“中花11”水稻谷蛋白Gt1基因克隆及蜡质基因启动子引导Gt1基因表达载体的构建

谷蛋白含量及分布对水稻营养品质起着至关重要的作用．利用PCR技术从“中花11”水稻基因组成功克隆到谷蛋白Gt1基因,再分别以PCR技术和限制酶酶切从p13W。载体上获得水稻蜡质基因（Waxy）启动子、第一内含子和NOS终止子,并以pCAMBIA1301双元载体为骨架,成功构建了由Waxy启动子引导的水稻Gt1基因表达载体,为今后利用转基因技术改良水稻稻米营养品质奠定了基础．     

一个烟草PR-1a启动子的克隆及序列分析

通过PCR扩增，从烟草Nicotiana tabacum cv Samsun中克隆了水杨酸诱导表达的病程相关蛋白PR-la基因的启动子TP12，以期用于构建诱导表达基因敲除系统，并用于无性繁殖植物的无标记基因转化。启动子的克隆产物经正反两向测序后，拼接分析结果表明，扩增得到的PR-1α基因启动子长1313个碱基，序列富含AT，其中A T占71．67％，与已报道的序列比较，核苷酸的相似性为98．6％。     

水稻花粉Profilin基因启动子的克隆及序列分析

作者使用两次染色体步移（Genome walking)法，从灿稻（Oryza sativa subsp.indica)IR36中克隆到长度为569bp的花粉proiflin基因的启动子片段，并进行了全序列测定和分析。结果表明：在该段序列中含有3个TATA box，3个CAAT box和2个G－box。通过EPD（The Eukaryotic Promoter Database)的比较发现，序列的＋2－-71区域与番茄（Lycopersicon esculentum)花粉特异基因LAT52，向日葵（Helianthus annuus)花药特异基因SF2启动子关键序列的同源性为50％左右。     

水稻花粉特异性启动子的克隆与表达

利用PCR技术,从水稻幼苗总DNA中扩增并克隆了一段DNA片段。将该片段与报告基因GUS基因融合,构成植物表达载体。经农杆菌转化烟草萌发花粉,共培养约24h后,作瞬时表达检测。结果表明,该克隆片段具有启动子功能。DNA序列分析表明,该克隆片段长度为526bp,含有TATA盒及CAAT盒。与原基因（PSI）启动子序列比较,同源性为52％。部分顺式调控元件相同。     

大豆11S球蛋白基因Gy1启动子克隆及序列分析

以高蛋白大豆品种南农87C-38总DNA为模板,采用PCR法扩增获得约1100bp大小的DNA片段,回收该片段并克隆到puCm-T载体上,选取阳性克隆进行PCR和酶切检测,再进行测序分析.序列分析显示该片段含1174个核苷酸,采用Vector NTI软件将试验中克隆的序列与GenBank E07850报道的Gy1启动子和GenBank X15121报道的Gy1启动子及信号肽对应序列分别进行比对,同源性分别为99.6%和99.3%.确定该片断为南农87C-38大豆11S球蛋白基因Gy1启动子及信号肽.该启动子的成功克隆,可为今后利用基因工程技术改良大豆种子营养品质研究奠定基础.     

水稻nmads 1基因的序列测定与结构分析

用PCR对6个水稻基因组BAC克隆进行了筛选，得到了水稻nmads1基因2933bp的序列，通过与mmads1基因的cDNA序列比较，发现nmads1基因含6个内含子和6个外显子，5′非编码区有2个TATA盒及1个Car G类似序列。     

甘蓝型油菜Toc33基因启动子的克隆及序列分析

叶绿体是植物细胞中重要的细胞器,大部分叶绿体蛋白质都是由核基因组编码,在细胞质中合成分子量较大的前体蛋白,转运至叶绿体实施其功能．TOC33／TOC34是叶绿体上发现的一个外膜蛋白转运器构件蛋白,它与TOC159、TOC75和TOC64相互作用,构成了叶绿体外被膜上的一个蛋白转运器．目前已从豌豆（Pisumsa tizrurn）、拟南芥（Arabidopsis thaliana）、玉米（Zea mays）、小立碗藓（Physcomitrella patens）、诸葛菜（Orychophragmus violaceus）和油菜（Brassica napus）克隆到TOC33或TOC34的cDNA或DNA的编码区．与其功能研究相比,Toc33基因的表达调控研究较少,该基因5’端调控区域的克隆及序列分析均未见报道．为此,在本实验室已经克隆到甘蓝型油菜Toc33基因编码区的基础上,采用单引物PCR方法进行染色体步移,克隆出Toc33基因的启动子,为进一步研究Toc33基因的转录调控机制奠定基础．     

