抗伊氏锥虫单克隆抗体的研究——二 、用McAb直接斑点法检测伊氏锥虫抗原的实验研究

抗伊氏锥虫糖蛋白的单克隆抗体ⅡG_6标记过氧化物酶后,用于直接法斑点试验检测血清中伊氏锥虫(T.e.)抗原,36份感染2—4d的鼠血清全部呈阳性反应;12份正常鼠血清全部呈阴性反应.上述结果表明本方法具有较好的敏感性和特异性.ⅡGMcAb Dot ELISA检测结果显示血中伊氏锥虫密度与抗原滴度呈正相关.该法操作简便易行,不需特殊设备.肉眼即可观察结果.本次实验研究将为现场应用提供快速诊断的重要依据.     

抗伊氏锥虫单克隆抗体的研究——三、应用酶标单抗ELlSA竞争法检测抗T.e.抗体的实验研究

应用酶标单抗(HRP-MCAbⅡG_6)ELISA竞争法对7只感染伊氏锥虫的家兔血清进行了检测,结果表明该法具有特异、敏感、快速等优点.与间接ELISA检测结果相比呈现明显的正相关,两种方法检测相符合,因此本法可作为流行病学调查和血清学诊断的工具.     

分泌抗弓形虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用弓形虫可溶性抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠,取脾细胞,与Ｓｐ２／０ 细胞融合,获得３ 株能稳定分泌抗弓形虫单克隆抗体的细胞。细胞培养上清液和腹水中的单克隆抗体效价分别为１∶１６ ～２５６ 和１０ － ６ ～１０ － ７ 。单抗类型均为ＩｇＭ。杂交瘤细胞经液氮冻存１２ 个月后,复苏生长良好,分泌活性稳定。在ＭｃＡｂ－ Ｄｏｔ－ ＥＬＩＳＡ 实验中,所能测出可溶性抗原的最小浓度为１０ ｎｇ／ ｍＬ     

流行我国马牛的三个伊氏锥虫株的研究 ——Ⅱ.伊氏锥虫多态现象

首次报导流行我国马牛的伊氏锥虫株存在多态现象,描述了一种称作变异型(vartantform)的新形态.经过小鼠的连续传代和涂片以及单克隆接种小鼠的观察,证明这种变异型个体在流行我国的伊氏锥虫株中是一种正常的形态.     

抗促黄体激素单克隆抗体的研制 Ⅰ杂交瘤细胞株的建立

用促黄体激素(LH)为抗原免疫BALB/C小鼠,通过免疫小鼠脾细胞和SP_2/0小鼠骨髓瘤细胞的融合,产生分泌抗LH单克隆抗体(McAbs)的杂交瘤细胞。用ELISA法检测融合细胞培养上清,从195份检样中测出两份能与LH抗原起反应。对该2孔杂交瘤细胞进行亚克隆和扩大培养。经体外四个月传代培养及液氮冻存后复苏培养。仍保持分泌抗LH的McAbs的能力,所建立的二株杂交瘤细胞命名为AL—01和AL—02。给予注液体石蜡的BALB/C小鼠注入该二种细胞,均能诱生腹水。用ELISA法测腹水抗体,效价分别为10~(-6)以上和10~(-5)以上。通过染色体组型分析,确认AL—01和AL—02皆为杂交瘤细胞。     

抗孕酮单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

应用自制的结合抗原孕酮—BSA,免疫Balb/c小鼠,取其脾脏细胞与SP_2/0骨髓瘤细胞进行二次融合、共384孔、杂交瘤细胞102孔,融合率为25.26％,其中15个阳性孔、占10.7％,获得PE_7 PG_4两个阳性分泌细胞株。经四次克隆冻存多批,保存七个月后,其抗体效价稳定。经载体取代实验,证明单克隆抗体仅对黄体酮起反应;对BSA呈阴性反应。单抗对雌二醇无交叉反应。     

抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备研究

从影响融合率的2个主要因素探讨骨髓瘤细胞系Sp2/0细胞与黄曲霉毒素B_1免疫的脾细胞融合的最佳条件,使融合率达到100%.经筛选和克隆化,获得3株稳定分泌单克隆抗体的细胞株,分别命名为3B3、3H9、5G9.经过鉴定3株均为IgG_1亚类.其中3B3抗体与其他黄曲霉毒素几乎不发生交叉反应,腹水效价为1∶2×10~5,亲和力常数为3.1×10~7 L/mol,竞争性ELISA测出3B3抗体的最低反应浓度为0.05μg/L标准AFB_1样品的的回收率达96%.另外两株腹水抗体水平低,交叉反应强烈,腹水效价仅在1∶10~4数量级.     

