运用HSV－tk／ACV系统进行肿瘤基因治疗研究

构建了含ｐｇｋ启动子驱动的ＨＳＶ－ｔｋ基因的反转录病毒载体ｐＬＮＴＫ，将ＨＳＶ－ｔｋ基因转移至人脑胶质瘤ＳＨＧ４４细胞（命名为ＳＨＧＬＮＴＫ）及小鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６（命名为Ｂ１６ＬＮＴＫ）．体外实验证实核着类似物ＡＣＶ对ＳＨＧＬＮＴＫ细胞和Ｂ１６ＬＮＴＫ细胞的杀伤敏感性分别高于亲本细胞１０００和４００倍．转ＨＳＶ－ｔｋ基因细胞与亲本细胞按不同比例共培养时，亲本细胞对ＡＣＶ的敏感性明显增高，存在旁观者效应．首次应用人脑胶质瘤细胞株进行裸鼠体内实验，结果表明：ＡＣＶ能完全抑制ＳＨＧＬＮＴＫ细胞在裸小鼠体内肿瘤的形成，对裸小鼠体内已形成的ＳＨＧＬＮＴＫ肿瘤的治疗效果与对照ＳＨＧ４４肿瘤相比，肿瘤体积缩小８０％；用Ｂ１６ＬＮＴＫ细胞接种同系Ｃ５７／ＢＬ小鼠，经ＡＣＶ治疗后，Ｂ１６ＬＮＴＫ组小鼠的肿瘤较对照组Ｂ１６肿瘤小９５％．ＨＳＶ－ＴＫ／ＡＣＶ系统原位基因转移治疗ＳＨＧ荷瘤裸小鼠、Ｂ１６荷瘤小鼠，原位注射病毒悬液／ＡＣＶ治疗组的ＳＨＧ肿瘤、Ｂ１６肿瘤分别较对照组肿瘤小５０％，４３％，原位注射ＰＡ３１７／ＬＮＴＫ细胞，ＡＣＶ治疗的ＳＨＧ肿瘤较对照组肿瘤小９０％，以上实验结果，统计学上差异极显著，Ｐ＜０．０１．实验     

HSV1-tk基因的部分DNA序列分析

采用ＰＣＲ技术从商品质粒ｐＨＳＶ１０６扩增出ＨＳＶ１－ｔｋ基因（１１２８ｂｐ）,ＰＣＲ产物用ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ双酶切后定向克隆至真核表达载体ｐｃＤＮＡ３,然后以重组质粒ｐｃＴＫ为模板ｔｋ基因的５端引物为ＤＮＡ测序引物进行部分ＤＮＡ序列分析,部分ＤＮＡ序列分析证明ＰＣＲ产物为ＨＳＶ１－ｔｋ基因正确无误,成功筛选到ＨＳＶ１－ｔｋ基因的真核表达载体ｐｃＴＫ,并为利用ｔｋ基因在实验动物体内进行自杀性基     

带HSV－tk基因的重组腺病毒杀伤离体肺癌细胞的研究

带有单纯疱疹病毒脱氧胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的腺病毒结合ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（ＧＣＶ）对分裂细胞有很强的杀伤作用．在感染复数（Ｍ．Ｏ．Ｉ,ＭｕｌｔｉＰｌｉｃｉｔｙｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｎ）达到１０００时对人体肺腺癌细胞Ａ５４９的杀伤几乎达到１００％．四种人体肺癌细胞株（Ａ５４９,ＬＡＸ,ＳＰＣ,ＳＫＹ）对带ＨＳＶ－ｔｋ的腺病毒（ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ）的杀伤作用表现出不同的敏感性．另Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ（ＡＣＶ）和ＧＣＶ对感染了重组腺病毒ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ的细胞都有一定杀伤作用,但杀伤效果有很大差别;就Ａ５４９而言,ＧＣＶ的杀伤作用比ＡＣＶ高７～８倍．此外ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ结合ＧＣＶ杀伤肿瘤细胞时有“旁观者效应”,即感染了ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ的细胞与未感染细胞混合后,后者也明显地遭到杀伤．     

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因的脑肿瘤基因治疗研究

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ｈｅｒｐｅｓＳｉｍｐｌｅｘＶｉｒｕｓ－ＴｈｙｍｉｄｉｎｅＫｉｎａｓｅ，ＨＳＶ－ｔｋ），配合核苷酸类似物（ＮＡＳ）ＧＣＶ或ＡＣＶ的基因治疗是目前肿瘤基因治疗领域中的一种较有然望的治疗方法。     

