反义基因逆转肿瘤细胞多药耐药性诱导细胞凋亡的研究

探讨克服肿瘤细胞多药耐药（ＭＣＲ１）性的方法,提高化疗效。本采用多药耐药反义基因（ＭＤＲ１－ＲＳＰＳ－ＯＤＮ）逆转Ｋ５６２／ＡＤＭ肿瘤细胞的ＭＤＲ１,诱导肿瘤细胞凋亡ＭＤＲ１－ＡＳ ＰＳ－ＯＤＮ诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞株细胞产生大量ＤＮＡ断片,ＦＡＣＳ检测发现几乎全部ＭＲＤ＾＋Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞发生凋亡。其结果表明ＤＭＤＲ１－ＡＳ ＰＳ－ＯＤＮ能有效、特异地抑制ＭＤＲ１基因表达,逆转肿瘤细胞的     

丙戊酸诱导多药耐药白血病细胞HL-60／ADR凋亡的研究

目的研究丙戊酸对多药耐药白血病细胞HL-60／ADR的抑制作用及其机制。方法采用MTT比色试验观察丙戊酸对多药耐药细胞HL-60／ADR的抑制作用。采用光镜技术观察细胞形态结构的改变,利用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果（1）丙戊酸能明显抑制HL-60／ADR细胞的生长,药物浓度相当于生药32．65mg／mL时,即具有显著的抑制作用,抑制率呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度0c．50）相当于生药66．44mg／mL。（2）形态学改变呈典型的凋亡特征。（3）丙戊酸能诱导多药耐药细胞HL-60／ADR凋亡,凋亡率也呈时间和剂量的依赖性。结论丙戊酸对多药耐药细胞HL-60／ADR的生长具有极强的抑制作用,诱导其凋亡是其机制之一。     

丙戊酸诱导多药耐药白血病细胞HL-60/ADR凋亡的研究

目的 研究丙戊酸对多药耐药白血病细胞HL-60/ADR的抑制作用及其机制.方法 采用MTT比色试验观察丙戊酸对多药耐药细胞HL-60/ADR的抑制作用.采用光镜技术观察细胞形态结构的改变,利用流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 (1)丙戊酸能明显抑制HL-60/ADR细胞的生长,药物浓度相当于生药32.65mg/mL时,即具有显著的抑制作用,抑制率呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)相当于生药66.44mg/mL.(2)形态学改变呈典型的凋亡特征.(3)丙戊酸能诱导多药耐药细胞HL-60/ADR凋亡,凋亡率也呈时间和剂量的依赖性.结论 丙戊酸对多药耐药细胞HL-60/ADR的生长具有极强的抑制作用,诱导其凋亡是其机制之一.     

三尖杉酯碱诱导HeLa细胞凋亡的研究

报道了三尖杉酯碱 (harringtonine ,HT)可以诱导HeLa细胞凋亡 .采用Heochst33342荧光染色、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞光度术 (FCM)的方法 ,研究了HT对HeLa细胞凋亡的影响 .利用细胞同步化技术和斑点杂交法研究发现 ,HT影响了HeLa细胞c myc和bcl 2基因的表达并且与细胞周期密切相关 .初步探讨其凋亡诱导的机制 ,认为HT通过在G1和G2 期下调细胞凋亡抑制基因bcl 2的诱导凋亡 ,以及下调c myc癌基因阻滞细胞增殖 ,并延迟凋亡发生 .这些结果对于了解HT的药物作用机制和提高临床化疗疗效具有重要意义 .     

