大鼠海马神经元neurobasal无血清的原代培养方法

目的:建立纯度和活力较高的无血清原代培养海马神经元的方法。方法:新生SD大鼠海马,用neuro-basal培养基培养,免疫荧光鉴定神经元纯度,MTT法检测其活力。结果:神经元接种12~24 h后贴壁,并长出细小突起,3 d具有典型神经元形态特征,4 d突起形成稀疏的神经纤维网络,8 d后神经元5~10个聚集成团,突起密集,生长稳定,12 d后出现细胞碎片。Tubulin荧光染色显示清晰的神经元,突起绵长且相互交织,占细胞总数的66.7%;GFAP荧光染色的细胞数量少,突起短粗,占33.7%。培养1~5 d MTT代谢率逐渐上升,6~11 d处于平台期,11 d后下降。结论:neurobasal无血清培养获得的神经元纯度大于60%,6~11 d的细胞适于细胞学实验。     

KCl对Hepa1-6细胞胞内钙离子浓度影响的研究

目的：分析Ka是否会引起Hepal-6细胞胞内钙离子浓度的升高,并解释相关机理。方法：KCl的浓度和负载时间可能会引起细胞内钙离子浓度的不同变化。采用比率荧光成像系统检测Hepal-6细胞的胞内钙离子浓度。结果：（1）在即时检测组中,与对照组相比,10、30、50mmol／L的Ka分别引起胞内钙离子浓度的显著升高（p〈0．05）,但各组别之间无显著差异。（2）在0．5h延迟检测组中,与对照组相比,10、30、50mmol／L的KCl分别引起胞内钙离子浓度的显著升高（p〈0．05）并且各组别之间无显著差异。此外,即时检测组与延迟检测组的结果没有显著差异。结论：10mmol／L的KCl足以引起Hepal-6细胞胞内钙离子浓度即时的显著上升。无论在即时检测组还是0．5h延迟检测组,各组别之间无显著差异。这表明当胞内的钙离子浓度上升到一定值,Ka对于胞内钙离子浓度的影响不会随其浓度的变化而发生改变。     

10-HDA对原代培养大鼠海马神经元增殖的研究

研究10-HDA对原代培养新生大鼠海马神经元的增殖效果.原代培养24 h的新生大鼠海马神经元,通过添加不同浓度的10-HDA(0.1 μmol/L、1.0 μmol/L、10 μmol/L)作用后,利用BrdU免疫荧光染色检测神经细胞增殖,尼氏染色观察神经元数量的变化.结果显示中剂量浓度(1.0 μmol/L)的10-HDA作用海马神经元24h后,细胞数量明显增多;而高浓度(10 μmol/L)10-HDA作用海马神经元24 h后,细胞数量明显低于正常对照组和低剂量组(0.1 μmol/L).BrdU免疫荧光染色表明,中剂量浓度的10-HDA可使细胞增殖,增殖率达到(19.37±2.192 1)%.尼氏染色结果表明,10-HDA使海马神经元数量增加了(20.31±4.086 5)%.研究结果表明,10-HDA对原代培养的海马神经元有增殖作用.     

管壁内表面疵病的光电检测方法研究

管壁内表面疵病的光电检测方法研究孙传东陈良益（中国科学院西安光学精密机械研究所７１００６８）随着能源、化工、城市建设、水利等行业的快速发展，对各种管壁内表面进行检测有着重要的意义，而光电技术为实现管壁质量的无损、高速、自动化检测提供了先进的技术手段。...     