抗家蚕抗菌肽单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

首次报道了抗家蚕抗菌肽（一种小分子多肽）单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立．用ＦＰＬＣ纯化家蚕抗菌肽（ＡＢＰ）获得了电泳一条带的均一样品；将它与辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）偶联，以此偶联物免疫ＢＡＬＢ／Ｃ鼠．以抗菌肽—牛血清白蛋白（ＡＢＰ－ＢＳＡ）做包被物ＥＬＩＳＡ筛选出５个阳性杂交瘤细胞株，冻存复苏后得到三个稳定分泌抗体的阳性细胞株，抗体ＩｇＧ亚型为ＩｇＧ２ａ．统计了杂交瘤的染色体数     

《抗伊氏锥虫单克隆抗体的研究》通过鉴定

江西省科学院受江西省科委的委托,于1991年12月27日为院属微生物研究所承担的省一级重点科研课题《抗伊氏锥虫单克隆抗体的研究》召开了成果鉴定会。与会专家们经一天的认真评审,一致认为,该项研究选题准确,实验设计合理,技术指标全面,数据可信,结果正确,达到了国内单克隆抗体应用研究的先进水平。专家们一致同意该项研究通过鉴定。     

抗基因工程人rIFN-γ杂交瘤细胞株的建立

用杂交瘤技术将基因工程人γ－干扰素（ｒＩＦＮ－γ）免疫的Ｂ淋巴细胞与ｓｐ２／０鼠骨髓瘤细胞融合，建立了 ３株抗 ｒＩＦＮ－γ杂交瘤细胞株。这些细胞株经两年多的传代培养仍保持稳定分泌抗体的能力，并与ｒＩＦＮ－γ及新型γ－干扰素呈特异性反应，可用于亲和层析纯化γ－干扰素．     

分泌抗人IgA单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

1975年K(?)hler和Milstein成功地建立的杂交瘤方法对免疫学的发展产生巨大影响,并且促使抗体成为研究复杂的大分子(如酶、血型糖旦自等)和测定具有重要生理意义的微量物质(如激素、血管活性多肽、cAMP、前列腺素等)的分析工具,目前,在临床医学和基础研究方面杂交瘤细胞的运用发展非常迅速,首先可望用单克隆抗体代替常规的多价抗血清     

分泌抗人IgA单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

1975年Kohler和Milstein成功地建立的杂交瘤方法对免疫学的发展产生巨大影响,并且促使抗体成为研究复杂的大分子(如酶、血型糖旦白等)和测定具有重要生理意义的微量物质(如激素、血管活性多肽、cAMP、前列腺素等)的分析工具,目前,在临床医学和基础研究方面杂交瘤细胞的运用发展非常迅速,首先可望用单克隆抗体代替常规的多价抗血清作为通用试剂.鉴于人的各类Ig是运用极其广泛的试剂,作者在马里兰州Biotech Research     

抗鱼卵透明带单克隆抗体淋巴细胞杂交瘤的建立及初步鉴定

详细介绍了抗鱼（花鲢Anstichthysnobilis）卵透明带单克隆抗体淋巴细胞杂交瘤的制备及鉴定方法，用佛氏佐剂乳化热溶花鲢鱼卵透明带，然后免疫雌性BALB／C小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤Sp2／0融合产生杂交瘤，经3次再克隆后，用间接ELISA方法筛选出一株抗鱼卵透明带的单克隆抗体杂交瘤，经免疫双扩散试验测得该种单克隆抗体为IgG1，经过染色体检查知其染色体数目在86～108之间，为93.6±3.81，杂交瘤细胞染色体经检查发现有中间和亚中着丝点染色体，符合杂交细胞染色体特征。     