反义基因逆转肿瘤细胞多药耐药性和诱导细胞凋亡的研究

探讨克服肿瘤细胞多药耐药（ＭＤＲ１）性的方法,提高化疗效果。本文采用多药耐药反义基因（ＭＤＲ１－ＲＳＰＳ－ＯＤＮ）逆转Ｋ５６２／ＡＤＭ肿瘤细胞的ＭＤＲ１,诱导肿瘤细胞凋亡,发现ＭＤＲ１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞株细胞产生大量ＤＮＡ断片,ＦＡＣＳ检测发现几乎全部ＭＲＤ＋Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞发生凋亡。其结果表明ＤＭＤＲ１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ能有效、特异地抑制ＭＤＲ１基因表达,逆转肿瘤细胞的ＭＤＲ１,促进阿霉素诱导ＭＤＲ＋１Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞凋亡,为其临床应用提供理论依据     

荔枝核提取物对HepG-2细胞生长抑制及凋亡诱导机制的探讨

目的:探讨荔枝核提取物成分L2.3对人肝癌细胞HepG-2的生长抑制作用及其分子机制.方法:MTT法测定样品对HepG-2细胞的增殖抑制,荧光染色观察细胞凋亡;比色法检测样品对HepG-2中caspase-3、caspase-8和caspase-9活性的影响,流式细胞仪检测并分析Fas蛋白表达的变化.结果:L2.3对HepG-2细胞表现出时间及剂量依赖性增殖抑制活性(P<0.05),其半数抑制质量浓度为43.0 μg/mL;处理组细胞中出现致密浓染亮蓝色凋亡小体.较高质量浓度的L2.3处理细胞后,caspase-3、8、9的活性均呈时间依赖性增高(P<0.01),且Fas蛋白的表达也明显上调(P<0.05).结论:荔枝核提取物L2.3对HepG-2细胞有体外增殖抑制活性,并介导 caspase-3、caspase-8、caspase-9活性改变及Fas蛋白表达的上调,以此诱导细胞凋亡的发生.     

Bcl-2和Caspase-3在HT诱导的HL-60细胞凋亡中的作用

利用常规的HL－60细胞和转染了 bcl－2基因的HL－60/Bcl-2细胞及转染了空载体的对照HL－60／neo细胞为模型,研究Caspase-3及过表达的Bcl-2对凋亡过程中的各种生化,形态学特征的影响,探讨了Caspase-3及Bcl-2在三尖杉酯碱（HT）诱导的HL－60细胞凋亡中的作用,研究表明,Caspase-3的湃化在HT诱导的HL－60细胞凋亡中处于关键地位,导致了质膜出泡,PS翻转,染色质凝集,DNA断裂及凋亡下游的发生,而Bcl-2则通过抑制aspase-3的活化抑制了凋亡的发生,同时还证明,在HT诱导的HL－60细胞凋亡中,通常被认为是凋亡早期特征的磷脂酰丝氨酸PS翻转并不是一个早期特征,它至少晚于Caspase-3的活化,甚至不早于质膜出泡及染色质凝集。     

臭灵丹中HTMF诱导Hep-2细胞凋亡

目的:探讨中药臭灵丹中3,5-二羟基-6,7,3',4'-四甲氧基黄酮(HTMF)诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡的机制.方法:倒置显微镜观察细胞形态变化,Hoechst 33258染色,观察对Hep-2细胞的致凋亡能力;流式细胞仪检测HTMF对Hep-2细胞的凋亡率和线粒体跨膜电位(Δφm)的改变;Western blotting法检测凋亡蛋白caspase-3和caspase-9的变化.结果:倒置显微镜下Hep-2细胞随HTMF浓度加大而变小变圆,细胞存活数随浓度增加而减少.Hoechst 33258染色后高浓度组Hep-2细胞核固缩并出现呈致密浓染蓝白色颗粒状荧光的凋亡小体.流式结果显示HTMF对Hep-2细胞有促凋亡作用并呈明显的量效关系,线粒体跨膜电位(Δφm)随HTMF浓度的增加而下降.Western blotting结果显示HTMF可诱导Hep-2细胞中caspase-3和caspase-9蛋白活化,并呈浓度依赖性关系.结论:HTMF可通过线粒体途径诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡.     

