PCR检测结核杆菌343例

ＰＣＲ检测结核杆菌３４３例．阳性６９例，阳性率２０．１１％．ＰＣＲ技术具有高度的敏感性和特异性．能检测结核杆菌培养阴性及涂片阴性的结核病患者．对ｘ线检查阴性患者也有一定的阳性率．     

基因治疗及其研究进展情况

本文综述了基因治疗的步骤,基因治疗的对象及基因治疗的现状及前景。基因治疗的步骤包括基因诊断;治疗基因与载体的连接;基因转移。其中载体是基因治疗中的一个重大关键技术问题。目前基因治疗已进入理性化阶段,世界上许多国家对基因治疗前景看好,投资加强。     

PCR在胃癌基因诊断中的价值

胃癌的发生与年龄、性别、经济状况、卫生水平及人口居住密度、烟酒嗜好、环境危险因素等有关 尽管胃癌病因相当复杂 ,但这些因素最终都在不同阶段作用于不同基因 ,引起相关基因表达水平的改变 这些基因共同作用 ,最终导致胃癌的发生、发展 现代分子生物学研究表明 ,人类基因组约由 10万左右的不同基因组成 ,这些基因的选择性表达决定了机体整个生命过程 ,基因表达的变化处于控制生物学调节机制的中心位置 因此 ,研究胃癌在不同发展阶段的基因表达变化 ,不仅有助于阐明胃癌的发病机理 ,而且还能为进一步开展胃癌的基因诊断和基因治疗提供重要的理论依据     

前列腺特异性膜抗原RNA探针的制备

从前列腺癌细胞系LNCaP中提取总RNA，经RT－PCR扩增前列腺特异性膜抗原（PSM）靶序列，将其定向插入带T7RNA聚合酶启动子的pSPORT1质粒，转入大肠杆菌DH5α，经蓝白斑筛选获得重组质粒，以此重组质粒线性化DNA为模板，以地高辛标记的rUTP及其他三种rNTP为底物，经T7RNA聚合酶体外转录，成功地制备了地高辛标记的PSM特异性RNA探针，为研究以PSM为分子生物学指标的前列腺癌分期诊断奠定了基础。     

应用聚合酶链反应检测血清中结核杆菌DNA的探讨

应用聚合酶链技术对89例肺部病人血清中结核杆菌DNA进行检测。结果表明PCR-TB-DNA检出率为72％。其中78例确诊为肺结核的病人的检出率为83％。由此可见血清PCR-TB-DNA有较高的应用价值。     

铁线蕨根茎醇提取物对耐利福平结核杆菌的影响

研究中草药铁线蕨根茎的醇提取物(ACVE)对耐利福平结核杆菌(RRP-TB)细胞的抑制活性。铁线蕨饮片经粉碎、浸提、超速离心、减压浓缩、冷冻干燥得ACVE。RRP-TB细胞经ACVE处理不同时间后,以MTT法测ACVE对RRP-TB细胞代谢活性的影响,以细胞记数法观察ACVE对RRP-TB细胞增殖的影响。(1) 用RRP-TB经ACVE处理1 wk和2 wk后,A592光吸收分别降为对照组的9.64%和1.45%;(2)处理3 wk和5 wk时,RRP-TB细胞数降到对照组的25.65和15.2 %;(3)经ACVE处理1 wk后,在更换为正常培养基进行恢复培养过程中,RRP-TB细胞数呈现缓慢增长。结论:ACVE能降低RRP-TB细胞的代谢活性,抑制其增殖。     

结核杆菌原发耐药间隔五年对比分析

目的 :探讨归口管理对原发耐药菌的影响。方法 :回顾分析 1994- 1995年度与 1998- 1999年度结核杆菌原发耐药情况。结果 :1998- 1999年度原发耐药率较 1994- 1995年度明显下降。结论 :我院通过五年归口管理 ,降低了原发耐药菌的比例 ,但仍需进一步加强归口管理力度 ,从而有效控制原发耐药菌的发生。     

视网膜色素变性家系遗传分析及基因诊断

通过对一常染色体显性视刚膜色素变性(RP)家系的连锁分析.发现致病基因与RP4连锁,进一步对RHO基因的突变检测,发现RHO的Pro347Leu突变是该家系的遗传基础,运用该结果对家系中2个年幼个体进行了基因诊断,和其他RHO突变引起的RP病人相比.该家系具有发病年龄早,部分成员伴发白内障的独特症状.     