大鼠原代肝细胞的标记和移植方法

探讨CM-DiI标记大鼠原代肝细胞的最佳浓度、细胞的移植量和移植途径.采用原位胶原酶灌注和密度梯度离心法分离、纯化大鼠肝细胞,用不同浓度CM-DiI进行标记,筛选出CM-DiI的最佳标记浓度,分别从门静脉、尾静脉移植到2/3肝切除0h大鼠,对细胞移植36h后的肝组织石蜡切片和冰冻切片分别进行免疫组织化学分析和荧光观察.结果显示,4μmol·mL-1浓度的CM-DiI和肝细胞孵育5min,细胞标记率高达95%.每克大鼠残肝移植0.8mL的细胞悬液(107个·mL-1)和0.2,0.4,0.6mL移植后检测到的标记细胞数目相比有显著性差异(P0.01),经肝门静脉移植后可以检测到的标记细胞数比尾静脉多(P0.01).CM-DiI标记大鼠原代肝细胞的最佳浓度为4μmol·mL-1,标记细胞的最佳移植量为每克大鼠残肝移植0.8mL的细胞悬液(107个·mL-1)、最佳移植途径为经肝门静脉移植.     

新生大鼠心肌细胞原代培养方法的改进

探讨更为简单的SD大鼠心肌细胞原代培养的方法,使分离的心肌细胞达到理想的存活率和纯度,为临床应用建立心肌细胞模型.取出生24 h内SD大鼠的左心室,剪碎、消化、分离和纯化,进行培养,0.1 g/L胰酶消化,可以分离到形态完整、贴壁生长的心肌细胞.进一步通过离心、差速贴壁和化学试剂抑制非心肌细胞生长,纯化得到95%以上的心肌细胞.成功建立了心肌细胞体外培养模型,获得了高纯度的心肌细胞.     

实验大鼠肺支原体ELISA检测方法的建立

报告了实验大鼠肺支原体感染ELISA检测方法的研究。抗原包被量在0.5μg/ml,酶结合物1:16000稀释时,P/N值最大。波长在492时O.D值随抗原和抗体浓度不同而呈现有规律的变化。阳性血清稀释至1:1280时,P/N值仍在阳性范围之内。与常规的分离培养方法相比较,ELISA的阳性检出率高,且阳性血清的ELISA阻断率均大于50％。重复测定,实验结果的再现性好。以上结果说明所建立的ELISA方法,其敏感性、特异性和重复性均好。在所检测的130只普通级大鼠中,抗体阳性率达91％。另外还发现在实验大鼠中还存在关节支原体的感染,且一般与肺支原体以混合感染的形式存在。在清洁级大鼠中未见这两种支原体的感染。     

17β-雌二醇对大鼠海马神经元钙离子水平的快速影响

探讨了17β-雌二醇(17β-E2)对体外培养大鼠海马神经元细胞内钙离子水平([Ca~(2+)]i)的快速影响及其可能的机制.大鼠海马神经元体外培养8~10 d,用Fluo 4-AM钙离子荧光探针负载胞内Ca~(2+),用激光共聚焦显微镜动态检测了17β-E2对谷氨酸诱导的神经元内Ca~(2+)荧光强度的影响.结果显示:17β-E2(10 nmol·L~(-1))处理30 min,对正常状态下神经元的[Ca~(2+)]i无显著影响,但可快速促进谷氨酸诱导的[Ca~(2+)]i增加(与对照组相比,P0.001),雌激素受体阻断剂ICI182780(10μmol·L~(-1))预处理可阻断17β-E2的这一促进作用;胞外信号调节激酶(ERKs)抑制剂U0126(10μmol·L~(-1))单独处理神经元,可极显著抑制谷氨酸诱导的[Ca~(2+)]i增加(P0.001),但这一作用可以被17β-E2部分逆转.研究结果提示,ERKs信号通路可能参与谷氨酸诱导的神经元[Ca~(2+)]i增加,17β-E2可能经雌激素受体介导的ERKs信号通路快速促进谷氨酸诱导的神经元[Ca~(2+)]i增加.     