带HSV—tk基因的重组腺病毒杀伤离体肺癌细胞的研究

带有单纯疱疹病毒脱氧苷激酶基因的泉病毒结合ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（ＧＣＶ）对分很强的杀伤作用。在感染复数（Ｍ。Ｏ。ＩＭｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）达到１０００时对人体肺腺癌细胞Ａ５４９的杀伤几乎达到１００％。四种人体肺癌细胞株（Ａ５４９，ＬＡＸ，ＳＰＣ，ＳＫＹ）对带ＨＳＶ－ｔｋ的泉病毒（ＡＤＶ／ＲＳ－ｔｋ）的杀伤作用表现出不同的敏感性。但杀伤效果有很大差别；就Ａ５４９而言，ＧＣ     

人肿瘤细胞株中细小病毒H—1的DNA扩增与非结构蛋白NS—1基因…

研究三株人癌细胞和两株对照细胞对细小病毒Ｈ－１杀伤作用第三性的分子机制，表明了感染复ｍｏｉ（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）为５ｐｆｕ（ｐｌａｑｕｅｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ）／细胞的情况下，作为Ｈ－１病毒复制受纲细胞的人癌细胞株ＱＧＹ－７７０３和人胃癌细胞株ＳＧＣ－７９０１，能够支持病毒ＤＮＡ扩增和非结构蛋白ＮＳ－１基因的表达，这和作为阳性对照的由ＳＶ４０转化的新生儿肾细胞株ＮＢ－Ｋ     

人粒细胞集落刺激因子在昆虫细胞中的表达

利用苜蓿尺核型多角 体病带β－Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ基因标志的非融合蛋白基因转移载体ｐＢＢ成功地构了重组杆状病毒ＡｃＮＰＶ－Ｇ－ＣＳＦ．在感染重组病毒的草地夜蛾细胞中ｈＧ－ＣＳＦ得到了高效表达。表达产物由ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ检出，其分子量约为１９ＫＤａ。     

人肿瘤细胞株中细小病毒H—1的DNA扩增与非结构蛋白NS—1基因的表达

研究三株人癌细胞和两株对照细胞对细小病毒Ｈ－１杀伤作用敏感性的分子机制．表明了在感染复数ｍｏｉ（ｍｕｌｔｉｐｉｃｉｔｙｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）为５ｐｆｕ（ｐｌａｑｕｅｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ）／细胞的情况下，作为Ｈ—１病毒复制受纳细胞的人肝癌细胞株ＯＧＹ－７７０３和人胃癌细胞株ＳＧＣ—７９０１，能够支持病毒ＤＮＡ扩增和非结构蛋白ＮＳ—１基因的表达，这和作为阳性对照的由ＳＶ４０转化的新生儿肾细胞株ＮＢ—Ｋ一样，但对Ｈ—１病毒感染有抗性的人肾癌细胞株ＯＵＲ—１０和它的对照人胎肾细胞株ＨｕＫ—１，并不支持病毒ＤＮＡ扩增和ＮＳ—１蛋白的表达．本文结果指出，细小病毒Ｈ—１的杀伤作用与细胞中的病毒ＤＮＡ扩增及ＮＳ—１基因表达的程度相关．     

从虫体提纯HBsAg基因表达产物的新方法

感染含乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）基因的粉纹夜蛾重组核型多角体病毒ＴｎＮＰＶ－Ｈｈｓ８５－ＯＣＣ￣＋的粉纹夜蛾幼虫先经匀浆澄清处理后，再用单克隆抗体亲和柱层析的方法提纯ＨＢｓＡｇ蛋白．提纯的蛋白经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，出现３条电泳带，分子量分别为２４ＫＤ，２７ＫＤ和４５ＫＤ．用此法从虫体提纯ＨａｓＡｇ基因表达产物，具有简单、快速、高效的特点．     

Bc1-2 基因加强表达对 OA 诱发的细胞编程死亡的效应

ＯＡ能诱发人神经母细胞瘤ＳＫ细胞进行编程死亡．死亡细胞缩小变圆，细胞质凝聚，ＤＮＡ有控降解成约２００ｂｐ左右的片段，且这一过程可由蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮（ＣＨＸ）抑制．将编码Ｂｃ１－２全长蛋白质的ｃＤＮＡ植入ｐＸＪ４１ｎｅｏ载体中，使其表达由ＨＣＭＶ病毒启动子控制．形成的顺义（ｐＢｃｌ－２－Ｓ）及反义（ｐＢｃｌ－２－ＡＳ）表达质粒经转染导入ＳＫ细胞中获得稳定转染子，Ｗｅｓｔ－ｅｒｎ印迹表明顺义转染子表达较大量的２６ｋｄＢｃ１－２蛋白，而反义转染子则不表达．增强表达的Ｂｃ１－２基因产物对ＯＡ引ＳＫ细胞编程死亡无抑制效应．     