指示剂法快速检测结核杆菌耐药试验的探讨

结核杆菌快速耐药试验方法学的研究，是结核病细菌学急待解决的问题。国内经典的检测方法都存在着各自的优缺点，而未能改变现行改良罗氏培养耐药试验方法[1]。因此我们探讨用指示剂快速检测结核杆菌耐药试验的方法。1材料与方法1．12％B指示剂1．2含药培养基以舒通培养基为基础，制成液体培养基，经103．43KPa，75％乙醇处理后，15分钟高压灭菌加入药物，然后分装于15mm×10mm小试管中，每管吸1．0ml，其中药物含量：SM：100μg／ml10μg／mlINH：10μg／ml1μg／mlPAS：10μg／ml1μg／ml25μg／ml5μg／mlKM：50μg／ml10μg／mlEM…     

浅析基因诊断对运动员猝死的早期诊断和预防价值

运动员猝死是运动医学研究的重要内容。研究证明其主要由心源性及脑源性疾病所引起,但与普通人群相比具有一定的差异性和隐蔽性,常规方法不易早期诊断。基因诊断技术从基因水平进行分析,对疾病的诊断具有高特异性、灵敏性和早期诊断性,对运动员猝死的早期诊断和预防具有一定的价值。     

结核分枝杆菌的免疫机制及抗原研究进展

结核分枝杆菌是一种胞内病原苗，在抗结核分枝杆菌感染中，活菌疫苗中的分泌蛋白起主要的免疫保护作用，它们激活宿主Ｔ细胞介导的细胞免疫，影响宿主免疫保护与病菌耐受性之间的不稳定平衡，决定宿主是否得病．结核分枝杆菌的特异性和保护性抗原的筛选为结核病的快速诊断及新型疫苗构建打下基础．     

结核分枝杆菌特异性抗原的N末端氨基酸序列分析

把ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析抗原抗体反应的高度特异性与ＰＶＤＦ膜作为载体进行蛋白质氨基酸序列分析的高度敏感性相结合对结核分枝菌的特异性抗原表位刊物筛选和分析鉴定,获得了一个分子质量为３１ｋｕ,Ｎ末端为ＡｌａＧｌｕＶａｌＡｓｐＬｅｕＶａｌＰｈｅＡｌａＶａｌＳｅｒＴｒｐＰｒｏＶａｌＧｌｙ的结核分枝杆菌抗原。     

结核分枝杆菌培养滤液蛋白CFP10的表达、纯化和鉴定

克隆结核分枝杆菌培养滤液蛋白CFP10基因,并在大肠杆菌中进行表达和纯化。用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组扩增出CFP10基因片段,克隆至pMD18-T载体中,序列测定正确后,将其亚克隆到表达载体pGEX-4T-1并在大肠杆菌BL21中表达,表达蛋白经SDS-PAG及Western-blot分析后,亲和层析法纯化蛋白。成功克隆了CFP10基因,并对其在E.coli中进行了表达,SDS-PAGE及Western blot分析表明表达产物正确。通过GST纯化系统获得36kD纯化蛋白,与文献报道相符,该蛋白可与CFP10 mAb特异结合,并且同时与活动期结核病人血清发生反应。成功获得了纯化的CFP10蛋白,为进一步研究CFP10蛋白的致病机理提供了实验依据。     

结核分枝杆菌对感染小鼠肺泡巨噬细胞转铁蛋白受体和铁蛋白表达的影响

探讨不同毒力结核分枝杆菌感染对小鼠肺泡巨噬细胞转铁蛋白受体(TfR)和铁蛋白(Fn)表达的影响及其时相性变化。利用制备的卡介苗(以下简称BCG)和结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株(以下简称H37Rv株)悬液,分别经小鼠尾静脉注射,建立各组小鼠感染模型,各组小鼠感染模型建立成功后,分别于第1、3、5、7、9、11、13、15天,进行各组小鼠肺泡灌洗,收集小鼠肺泡灌洗液,获取各组小鼠肺泡巨噬细胞。应用ELISA方法和Western blot技术检测各组小鼠肺泡巨噬细胞TfR和Fn的表达。利用ELISA方法检测各组小鼠肺泡巨噬细胞TfR的表达结果显示:H37RV组与BCG组小鼠肺泡巨噬细胞TfR表达均高于空白对照组,在感染第7、9、11天差异最明显,具有统计学意义(P0.05)。利用Western blot技术检测各组小鼠肺泡巨噬细胞TfR表达结果显示:于模型建成后第7、9、11天,H37RN组、BCG组、空白对照组三组之间差异有统计学意义(P0.05)。用ELISA方法和Western blot技术检测各组小鼠肺泡巨噬细胞内Fn表达结果显示:于模型建成后第7、9、11天,H37RV组与BCG组的小鼠肺泡巨噬细胞内Fn表达量明显减低,并且于第7天时表达量最第,异有统计学意义(P0.05)。结核分枝杆菌感染小鼠,导致小鼠肺泡巨噬细胞TfR的表达增高,而Fn的表达降低。不同毒力的结核杆菌感染后Fn蛋白表达差异并不明显,而不同毒力的结核杆菌感染后TfR蛋白的表达有差异性。     