15 － KETE 对大鼠肺动脉平滑肌细胞钙离子浓度的影响

摘要: 目的探讨15-KETE 对大鼠肺动脉平滑肌细胞内Ca2 + 的作用及其来源。方法以酶法( 胶原酶Ⅰ型和弹性 酶) 分离培养原代大鼠肺动脉平滑肌细胞,将细胞稀释所需密度( 2 × 105 个/mL) ,加样于6 孔板中的盖玻片上,放 入37℃孵箱中培养12 h,细胞贴壁后,取出6 孔板中的盖玻片,放入特制的小槽内,D-Hanks 液冲洗细胞3 次,加入 1 × 10 － 5mol /L 的Flou-3 /AM,置37℃孵箱中避光孵育约30 min,用D-Hanks 液洗去细胞外残留染料,应用激光扫描 共聚焦显微镜技术,测定了15-KETE 对大鼠肺动脉平滑肌细胞游离钙离子浓度的影响。结果1) 15-KETE ( 1 × 10 － 8-1 × 10 － 6 ) mol /L 可依赖性引起肺动脉平滑肌细胞内钙离子浓度( ［Ca2 +］i) 增加; 2) 1 × 10 － 6 mol /L 维拉米( L-型钙离子通道阻断剂) 和无钙离子细胞外液显著阻抑了1 × 10 － 6 mol /L 15-KETE 引起肺动脉平滑肌［Ca2 +］i 增 加。结论15-KETE 可引起大鼠肺动脉平滑肌［Ca2 +］i 增加,并且此钙来源于细胞外液钙离子。     

人脐静脉内皮细胞原代培养方法的建立

目的：探索并建立人脐静脉内皮细胞（删Ⅶc）体外稳定培养的方法。方法：以1％Ⅱ型胶原酶消化收集人脐静脉内皮细胞，用嘲加10％的胎牛血清进行培养，免疫细胞化学方法鉴定内皮细胞。结果：原代培养的内皮细胞镜下呈典型的铺路石或者鹅卵石样排列，3～4d时生长最快。5d左右融合；免疫细胞化学染色显示内皮细胞Ⅷ因子相关抗原表达阳性。结论：酶消化法获得的原代血管内皮细胞有较高的存活率，可以作为基础和临床研究的良好模型。     

一种石蜡组织块转制透射电镜标本的方法

介绍一种将石蜡组织块通过简单的处理转制成透射电镜树脂包埋块的方法，并结合实践对透射电镜样品制作过程中的一些问题进行了讨论。对改制样品的电镜观察显示，组织和细胞的超微结构能够完整保留，电镜下图像清晰，可以满足病理诊断和病程鉴定之用。     

正交频分复用系统中采用离散导频的频偏估计方法

针对采用正交频分复用(OFDM)调制的欧洲数字电视地面广播系统，提出了采用离散导频的载波频偏估计方法。将接收信号中的离散导频与接收机本地生成的离散导频进行相关运算，由相关峰值的偏移量求得整数倍载波频偏，由相关峰值的相位求得每个符号的绝对相位偏转量，再由相邻两个符号的绝对相位偏转量之差求得单个符号时间间隔内的相位偏转，从而得到小数倍载波频偏。仿真结果表明，与传统的采用连续导频的载波频偏估计方法相比，在高斯白噪声信道和慢衰落信道下，采用离散导频的载波频偏估计方法的性能有明显的提高；在快衰落信道中性能则稍差，但仍然保持在系统性能允许的误差范围之内。将离散导频用于载波频偏估计可以提高系统的频谱利用率。     

异丙醇与聚乙烯基吡略烷酮混合溶液中氧浓度的测定

利用循环伏安技术测定电化学活性物质微量浓度的方法测定了4种混合液(空气饱和的异丙醇与0.05 g/cm3 PVP(聚乙烯基吡咯烷酮)的混合溶液、空气饱和水、0.001 mol/L C11 H12 FeO的水溶液以及0.001 mol/L C11 H12 FeO在异丙醇与0.05 g/cm3 PVP的混合物中的溶液)中氧的溶解度.推算出氧在异丙醇与0.05 g/cm3 PVP的混合溶液中的饱和浓度为6.8×103 mol/L.依照电化学活性物质的浓度与峰电流之间的线性关系,绘制了异丙醇与0.05 g/cm3 PVP的混合溶液中溶解氧浓度与氧还原峰电流之间的关系曲线.     

