苦瓜籽中抗真菌蛋白MAP13的分离纯化与表征

将苦瓜籽粗提液分别经阴离子色谱柱、阳离子色谱柱交换后,得到一个具有抗真菌活性的蛋白MAP13.该蛋白经鉴定达到电泳纯,相对分子量为12.7 kDa.经还原剂处理后,电泳结果表明该蛋白由分子量分别为7和6 kDa的两个亚基组成,亚基之间通过二硫键连接.体外抑菌实验表明该蛋白对苹果轮纹病菌、瓜果腐霉病菌和棉花枯萎病菌具有较强的抑制作用.     

苦瓜籽中脂肪酸的分离鉴定与比较

用浸泡和回流两种不同的方法来提取苦瓜籽中的粗脂肪并比较两种方式对脂肪酸提取的影响，发现回流对脂肪酸的提取是更为有效的方式，将粗脂肪经过皂化、酯化得脂肪酸及脂肪酸甲酯，用气相色谱分离分析脂肪酸及其甲酯，比较产物谱图发现在脂肪酸图谱上低沸点的脂肪酸含量较高，与脂肪酸甲脂的图谱有较大差异性，色质联用分析得到各脂肪酸与其甲脂的分布情况，证实甲酯定量脂肪酸的做法有待改进，结果表明不同种类的苦瓜籽所含脂肪酸种类几乎一样，都存在大量不饱和脂肪酸，但含量有差异。     

苦瓜籽核糖体失活蛋白的基本性质研究

采用 Affi- Gel亲和层析和 Sephacryl S- 10 0分子筛层析等方法获得苦瓜籽核糖体失活蛋白 (RIP) ,经 SDS- PAGE,PAGE,IEF和 PAS方法分析均表明为单一蛋白着色带或单一糖蛋白着色带 .根据 SDS- PAGE测得表观分子量为 30 0 0 0 ,经 IEF- PAGE结果计算其 PI为 9.0 ,对无细胞系统中蛋白质生物合成抑制活性明显 ,其 IC50 为 5.3× 10 -10 mol/ L左右 .体外生物活性试验结果表明其对人肝癌细胞 ,Vero,SP2 / 0 ,3T3,Kb,Navana,S- 180等肿瘤细胞株和麻疹病毒均表现有不同程度的抑制作用 ,而对完整人胚肺二倍体细胞却毒性极小 .     

苦瓜籽核糖体失活蛋白的基本性质研究

经硫酸铵分级沉淀、SP-Sepharose FF离子交换层析、Blue Sepharose CL-6B亲和层析和Superdex 75分子筛层析从苦瓜籽中纯化出苦瓜核糖体失活蛋白.纯化的蛋白经IEF、梯度PAGE、SDS-PAGE和Periodate-Schiff分析均为单一蛋白着色带或单一糖蛋白着色带.根据SDS-PAGE计算其相对分子量为3.0×104 Da,IEF显示其pI为9.0.N端测序结果为Asp-Val-Ser-Phe-Arg.采用傅里叶变换红外光谱(FTIR)和圆二色谱(CD谱)对纯化RI     

黑豆中抗真菌蛋白的纯化及活性鉴定

利用硫酸铵分级沉降、亲和色谱Affi-gel和离子交换色谱SP-Toyopearl从黑豆种子中分离出一种抗菌蛋白,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定达到电泳纯.利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳标准蛋白迁移率与分子量对数的关系,计算出该抗菌蛋白的分子量为93.3 kDa,还原和非还原状态下均显示单一区带,说明该抗真菌蛋白为单倍体蛋白.抑菌试验结果表明,此纯化的蛋白对植物致病菌瓜果腐霉病菌、棉花枯萎病菌、苹果轮纹病菌、葡萄灰霉病菌和菜豆根腐病菌等5种真菌的生长具有不同的抑制作用.     

慈菇中抗真菌蛋白分离纯化初步研究

植物在长期进化过程中,形成了一套天然的防御系统。其中植物抗真菌蛋白(antifungal protein,AFP)是主要成员之一,它对多种植物和人体病原真菌生长有抑制作用。本研究以慈菇(Sagittaria sagittifolia)块茎为材料,运用阳离子交换层析和葡聚糖G50凝胶过滤层析技术,结合活性追踪法,对慈菇中的抗真菌蛋白进行了初步分离纯化。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定表明,纯化的抗真菌蛋白并不是单一的组分,至少有3个电泳条带,分子量集中在14.4~20.1 kD之间。纯化的抗真菌蛋白对烟草赤星病菌(Alternari alternata)的菌丝生长具有较明显抑制作用。     

胡萝卜籽抗氧化肽的分离纯化及活性研究

采用凝胶过滤色谱Sephadex G-50和反相高效液相色谱对胡萝卜籽中的抗氧化肽进行分离纯化.以DPPH自由基(2,2-二苯基-1-苦肼基)清除率为指标,测定多肽的抗氧化活性.采用电喷雾电离质谱法测定该多肽的相对分子质量.研究结果表明:经过分离纯化,得到一个具有较强抗氧化活性的多肽,在质量浓度为1 mg·m L-1时,其DPPH自由基清除活力达到(92.02±0.47)%,相对分子质量为339.3 u,由3个氨基酸残基组成.     

