CCoAOMT基因反义表达载体的构建及转化苎麻的研究

采用RT-PCR的方法,克隆烟草木质素合成关键酶咖啡酰甲基转移酶(CCoAOMT)基因并测序．构建CCoAOMT基因反义表达载体,通过农杆菌介导法对苎麻进行遗传转化,得到转基因植株．采用PCR方法对其进行分子检测．为利用基因工程技术,创造适合我国国情的环保型低木质素苎麻转基因新品种奠定了基础。     

ChsA启动子驱动的IPT基因植物表达载体的构建

为研究异戊烯腺苷类细胞分裂素与花衰老进程的相关性,本研究通过PCR方法从矮牵牛中克隆到花瓣特异性表达的矮牵牛查尔酮合成酶基因A（ChsA）的启动子PchsA,并以其取代植物表达载体pBI121中的组成型启动子CaMV35S,然后将IPT基因插入到PchsA启动子下游,测序结果显示花瓣特异性启动子驱动的IPT植物表达载体构建成功.     

几丁质酶基因在转基因烟草中表达效率的检测

采用氨基葡萄糖法检测转基因烟草植株叶片几丁质酶活力，结果表明几丁质酶基因在转基因植株中酶活力增强，与β—1,3-葡聚糖酶基因的协同作用下酶活性最强，几丁质酶活力的测定对外源基因表达效率的检测是可行的．     

拟南芥同源转换盒基因A21反义RNA基因重组体的构建及转化

A21是拟南芥的一同源转换盒基因,以发育旺盛的组织中高度表达。采用反义RNA技术,将该基因cDNA 5′端自然410bp反向克隆到pTA7002后,构建了可在植物中调控表达A21反义RNA基因片段的重组体。以根癌农杆菌浸渍法将重组体转入拟南芥Landsberg erecta生态型植株中,筛选到转A21反义RNA基因的拟南芥植株。反义基因可在甾类激素诱导下表达出A21的反义RNA。经初步诱导表达,变异性状表现为顶端生长抑制型。     

基因沉默抑制子HC-Pro表达载体的构建

RNA沉默广泛存在于植物等大多数真核生物中,能够防御外源基因的入侵和调控基因表达等.然而,基因沉默抑制子HC-Pro蛋白的具体功能的研究并不十分清楚.本文重点介绍了基因沉默抑制子HC-Pro的表达载体pBI121-HC-Pro的构建及HC-Pro基因在烟草(Nicotiana benthamiana)中的稳定表达.并利用半定量RT-PCR技术检测了目的基因HC-Pro的表达,检测结果表明我们获得了HC-Pro基因稳定表达的转基因烟草株系,为进一步深入研究基因沉默抑制子HC-Pro的功能奠定了实验基础.     

甜菜M14品系Cystatin基因植物蛋白纯化表达载体的构建及转化烟草

植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂是一类具有提高植物对各种生物及非生物胁迫抗逆性的重要蛋白质。利用前期获得的甜菜M14品系半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因的编码区序列构建了带有His标签的甜菜M14品系半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因的植物蛋白纯化表达载体,并将其转化烟草,获得T0代阳性转基因植株,为下一步利用融合蛋白的His标签从转基因烟草中大量纯化甜菜M14品系半胱氨酸蛋白酶抑制剂奠定了基础。     

甜菜BvM14-MADSbox基因启动子的组织特异性表达

MADS - box基因在植物的花器官和各种营养器官中均有不同形式的时空表达模式,行使不同功能.实验室前期获得了甜菜M14品系BvM14 - MADS box基因的特异启动子Pbm,并对其进行了瞬时表达.本试验利用含有重组载体pBI121 - Pbm - GUS的农杆菌转化烟草,对报告基因GUS在转基因烟草各组织表达特...     

竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶的表达载体的构建及重组蛋白抗肿瘤的研究

将经BamHⅠ和HindⅢ酶切的pMD18-T-LAAO和Pet28a(+)质粒的纯化回收产物进行连接,将产物Pet28a(+)-LAAO表达载体转化BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物经Western-blot分析表明,重组蛋白能被兔抗竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶(LAAO)阳性血清所识别.将鼻咽癌CNE-2Z、人宫颈癌LYA01021和卵巢癌A2780MSC细胞悬液接种小鼠建立小鼠实体瘤模型,分别用不同浓度重组蛋白接种荷瘤小鼠,根据瘤重和小鼠存活时间计算抑瘤率和对荷瘤小鼠生命延长率.结果表明:重组蛋白对低、中和高剂量组荷瘤小鼠抑瘤率和生命延长率与阴性对照组均存在极显著差异(P<0.01).本研究为开发利用竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶提供依据,为进一步研制新型的抗肿瘤药物打基础.     

郁金香ACC氧化酶基因RNAi表达载体的构建

为了构建郁金香ACC氧化酶基因的RNAi表达载体.采用Trizol法提取了郁金香花瓣总RNA,根据郁金香ACC氧化酶基因编码区序列,设计了带有限制性内切酶位点的特异性引物,成功地扩增得到了郁金香ACO基因保守片段.将此片段以正向和反向插入到中间载体pBSin内含子的两端,构建成发卡结构的RNA片段,利用pCAMBIA35S-1301作为桥梁载体,构建了带发卡结构的RNAi表达载体pCAMBIA-ACO.     