葛根黄酮提取物诱导HL-60细胞凋亡调控研究

用RT-PCR技术和蛋白质免疫印迹技术,检测caspase-8和caspase-3基因转录和蛋白质翻译水平的变化,以探讨葛根黄酮提取物诱导HL-60细胞凋亡的调控途径。结果表明,50μg/mL葛根总黄酮提取物可以上调caspase-8和caspase-3基因转录和蛋白质翻译水平,且其能力分别强于葛根素和大豆甙元单体;说明葛根黄酮提取物诱导HL-60细胞凋亡可能通过经F as死亡受体和/或线粒体途径共同介导执行,葛根黄酮提取物抑制诱导凋亡能力强于葛根素和大豆甙元单体。     

人脐带静脉血管内皮细胞的体外培养及其凋亡的研究

本文从提取生长因子入手，建立人脐带静脉血管内皮细胞系，用电镜进行了细胞鉴定，然后用去除生长因子（FGF和胎牛血清）的方法诱导细胞凋亡，利用荧光显微技术、DNA凝胶电泳、电镜技术和流式细胞分光光度技术，研究了血管内皮细胞凋亡过程中超微结构和细胞周期的变化。发现去除生长因子3h后，在细胞发生明显的DNA片段化和形成凋亡小体的同时，细胞核与细胞质的超微结构发生了明显的变化，S期细胞显著减少，G1期无明显变化，G2细胞显著增多，说明用去除生长因子的方法诱导血管内皮细胞凋亡时，细胞从G2期脱离细胞周期进入凋亡程序，本文的人血管内皮细胞在体外的成功培养和对该细胞凋记的研究对深入研究其凋亡的分子调控机制具有重要的参考价值。     

去除血清诱发细胞凋亡和Bcl—2蛋白的裂解

以过表达原癌基因Bcl-2的HL－60细胞为材料,通过去除血清而诱发凋亡,应用Western blot方法检测细胞凋亡过程中Bcl-2裂解为分子量大约为20kDa的片段,进一步检测Bcl-2的结构变化,结果显示Bcl-2蛋白裂解发生在N端,裂解产物丢失了BH4结构域。通过加入凋亡相关蛋白酶caspase-3抑制剂,可抑制20kDa片段的产生,表明凋亡过程中caspase-3的激活,但细胞生长率测定表明,caspase-3抑制剂并不能阻止去血清诱发的细胞死亡。     

钙调素拮抗剂TFP对BGC-823细胞增殖的影响及其分子机制的探讨

为了进一步探讨钙调素拮抗剂TFP对人胃癌细胞增殖的影响及其分子机制，利用MTT法及流式细胞光度术检测了TFP对细胞增殖的影响，进一步利用western blot的方法对细胞中p16^INK4a和cyclinD的表达水平进行了检测。结果表明：TFP处理可以明显提高BGC－823细胞中p16^INK4a的表达水平，而cyclinD1的水平则明显下降，提示TFP可能通过影响p16^INK4a的表达水平抑制细胞的增殖。     

枯草杆菌原生质体再生前后细胞壁的变化及其对酶渗透性的影响

报道了枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis BF—7658原生质体的制备、再生及其传代后的细胞的电镜观察;酶产量的变化;初步证明经原生质体再生所得到的α——淀粉酶高产菌株,同其细胞壁再生过程及细胞壁的渗透性有着密切关系.     

肥大细胞与针刺信息传递机制研究

我们过去的研究表明,在大鼠皮肤中存在多条纵贯全身的交感物质分布线,在这些线上的毛囊立毛肌上分布着极其丰富的交感肾上腺素能神经末梢[1-2].大鼠全身剃毛后,新生的毛首先在某些部位优先生长出来,形成新生毛线环路系统[1,3-4].针刺或皮内注射药物后会产生立毛运动线,立毛传递线下的皮肤显著充血.这种传递可以在去中枢支配的情况下,独立地沿着交感物质分布线或毛线环路传递,属于邻近毛囊间的连锁或接力传递过程,依赖于通过局部真皮网状层和皮下组织中的神经轴突反射[1,5].     