啤酒酵母单倍体的诱导与遗传标记

在适宜的条件下，诱导充分活化的啤酒酵母ＬＱ１６和ＱＢ７，可以获得单倍体细胞，再通过ＵＶ诱变使二者分别获得ＬＱ１６〔Ｄａｔ’Ｉｌｅ＾－〕和ＱＳＢ７〔Ｈ２Ｓ＾－，Ａｌａ＾－〕的遗传标记。     

AcNPV增强子hr5增强HBsAg基因表达的研究

用形成包涵体（ＯＯＣ＋）并能利用人工合成启动序列和多角体ＸＩＶ启动子表达外源基因的转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３将多角体基因、乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢＳＡｇ）基因和苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）的增强子ｈｒ５部分序列同时插入无包涵体的粉纹夜蛾核型多角体病毒ＴｎＮＰＶ－ＳＶＩ－Ｇ基因组中，得到两株高效表达ＨＢｓＡｇ基因又形成包涵体的重组病毒ＴｎＮＰＶ－ｓｈｒ３５－ＯＣＣ＋和ＴｎＮＰＶ－ｓｈｒ２６－ＯＣＣ＋．对重组病毒的酶切鉴定、ＤＮＡ斑点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析证实，外源基因及其相应的启动子和增强子序列已正确插入病毒基因组中．插入顺序中，ｈｒ５增强子是插入ＨＢｓＡｇ基因下游，多角体基因与ＨＢｓＡｇ基因方向相反．１２５Ⅰ－固相放射免疫检测和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果表明，ＨＢｓＡｇ基因在昆虫离体细胞中得到高效表达并保留了抗原活性．ＴｎＮＰＶ－ｓｈｒ２６－ＯＣＣ＋和ＴｎＮＰＶ－ｓｈｒ３５－ＯＣＣ＋表达的ＨＢｓＡ吕蛋白与没有插入增强子序列的重组病毒ＴｎＮＰＶ—ＨＢｓ８５－ＯＣＣ＋的比较，分别提高了４０％和４６％．     

甲型肝炎病毒(H2株)在三种细胞中的感染性滴度比较

本文用恒河猴胚肾传代细胞（ＭＥＫ）、人胚肺成纤维二倍体细胞（ＫＭＢ１７和２ＢＳ）对ＨＡＶ－Ｈ２株感染性滴度进行了初步研究,结果显示Ｈ２株在ＭＥＫ上感染性滴度（ＣＣＩＤ５０／ｍＬ）最高,ＣＣＩＤ５０／ｍＬ比ＫＭＢ１７,２ＢＳ平均ＣＣＩＤ５０／ｍＬ高１．２８ｌｏｇ和１．５９ｌｏｇ．经统计学分析,Ｐ＜０．０５,有显著性差异,证实ＭＥＫ对Ｈ２株最敏感．ＭＥＫ可能是测定ＨＡＶ感染性滴度和繁殖ＨＡＶ较理想的细胞     

IGF-Ⅱ和HBxAg及ras基因在树鼩实验性肝癌组织中的表达

用免疫组化方法观察胰岛素样生长因子Ⅱ（ＩＧＦ－Ⅱ）ＨＢｘＡｇ及ｒａｓ基因的表达蛋白Ｐ＾２１在乙肝病毒（ＨＢＶ）和黄曲霉素Ｂ１（ＡＦＢ１）致树Ｑｕ肝癌过程中的表达，发现这三种基因蛋白的表达与肝癌发生呈正相关系，即接受ＨＢＶ和ＡＦＢ１双因素的树Ｑｕ的肝癌发生率与ＩＧＦ－Ⅱ，ＨＢｘＡｇ及ｐ＾２１的表达阳性率均显著高于只暴露于单一因素ＨＢＶ或ＡＦＢ１的动物。同时，在带瘤树Ｑｕ中，这三种基因的表达又显著高于     

IGF-Ⅱ和HBxAg及ras基因在树鼠句实验性肝癌组织中的表达

用免疫组化方法观察胰岛素样生长因子Ⅱ（ＩＧＦ－Ⅱ）、ＨＢｘＡｇ及ｒａｓ基因的表达蛋白ｐ２１在乙肝病毒（ＨＢＶ）和黄曲霉素Ｂ１（ＡＦＢ１）致树鼠句肝癌过程中的表达。发现这三种基因蛋白的表达与肝癌发生呈正相关系。即接受ＨＢＶ和ＡＦＢ１双因素的树鼠句的肝癌发生率与ＩＧＦ－Ⅱ、ＨＢｘＡｇ及ｐ２１的表达阳性率均显著高于只暴露于单一因素ＨＢＶ或ＡＦＢ１的动物。同时，在带瘤树鼠句中，这三种基因的表达又显著高于无瘤者。提示：ＨＢＶ与ＡＦＢ１能协同激发这些基因的异常表达；这些基因的过量表达在肝细胞的癌变过程中起了重要的作用     

