.顺式作用元件多存在于转录起始位点的5′端上游,对基因转录有调控作     

腺病毒载体介导肝细胞生长因子基因对大鼠心肌缺血的基因治疗

为研究腺病毒载体介导肝细胞生长因子对心肌缺血基因治疗的可行性，首先用RT—PCR方法从人胎盘cDNA文库中克隆人肝细胞生长因子(HGF)基因全长编码区cDNA，通过脂质体共转染和细胞内质粒同源重组的方法构建了携带肝细胞生长因子基因的重组腺病毒Ad—HGF．经过在293细胞系内的扩增和氯化铯密度梯度离心获得大量纯化的重组腺病毒、体外实验中用ELISA方法证明肝细胞生长因子能在原代培养的乳大鼠心肌细胞中表达并分泌到培养上清液中、然后用MTT方法测定了其对内皮细胞的刺激增殖作用、活体实验中用绿色荧光蛋白基因作为报告基因检测了腺病毒在大鼠体内的分布和表达持续时间，通过大鼠冠状动脉结扎后制作的心肌缺血动物模型，证明重组腺病毒Ad—HGF对大鼠，心肌缺血的治疗是有效的。以上结果说明Ad—HGF的构建是成功的，在体内外都显示了其生物学活性、为基因治疗缺血性心脏病提供了实验依据．     

大鼠胃溃疡自愈过程中颌下腺EGF的免疫组织化学研究

以往的研究证明,机体存在着自然抗病机制,并且这一机制主要是通过神经和内分泌调节而实现的.随着内分泌概念的扩展,机体自然抗病机制可能涉及到更多的调节肽,表皮生长因子(EGF)很可能是这个机制中的一个重要因素.EGF是由53个氨基酸残基组成的单链多肽,在小鼠和大鼠主要由颌下腺颗粒曲管(GCT)细胞合成,并贮存在分泌颗粒内,随唾液进入消化道.已知EGF具有广泛的生物学效应,与多种生理和病理调节有关,但其与消化系统的关系似乎更为密切.已有的研究表明,EGF对整个胃肠道及肝脏都有生物效应.     

内皮素A型受体(ET_A-R)基因在大鼠心血管系统细胞中的表达

内皮素A型受体cDNA由Lin首先从大鼠肝脏cDNA文库中克隆出来.它为在分子生物学水平研究ET受体提供了一个可靠的基础.现已证明,ET受体主要分为两种亚型(A型和B型).A型受体主要分布在平滑肌细胞,B型受体则主要存在于内皮细胞.这两种亚型受体是由不同基因编码,ET和ET_A受体结合后,可使血管收缩,引起平滑肌细胞的增殖,可能与高血压的发病有密切关系.而当ET和ET_B受体结合后,则会引起EDRF等舒血管物质的释放.     

微载体支持下人肝癌细胞静置三维培养

传统的单层平面培养仍然是目前肝癌研究中最常用的体外培养方法,而这种方法不能形成类似体内的结构,在研究体内细胞与细胞、细胞与微环境之间的相互作用等方面存在明显的限制性,以微载体Cytodex－3为支持物,在静置状态下培养人肝癌细胞BEL－7402,构建一种简单易行的人肝癌细胞三维培养模型,电子显微镜、酶活性及流式细胞仪分析表明,细胞呈多面体形,多层重叠排列呈巢状,胞间有0．5－2．0μm的间隙,胞间细胞膜局部突起密切接触,有桥粒形成,90％以上细胞存活,并维持葡萄糖的分解代谢和表达EGF受体,胞内AST,ALT及LDH－L的活性高于平面培养,该三维结构具有体内索状型和实体型肝癌的结构特征,较之单层平面培养,更适合于研究肝癌细胞及细胞与微环境之间的 之间的相互作用,以及用于肝癌细胞浸润、转移和抗药性机理的研究。     

表皮生长因子

斯坦利·科恩在50年代初曾经是丽塔·蒙塔尔奇尼在研究神经生长因子(NGF)方面的助手,但是他在研究NFF的过程中发现了NGF所解释不了的生长因子:他紧追不放,终于发现了表皮生长因子(EGF)。作为生化学家,在将近30年的时间里他在生化和细胞水平上系统地研究了EGF及其受体,并因之与蒙塔尔奇尼分享了1986年生理学或医学诺贝尔奖。尽管NGF与EGF还没有在应用方面显露其重要作用,但确实开辟了生物学的新领域。     

促甲状腺激素释放激素受体基因在小鼠睾丸中的表达

促甲状腺激素释放激素(Thyrotropin-releasing hormone,TRH)为Shally等人于1969年从羊和猪的下丘脑中提取并分离纯化的3肽。TRH与垂体前叶促甲状腺激素细胞特异性受体结合刺激促甲状腺激素(TSH)的合成和分泌。应用免疫组织化学,TRH定位于睾丸内间质细胞中,且TRH基因也已在人、大鼠和小鼠的睾丸中表达。然而,TRH是否通过特异性受体作用于睾丸仍不清楚。目前,编码TRH受体(TRH Receptor,TRH-R)的cDNA克隆已从小鼠垂体促甲状腺激素肿瘤细胞中分离出来,其氨基酸序列显示TRH-R是由7个跨膜区的单一肽链构成,属G蛋白偶联型受体超家族。大鼠和小鼠的TRH-R的核苷酸和氨基酸序列具有高度同源性。TRH可能通过G蛋白偶联受体起到内分泌和神经药理作用。Satoh等人通过Northern印迹杂交和反转录-PCR发现小鼠、大鼠和人的睾丸组织中特异性表达了TRH-R基因,但无定位结果。本文应用原位杂交组织化学(ISHH)技术,首次观察了TRH-R mRNA在小鼠睾丸中的表达和定位,现报道如下:     