HL－60细胞分化对动粒蛋白及其基因表达的影响

以人早幼粒白血病细胞ＨＬ－６０为实验材料，用终浓度１μｍｏｌ·Ｌ－１甲酸（ＲＡ）和二甲亚砜（ＤＭＳＯ）分别连续处理细胞６ｄ后，可使ＨＬ－６０细胞按粒系途径定向成熟分化，即表现出核分叶，具有ＮＢＴ还原能力的正常粒细胞的形态和功能特征。利用ＡＣＡ间接免疫荧光方法，观察到在终未分化的细胞核中荧光斑点强度要明显弱于对照细胞。用ＲＮＡＮｏｒｔｈｅｒｎ和斑点杂交方法研究发现，在ＨＬ－６０细胞诱导分化过程中，Ｉｄ，ＣｙｃｌｉｎＢ１基因表达很快受到明显抑制，在终末分化的细胞中已基本被关闭；ＣＥＮＰ－Ｂ基因表达水平也明显降低，但表达变化过程与Ｉｄ和ＣｙｃｌｉｎＢ１基因有所差异。     

STDIn的耐受性研究及其在影响研究中的应用

细胞Ca2+紊乱常常是与氧化应急相关的机体功能异常的基础,诸如心律不齐、局部缺血再灌流、神经变性和缺氧再给氧等.为了深入探讨这些现象产生的机理,大量研究以细胞外产生活性氧(或利用可诱发胞内氧化作用发生的化合物)并采用Ca2+荧光探针来探测细胞内Ca2+的变化.     

邻苯二甲酸二丁酯（DBP）诱导肿瘤细胞凋亡机制的初步研究

邻苯二甲酸二丁酯（DBP）在体外对肺巨细胞癌细胞（PG）和人早幼粒白血病细胞（HL-60）的增殖有明显的抑制作用;经DBP处理过的PG细胞,DNA断裂,在琼脂糖凝胶电泳上呈现出特异的断裂带;流式细胞术分析表明,DBP能提高PG细胞的凋亡率,并且随作用时间的延长而增大;斑点杂交的结构显示,被DBP处理过的HL-60细胞中某些原癌基因、抑癌基因和肿瘤抑制基因的mRNA表达水平都有所下降,这提示DBP对HL-60细胞增殖抑制作用的机制之一可能是通过抑制这些癌基因和突变的抑癌基因的表达来实现的。     

土洋参叶片保卫细胞及其叶绿体发育研究

土洋层各层闪叶片间保卫细胞大小及叶绿体数目差异显著，保卫细胞及其叶绿体随叶片发育而发育，均可分为幼，成，老３时期；顶叶叶片小，保卫细胞较小，保卫细胞中叶绿体较少，中部叶较大，保卫细胞较大，叶绿体较多，基部叶衰教材老萎缩，保卫细胞及叶绿体各减。     

小鼠免疫脾细胞与SP2／0细胞融合的杂交瘤细胞的超微结构研究

对ＳＰ２／０骨髓瘤细胞、免疫脾细胞和由二者融合而分泌抗水貂肠炎病毒（ＭｉｎｋＥｎｔｅｒｔｉｔｉｓＶｉｒｕｓ，ＭＥＶ）单克隆抗体的杂交瘤细胞超微结构进行了研究．经ＭＥＶ免疫的动物的脾细胞糙面内质网发达，细胞质与细胞核的比例增大．贴壁生长的ＳＰ２／０细胞的表面中央为微绒毛集中区，其余部分则遍布皱褶，细胞质中内质网不发达．由ＳＰ２／０细胞和免疫牌细胞融合形成的杂交瘤细胞，表面均匀分布有皱褶，无微绒毛，细胞在贴壁基部周围伸出裙状伪足，扩大了贴壁面积，使细胞贴壁较牢固．本实验还对ＳＰ２／０细胞和杂交瘤细胞的染色体做了计数，二者的平均数分别为６７和９７，在传代培养中染色体有丢失现象．