抗Der p 2单克隆抗体细胞株的建立与鉴定

目的:建立Der p 2(屋尘螨Ⅱ类变应原)杂交瘤细胞株,并对其分泌的Der p 2单克隆抗体进行鉴定.方法:用重组Der p 2蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选和3次克隆化,制备出单克隆抗体.采用间接ELISA法、Western blot法确定单克隆抗体的免疫球蛋白的类型和亚类、相对亲和力、特异性,对单克隆抗体进行鉴定.结果:获得3株能稳定分泌高效价Der p 2单克隆抗体的杂交瘤细胞株,1B6为IgG1类,1G11、4B1为IgG2a类.间接ELISA法检测细胞上清效价为104~105,腹水效价为105~106.Westernblot试验证明3株单抗与Der p 2蛋白均有特异性反应.结论:成功制备了3株抗Der p 2的单克隆抗体,均具有良好的特异性和亲和力,为进一步建立Der p 2蛋白检测和纯化的方法奠定了基础.     

抗人体乳腺癌单克隆抗体6C_6杂交瘤细胞株的建立

用乳腺癌患者的原发瘤组织制备的细胞膜抗原免疫BALB/C小鼠,取致敏脾脏细胞与SP_(2/0)骨髓瘤细胞融合。融合率为42％,经克隆化培养后得到一株分泌抗人体乳腺癌单克隆抗体杂交瘤细胞,命名为6C_6。其分泌的抗体和乳腺癌细胞系MCF-7呈阳性反应,与其它5种人癌细胞系,1种人正常细胞系及4种鼠类肿瘤细胞系呈阴性反应。免疫组织化学实验表明:6C_6单克隆抗体(简称6C_6McAb)与乳腺癌的反应多呈阳性(30/36),与7例正常乳腺均呈阴性反应。6C_6McAb类别为IgC_1。其抗体经ZetaPrep大容量离子交换圆盘纯化,对乳腺癌原发瘤组织仍具有较高的活性。     

抗促黄体激素单克隆抗体的研制：Ⅱ单克隆抗体的纯化及特性鉴定

在建立六株稳定分泌抗促黄体激素(LH)单克隆抗体的杂交瘤细胞株后,用羟基磷灰石(HAP)吸附层折技术从小鼠特异腹水中一步纯化抗LH单克隆抗体,抗体纯度可达85％—90％,在纯化抗体的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)图谱上基本显示IgG一条带,每ml腹水回收IgG量为3.6mg,并保留大部分抗体活性。特性鉴定结果表明,在六种抗体LH单克隆抗体中,AL-02和AL-06两种抗体与促卵泡激素(FSH)不产生交叉反应,是抗LH-β亚单位上的抗原决定簇的:其它四种抗体与FSH产生完全的交叉反应,是抗LH-α亚单位上抗原决定簇的。用測定抗体与抗原相对结合力的方法估算了四种抗LH单克隆抗体的相对亲和力,结果是AL-01抗体相对亲和力提高,其后依次是AL-03,AL-04和AL-02抗体。     

抗牛免疫缺陷病毒（BIV）穿膜蛋白gp45杂交瘤细胞株的建立

编码牛免疫缺陷病毒（ＢＩＶ）穿膜蛋白的一个４００ｂｐ的基因片断被克隆到ｐＡＴＨ表达载体上，此 重组的融合蛋白ＴｒｐＥ－Ｅｎｖ８在大肠杆菌中得到高效表达，而且包含有与ＢＩＶ抗体特异性反应的抗原决定簇。我们用此融合蛋白免疫ｂａｌｂ／ｃ小鼠得到与ＢＩＶ穿膜蛋白特异性反应的杂交瘤。此单克隆抗体在蛋白印迹法分析中与重组的ＴｒｐＥ－Ｅｎｖ８有特异性反应，用免疫酶染色法可检测ＢＩＶ在体外的复制。