运用农杆菌介导的瞬时表达体系研究PDS基因沉默

农杆菌介导的瞬时表达体系是一个研究整株植物基因沉默的快速实用系统.本文介绍了运用该系统研究马铃薯X病毒诱导烟草(Nicotiana benthamianan benthamiana)八氢番茄红素脱氢酶(phytoene desaturase,PDS)基因的沉默问题.实验结果表明:携带有与PDS基因同源的409个碱基大小的cDNA片段的重组的马铃薯X病毒载体抑制了内源的PDS基因的表达.     

猪传染性胃肠炎病毒sM基因反义逆转录病毒的包装和鉴定

将编码猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)sM基因的cDNA反向插入逆转录病毒表达载体pLXSN中,质脂体法将重组质粒plxas-sM转染PA317细胞,经抗生素G418(500μg/mL)筛选出稳定的产毒细胞克隆.分别扩大培养细胞克隆,取其上清液感染小鼠成纤维细胞NIH3T3,测定细胞克隆产生的重组病毒滴度,最高达1.50×105CFU/mL.提取重组病毒的RNA进行RT-PCR分析,结果表明成功获得plxas-sM逆转录病毒.     

建设用地地质灾害危险性评估的意义和作用

根据国家有关政策和法规要求,综合阐述了地质灾害危险性评估工作的目的、意义和作用.     

论哈尔滨城市建筑风貌多元化与保护

本文分析了哈尔滨独特的建筑风貌与鲜明个性,阐释了哈尔滨城市建筑风貌多元化形成的原因,并且针对当前历史建筑保护中存在的问题,提出了哈尔滨城市建筑风貌的保护对策。     

茉莉(Tasininan Sumbac A.it)寒害的解剖观察和不同覆盖物对茉莉防寒的初步研究

本文对茉莉寒害进行了解剖观察和不同覆盖物对茉莉防寒的初步研究。研究表明:受寒害的茉莉茎皮层以内的细胞,大多数原生质消失,严重的从形成层处发生断裂,使木质部与韧皮部分离,造成茎中横向运输受阻,同时皮层以内胞间隙增大和胞间隙内的物质变浓,从而可能使细胞对物质的被动转移和渗透增加,即细胞内物质外渗,引起细胞内结冰,细胞器和膜系统遭到破坏,代谢受到严重影响,因而导致细胞死亡。但加盖不同覆盖物后均对茉莉的防寒和安全越冬有良好作用,主要是使细胞内原生质浓度增加,降低了细胞的冰点,减少细胞内外结冰的可能性,使植株的器官和组织能执行正常的生理机能。     

地理专家系统的知识表示与知识库组织

介绍了地理专家系统的知识表示和知识库组织的基本原理和方法,并以水土保持专家系统为例,阐述了水土保持专家知识的分类分级方法,以及在水土保持专家系统中知识表示的基本规则和知识库中专家知识的组织方式.在知识获取机构中,系统提供了以辅助编辑手段为主,自然语言理解为辅的人机交互界面,从而简化了专家知识的录入过程,提高了系统的工作效率.     

铅—桑色素—曲通X—100荧光光度法的研究与应用

本文对铅-桑色素-非离子表面活性剂曲通x-100荧光体系进行了系统研究。结果表明:在曲通x-100存在下,pH3.40-3.60范围内,铅与桑色素形成荧光配合物(λ_ex/λem=426nm/506nm),检出下限为2X10~(-3)μg/ml,铅量在0-16μg/25ml范围内与荧光强度成正比。铅量为0.2μg/ml时,作11次平行测定的相对标准偏差为0.37％,比较了不同表面活性剂及有机溶剂对荧光反应的影响,并对其作用机理作了初步探讨。     

甘肃棘豆属植物的分类及分布

本文研究整理出甘肃棘豆属植物27种、3变种;其中5个种为甘肃分布新记录。提出了分种检索表、每个种的文献及其在本省的产地和分布。     

空间滤波表面电磁散射特性的直线法分析

基于Floquet定理首次将直线法推广应用于空间滤波表面电磁散射特性的分析,从而为空间周期滤波结构电磁散射问题的分析提供了一条新的有效途径.所建模型对于介质层数和单元形状具有很强的适应性.数值例算结果与实验结果很接近,从而验证了方法的正确性.     

烟道灰吸附—化学凝聚法处理毛纺厂印染污水的研究

本文介绍了用烟道灰吸附——化学凝聚法处理毛纺厂印染污水的试验研究。试验取得了所选用工艺中的烟道灰吸附、凝聚等单元过程的适合条件,试验表明,它能去除84～86%的COD_(cr)和95～97%的色度。为毛纺印染污水开辟了一条废治废、旨费低、效率高的有效途径。     

湖南省八大公山自然保护区的珍稀植物及其群落特征

八大公山自然保护区位于湘鄂交界的湘西土家族苗族自治州桑植县境内。自然保护区内植物种类极为丰富,主要有九个植被型。植物区系成分中很多是古老珍稀植物种,且具有多样性及过渡性的特点。