低浓度AFP与癌变的关系

成年人血清中检出甲胎蛋白(以下简称AFP),一般认为与肝癌的发生和发展有关,但近年来的研究证明:病毒性肝炎、肝硬化等肝病的某些患者用高灵敏度检测方法(血凝试验,放射免疫测定等)也可检出低浓变AFP。这类血清中AFP异常的肝病患者是否预示有癌变的可能,能否作预防性治疗以至阻断或逆转肝细胞癌变过程,这些问题均为人们关心和重视。最近我所诊断组从本市工厂企业115101名职工肝癌普查中发现270例低浓度AFP对象。经两年随访及动态观察,发现肝功能慢性指标(TTT或ZnTT)     

肝胆胰外科新理念与新技术

外科手术是治疗肝胆胰肿瘤最有效和首选的方法,减少手术出血量、提高手术安全性、简化手术操作、降低并发症和死亡率,一直是肝胆胰外科领域研究的焦点.作为国内最早施行肝胆胰手术的中心之一,从20世纪80年代至今本课题组先后提出了一些新的理念:提出大肝癌和巨大肝癌手术切除的可行性理论并应用于临床,拓展了肝切除治疗肝癌的适应证;提出肝细胞癌新的分类方法,有利于针对大小不同的肿瘤选择不同的治疗方法和进行疗效评估;针对肝癌合并门静脉癌栓的不同类型,采取不同的手术方式,取得良好效果;肝切除联合脾切除治疗原发性肝细胞癌合并门静脉高压症.创立3种肝脏手术控制出血新技术:不解剖肝门经肝实质结扎入肝及出肝血流、第一肝门阻断联合肝下下腔静脉阻断、经肝裸区双悬吊法;小范围肝切除治疗肝门部胆管癌的新理念;不缝合胆管前壁的肝肠吻合术和插入式胆肠吻合术;新的"U"型胰肠套入式缝合法;世界首个原位辅助性部分肝移植手术方式,并成功应用于临床.     

琼脂在肝细胞聚集体培养中的应用

新分离的大鼠肝细胞在体外培养的过程中形成聚集体是一种很重要的现象,它对于人工肝支持系统的构建有重要意义。聚集体中的肝细胞可以保持较高的特异生理活性。采用琼脂作为细胞外基质包被细胞培养板,可以有效地促使肝细胞在无血清的培养基中形成聚集体。结果表明,该办法简单有效,聚集体中的肝细胞的特异性功能如尿素合成、白蛋白分泌等活性均高于单层贴壁生长的肝细胞。     

肝脏再生的分子机制

肝组织的再生是肝脏对损伤反应的一个基本现象.最近有证据表明,再生反应可被一些特异性的外源刺激信号诱导,表现为一些生长因子和细胞因子的参与,其中较为典型的是肝细胞生长因子(HGF)、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子(TGF-α)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、胰岛素及去甲肾上腺素等.对肝脏再生机理的认识有助于肝脏生长发育及其相关医学问题研究的深入.     

孤儿受体TR3蛋白及其mRNA在大鼠睾丸中的定位和表达研究

孤儿受体(Orphan receptor)是一类目前还未发现其配体的核受体,它与类固醇激素受体、甲状腺激素受体及维生素D3受体同属一个家族。目前发现的孤儿受体成员众多,其中TR3(NGFIB,Nur 77)是一种独特的孤儿受体,它是早期即刻表达基因(immediate-early gene)的产物,其表达可被血清生长因子等多种刺激所诱导。TR3的生理功能目前还不完全清楚,已知TR3参与丘脑下部-垂体-肾上腺轴激素调节和神经调节,在T细胞活化所诱导的细胞程序化死亡(apoptosis)中起关键作用,并调控类固醇21-羟化酶基因的表达。目前国际上对TR3的研究主要集中在基因结构和调控机理方面,而对其在睾丸内受体蛋白和其mRNA的定位和表达的研究则未见报道。我们用免疫组织化学和原位杂交的方法观察了孤儿受体TR3蛋白及其mRNA在大鼠睾丸中的定位和表达。结果表明,在大鼠睾丸中孤儿受体TR3蛋白特异定位于生精细胞,其mRNA在生精细胞特异表达,说明TR3在精子发生过程中可能起着重要作用。     

肝部分切除及表皮生长因子迅速诱导PC3基因的表达

２／３肝部分切除后数小时内早期反应基因的表达在肝细胞由Ｇ０到Ｇ１期转变和Ｇ１期进程中起关键作用,利用表达性差异显示分析技术研究了２／３肝部分切除后１ｈ的基因表达差异,序列分析揭示一种由神经生长因子（ＮＧＦ）诱导产生的瞬时早期反应基因ＰＣ３基因可能与肝再生调控有关,进而以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交证实２／３肝部分切除可迅速诱导ＰＣ３基因的表达,其表达高峰为术后１～２ｈ,ＥＧＦ在原代培养大鼠肝细胞体系中可迅     

氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ基因5′端上游序列特异结合蛋白的鉴定

氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ(CPSⅠ)是肝组织特异酶,与肝细胞分化有关。我们曾观察到,肝癌及癌变过程中CPS_1基因表达降低,并证明可能是由于基因转录调控异常所致。真核基因转录调控是通过顺式作用元件(cisacting element)和反式作用因子(transacting factor)的相互作用而实现的。目前已发现许多与病毒基因、细胞基因启动子、增强子特异结合的蛋白因子,具有转录调控作