章鱼内脏胰蛋白酶抑制剂的分离纯化与性质研究

通过热处理、硫酸铵盐析、膜超滤及SP-Sepharose 离子交换层析,从章鱼内脏中纯化得到一种胰蛋白酶抑制剂 (Octopus Trypsin Inhibitor ,OTI)．Tricine-SDS-PAGE 电泳结果显示,OTI的分子质量约为6500 u．性质分析结果表明:OTI在pH=1.0~11.0缓冲液中孵育30 min,抑制活性稳定;在100 ℃下加热1 h、2 h 后仍分别具有90% 和65% 的抑制活性,具有良好的pH值稳定性和热稳定性;OTI能够显著抑制胰蛋白酶的活性,对胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶几乎无抑制活性;OTI能够有效抑制蓝圆鲹肌肉中肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶 (MBSP) 引起的肌球蛋白降解．     

中药苍术抗真菌作用的研究及临床观察

目的 研究苍术抗真菌作用。方法 苍术浸膏实验室抑菌实验临床验证。结果 苍术对浅部真菌抑真菌效果良好。结论 苍术可作为外用药剂型应用于临床。     

草鱼胰蛋白酶的分离纯化及性质研究

从草鱼肝胰脏中分离纯化出一种胰蛋白酶．纯化过程包括：硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sephamse离子交换,Sephacryl S-200凝胶过滤和Q-Sepharose离子交换层析．SDS-PAGE显示在分子量约为28．5ku处有单一电泳带,表明该酶已得到高度纯化．以Boc-Leu-Arg-Arg-MCA为底物测得该酶的最适温度为40℃．最适pH值为9．0．丝氨酸蛋白酶抑制剂（Pefabloc SC,PMSF,Benzamidine）对该酶的活力有明显抑制作用．底物特异性实验表明该酶特异性分解精氨酸和赖氨酸残基的C末端,进一步证明纯化蛋白为草鱼胰蛋白酶,其酶学性质与鲤鱼胰蛋白酶相似．     

大豆（G．max）胰蛋白酶抑制剂SBTi－A_2新类型Ti~x的纯化及其性质研究

用丙酮脱脂、稀酸处理、硫酸铵盐析和ＤＥＡＥ－５２纤维素柱层析等方法从大豆（Ｇ．ｍａｘ）中分离纯化得一种新类型胰蛋白酶抑制剂Ｔｉｘ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示Ｔｉｘ与已知的大豆蛋白酶抑制剂Ｔｉａ的相对分子质量均为２１０００，且Ｎ－末端均为ＡｓＰ；亲和电泳分析显示Ｔｉｘ与Ｔｉａ均可与胰蛋白酶完全结合；ＢＡＥＥ法测定显示出Ｔｉｘ对胰蛋白酶活性的抑制略小于Ｔｉａ；两者经ＣＮＢｒ裂解后电泳分析得到相同带型；纯化样品的氨基酸组成分析显示Ｔｉｘ比Ｔｉａ多了两个碱性氨基酸，因而Ｔｉｘ带有更多的正电荷．研究结果初步证明Ｔｉｘ是Ｋｕｎｉｔｚ类型中一种新的胰蛋白酶抑制剂．     

单扫描极谱法测定瓜子中痕量铅的研究

提出单扫描极谱法测定瓜子中痕量铅的新方法.在6%溴化钾、1%酒石酸钾钠、0.7%盐酸、5%磷酸、2%盐酸羟胺、3%(体积)三乙醇胺混合底液中,以单扫描极谱法对瓜子中痕量铅进行了测定.实验表明,铅在滴汞电极上于-0.47 V(相对饱和甘汞电极)处产生一灵敏催化极谱波,铅浓度在0.2 ng/mL~300 ng/mL范围内与极谱峰电流有良好分段线性关系.检出限为0.16 ng/mL.方法的RSD为2.2%~4.2%,加标回收率为89%~99%.此法仪器试剂简单,操作快速简便,用于实际样品测定,结果满意.     

Isolation of a novel antifungal peptide from the bark of Eucommia ulmoides Oliv

A novel Eucommia antifungal peptide, named EAFP3, was isolated from the bark of Eucommia ul- moides by NaC1 extract, gel filtration and reverse phase high performance liquid chromatography. The molecular mass of EAFP3 is 4157.3 Da, and its partial amino acid sequence is -. LYQQLIAGITLNK.-. EAFP3 exerts an inhibitory activity against Candida albicans in vitro and the drug concentration required for 50% growth inhibition （IC50） is 31.25μg/mL.     

猪胰脏胰蛋白酶抑制剂的分离鉴定和性质研究

本文报告用CM和DEAE纤维素离子交换层析从猪胰脏分离出对胰蛋白酶有特异性抑制作用的抑制剂。对该抑制剂的热稳定性,抑制作用的pH范围,分子量及氦基酸组成等进行了分析研究。     

半夏中一种抗癌蛋白的纯化及其抗癌活性研究

经硫酸铵分级沉淀、疏水层析和DEAE离子交换层析3种方法从新鲜半夏块茎中分离纯化出一种具抗肿瘤作用的蛋白,命名为APPT,用MTT法、载瘤小鼠实验和流式细胞术研究其抗肿瘤作用.结果显示:APPT是一种分子量大小为12.09 ku的糖蛋白,其含糖量为3.22％;MTT实验结果表明APPT对Sarcoma 180细胞有一定的细胞毒性,同时载瘤小鼠实验证明APPT能明显抑制载瘤小鼠中肿瘤的生长,当APPT处理剂量为0.85 mg/kg、2.30 mg/kg及3.25 mg/kg体重时,其抑制率分别为15.6％、32.1％、36.2％;流式细胞仪结果显示APPT不能诱导Sarcoma 180细胞凋亡,却能抑制Sarcoma 180细胞DNA的合成起始并将大量细胞同步于G0/G1期.表明APPT是半夏总蛋白中具有抑癌活性的成分之一,APPT通过抑制肿瘤细胞DNA合成的起始进而阻止肿瘤细胞增殖而不是诱导细胞凋亡.