BOG初次免疫联合结核分枝杆菌Ag85A DNA疫苗加强免疫效果的研究

为探讨BCG初次免疫,结核分枝杆菌Ag85A DNA疫苗加强免疫的序贯免疫策略对小鼠的免疫效果。采用BCG及结核分枝杆菌Ag85A DNA疫苗依次免疫小鼠,在末次免疫后的4、6、8周通过检测小鼠血清总IgG抗体、特异性淋巴细胞增殖．细胞因子的水平,观测BCG初次免疫,Ag85A DNA疫苗加强免疫的策略对小鼠的免疫效果。结果显示,采用BCG初次免疫,结核分枝杆菌Ag85A DNA疫苗加强免疫的策略组的小鼠与其它免疫方式组相比,IgG明显升高（P〈0．05）、特异性淋巴细胞明显增殖、IFN7、IL-2、IL-4水平明显增高（P〈0．05）。由此可知,在采用BCG初次免疫,结核分枝杆菌Ag85A DNA疫苗加强的免疫策略后,能增强对小鼠的免疫效应,尤其是Thl型细胞免疫反应增强明显,为进一步在动物体内进行保护性效应试验的研究提供了实验依据。     

结核杆菌ESAT-6基因疫苗对结核杆菌感染小鼠的免疫保护效果研究

为研究结核杆菌ESAT-6基因疫苗的免疫原性及对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果,将雌性C57BL／6N小鼠32只,随机分为4组,即结核杆菌ESAT-6基因疫苗组、BCG组、pcDNA3．1（＋）组和PBS组。取小鼠脾细胞培养上清检测细胞因子水平;并按效靶比例分别为100：1、50：1、10：1进行CIL杀伤活性检测。用结核杆菌H37Rv国际标准强毒株静脉注射攻击小鼠,计数肺和脾组织中的结核杆菌菌落数,对小鼠部分肺和脾组织作病理切片,HE染色观察组织病变程度,Z—N染色检查抗酸杆菌,观察陔疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。结果表明,结核杆菌ESAT-6基因疫苗对小鼠结核杆菌感染有一定的免疫保护效果,可诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,细胞因子IFN-γ和IL-1分泌增加,IL-4分泌减少,CTL特异件活性增加;使小鼠肺和脾组织中的结核杆菌菌落数较空载体组显著减少,组织病变明显减轻。     

ICP-AES比较临床分离药物敏感和耐药结核分枝杆菌的金属离子

利用现在多元素痕量分析最重要的方法——电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP—AES)分析结核分枝杆菌中的金属离子的种类和含量,结果表明,Cr^3 ,Al^3 ,Ca^2 ,Fe^2 ,Mn^2 ,Co^2 ,Cu^2 ,Ni^2 的含量较高,并发现药物敏感菌株和耐药菌株之间在金属离子种类和含量上有明显区别．这种差异在耐药中的意义有待进一步研究．     

结核疫苗研究进展

目的:回顾卡介苗(BCG)的应用情况,介绍关于结核疫苗研究进展的最新信息。方法:查阅大量关于结核疫苗研究的最近几年的文献。结果:有多种抗结核疫苗正在研究中,例如卡介苗、结核活疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗以及转基因植物疫苗等。结论:BCG仍是目前唯一可应用的抗结核疫苗,但是许多新疫苗己在动物模型中显示出潜力并开始进入临床试验。     

中药抗结核分支杆菌研究

目的探讨中药在抗结核分支杆菌中的作用.方法总结目前国内外抗结核分支杆菌的中药种类及研究进展.结果与结论猫爪草等中草药具有明显的抗结核分支杆菌的作用.     

结核杆菌Ag85B的表达纯化

为构建抗结核病新型疫苗，以结核杆菌标准毒力株H37Rv DNA为模板，用PCR法克隆抗原85B的编码基因，将该基因重组到表达型质粒pQE30中，表达的His6 Tag-Ag85B融合蛋白分子质量约32ku，用亲和层析一步法纯化的重组蛋白纯度好，得率高，为进一步的免疫研究创造了条件。