慢性乙肝病毒感染者外周血单个核细胞染色体遭受病毒损害的见证

用Ｓｏｕｔｈｅｍ　ｂｌｏｔ分子杂交技术，检测９９例ＨＢＶＭ阳性的慢性ＨＢＶ感染者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）内ＨＢＶＤＮＡ的存在状态，其中７１例同时用ＢｒｄＵ标记法检测细胞中姊妹染色体交换（ＳＣＥ）率，观察ＨＢＶ对宿主单个核细胞染色体的损害情况。结果发现４２例被检者（４２．４２％）的ＰＢＭＣｓ中存在ＨＢＶＤＮＡ（游离型或整合型，有的还见到游离的复制中间体），正常对照组则无１例检出ＨＢＶＤＮＡ。被检者ＰＢＭＣｓ的平均ＳＣＥ率明显高于对照组，其中ＨＢＶＤＮＡ（＋）组又显著高于ＨＢＶＤＮＡ（－）组。证明ＨＢＶ的入侵与ＳＣＥ率升高之间有密切关系，提示ＨＢＶ对单个核细胞染色体形成了损害。这一现象可能是慢性乙肝病毒感染者免疫功能紊乱和ＨＢＶ长期不能清除等系列表现的原因之一。     

苏云金芽孢杆菌新分离株S11—11δ—内毒素基因在Btk.BE …

用对鳞翅目夜蛾科幼虫有很强毒杀作用的土壤新分离株Ｓ１１－１１为δ－内毒素基因的供体菌，以穿梭质粒ＰＨＴ３１０１为载体，用Ｐｓｔ Ｉ和ＥｏｏｒＩ分别对供体和载体ＤＮＡ作双酶切，并将酶切片段用Ｔ４ ＤＮＡ连接酶连接，用电激法将重组ＤＮＡ转入苏云金芽孢杆菌无晶体突变株Ｂｔｋ．ＢＥ２０中，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳及扫描电镜观察证明，δ－内毒素基因在Ｂｔｋ．ＢＥ２０中得到表达，并具有较高的表达量。生物测定     

抗紫外线透明保护胶光学性能的研究

本文利用日本岛津ＵＶ－２４０型紫外可见分光光度计和ＧＥＢ－Ｈ６高压汞灯研究了Ｋ２ＳｉＯ３在玻璃上涂膜的紫外和可见光谱特性．从而为室外色彩提供了一种优良的抗紫外透明保护胶．     

重组质粒βhCG—pPIC9K的构建及嗜甲醇酵？…

目的：为用基因重组技术表达ｈＣＧ避孕疫苗抗原,构建在酵母细胞中表达的重组质粒βｈＣＧ－ｐＰＩＣ９Ｋ,转化嗜甲醇酵母,方法：根据βｈＣＧ的ｃＤＮＡ序列设计两条引物,使上游带ＥｃｏＲⅠ酶切位点,下游带ＮｏｔⅠ酶切位点,以质粒βｈＣＧ－ＰＢＳＫＳ为模板,进行ＰＣＲ扩增反应;将所得的ＤＮＡ片段经ＥｃｏＲⅠ和ＮｏｔⅠ双酶切后用Ｔ４连接酶与ｐＰＩＣ９Ｋ质粒进行连接,然后导入大肠杆菌ＤＨ５α,用ＰＣＲ筛选阳性克     

钛和锆钨硅杂多酸盐异构体的合成及表征

合成了α－和β－Ｍ１０－ｎＨｎ〔ＳｉＷ９Ｔｉ３Ｏ４０〕·ｘＨ２Ｏ（Ｍ＝Ｋ＋、Ｍｅ４Ｎ＋），α－（Ｍｅ４Ｎ）４Ｈ２〔ＳｉＷ１１ＺｒＯ４０〕·１３Ｈ２Ｏ和β－（Ｂｕ４Ｎ）４Ｈ２〔ＳｉＷ１１ｚｒＯ４０〕·１４Ｈ２Ｏ等杂多酸盐异构体。并用ＩＲ，ＵＶ，ＴＧ和ＤＴＡ、极谱以及Ｘ－射线粉末衍射等手段进行了表征。