异丙醇与聚乙烯基吡咯烷酮混合溶液中氧浓度的测定

利用循环伏安技术测定电化学活性物质微量浓度的方法测定了4种混合液(空气饱和的异丙醇与0.05 g/cm3PVP(聚乙烯基吡咯烷酮)的混合溶液、空气饱和水、0.001 mol/L C11H12FeO的水溶液以及0.001 mol/L C11H12FeO在异丙醇与0.05 g/cm3PVP的混合物中的溶液)中氧的溶解度.推算出氧在异丙醇与0.05 g/cm3PVP的混合溶液中的饱和浓度为6.8×103mol/L.依照电化学活性物质的浓度与峰电流之间的线性关系,绘制了异丙醇与0.05 g/cm3PVP的混合溶液中溶解氧浓度与氧还原峰电流之间的关系曲线.     

采用互补信息熵的分类器集成差异性度量方法

针对多分类器系统差异性评价中无法直接处理模糊数据的问题,提出了一种采用互补信息熵的分类器集成差异性度量(CIE)方法。首先利用训练数据生成一系列基分类器,并对测试数据进行分类,将分类结果依次组合生成分类数据空间;然后采用模糊关系条件下的互补信息熵度量分类数据空间蕴含的不确定信息量,据此信息量判断基分类器间的差异性;最后以加入基分类器后数据空间差异性增加为选择分类器的基本准则,构建集成分类器系统,用于验证CIE差异性度量与集成分类精度之间的关系。实验结果表明,与Q统计方法相比,利用CIE方法进行分类器集成,平均集成分类精度提高了2.03%,分类器系统集成规模降低约17%,而且提高了集成系统处理多样化数据的能力。     

动态系统正实性的一种判定方法

给出了线性定常连续（离散）系统｛ｘ（ｔ）＝Ａｘ（ｔ）＋Ｂｕ（ｔ） ｙ（ｔ）＝Ｃｘ（ｔ）＋Ｄｕ（ｔ）为正实的一个新的充要条件。     

以(NH_4)_2A为代表的两性物质溶液中[H~+]的计算方法

对(NH4)2A为代表的多元弱酸弱碱盐溶液中[H+]的求法作了介绍,介绍了利用分布分数近似处理的简便方法。     

容量法测定铁离子浓度的一种方法

本文通过比较分析，提出了一种新的测定铁离子浓度的容量分析方法。即以锌丝代替氯化亚锡，避免了使用剧毒的氯化汞，减少了对人体的危害和对环境的污染，而且提高了测定结果的准确度。     

一种新型的构建CRISPR/Cas9 KnockOut载体的方法

利用CRISPR/Cas9系统这一基于细菌核酸酶Cas9的新型基因编辑工具,可以在原核细胞和真核细胞中实现基因敲除的功能.首先使用CRISPR设计工具设计靶点,退火来制备sgRNA双链,用Bsm BⅠ酶切割gRNA质粒,构建Lenti CRISPRv2的重组质粒.通过U6启动子上的LKO1.5引物对每个菌落序列进行了测序验证,结果表明利用此新方法可以成功构建CRISPR/Cas9系统的Knock Out载体.     

测量被动成像系统光学散焦的一种新方法

提出了一种测量被动成像系统光学散焦的新方法．不必测定光学系统的内部参数，只要改变成像镜头的光圈系数，对同一景物获取两幅不同散焦程度的数字图像，采用频域约束的最小二乘法，从离焦光学系统所成的两幅光学散焦图像中，就可计算出反应散焦变化的传递函数．对该方法进行了较详细的数学推导，得到了一些实验结果．