枯草杆菌强基因启动子DNA片段的序列分析

对利用基因启动子探针型载体ｐＳＵＰＶ２,从枯草杆菌ＡＳ１．３９８中克隆３个稳定的具有强启动功能的ＤＮＡ片段,进行限制酶切分析发现,ｐＢＳＵ２２和ｐＢＳＵ４３中的插入片段小于０．２ｋｂ,ｐＢＳＵ４４中的插入片段为３ｋｂ。测定结果表明,３个插入片段中都有较为典型的原核生物基因启动子序列,其中ｐＢＳＵ２２和ｐＢＳＵ４３的插入序列几乎完全相同。２     

根癌土壤农杆菌Ti质粒毒性区VirD1基因的克隆及序列分析

根据U．Washington报导的根癌土壤农杆菌(Agribacterium tumefaciens)C58Ti质粒基因序列，设计1对引物，利用PCR的方法扩增了c58根癌土壤农杆菌Ti质粒毒性区VirD1基因。通过琼脂糖凝胶电泳，所得E1的片段略小于500bp，与引物设计跨幅片段476bp相吻合。将此片段连接到T载体，经蓝白斑筛选、PCR鉴定、测序及DNA序列分析，结果表明：克隆VirD1基因编码序列与报导的序列同源性达100％，说明通过PCR方法获得的VirD1基因片段是正确的，为进一步研究该基因的表达和活性奠定了基础。     

水稻花药特异表达基因启动子的扩增及克隆

采用ＤＮＡ聚合酶链式反应扩增技术，以水稻黄化苗总ＤＮＡ为模板成功地扩增到水稻花约特异表达基因扇动２子Ｏｓｇ６Ｂ的７７０ｂｐ和９６０ｂｐ两个片段Ｏｓｇ６Ｂａ和Ｏｓｇ６Ｂｂ。并将其克隆到ｐＵＣ１８上形成完整的Ｏｓｇ６Ｂ，这为通过基因工程方法进行水稻杂种优势利用奠定了基础。     

Molecular evolution of rice S 5 n and functional comparison among different sequences

The wide compatibility gene, S ₅ ⁿ , can overcome embryo sac sterility between indica and japonica subspecies of rice. Therefore, it is very important to characterize the features of the S ₅ ⁿ sequence to reveal the origin and evolution of S ₅ ⁿ . In this paper, 26 cultivated rice haplotypes and 22 wild rice accessions harboring S ₅ ⁿ were used to sequence S ₅ ⁿ . The results showed that 15 genotypes among the 48 materials were fully consistent with control cultivar 02428 (CK). The other 33 accessions had different degrees of variation in the S ₅ ⁿ sequence. Variations in the coding region mainly occurred in the second exon and eight materials showed a 10-bp deletion at 1710?C1719 bp, including wild (O. nivara) and cultivated rice, such as IRW501 and Yuetai B. S ₅ ⁿ sequences were not biased and evolved neutrally. The 48 materials could be divided into 4 categories using a phylogenetic tree of the amino acid sequences. Most of the wild rice clustered together, and the cultivated rice clustered into another group. Eight cultivated rice and O. nivara (wild rice) clustered in another group, which were found to lack 10 consecutive bases in exon 2. Eight rice varieties with high numbers of differences in their S ₅ ⁿ coding regions were crossed with testers (typically indica and japonica) to produced test cross F₁ populations. The F₁s were examined for their ability to overcome indica-japonica hybrid sterility. The result showed that the embryo sac fertility of S ₅ ⁿ -containing hybrids increased significantly compared with control hybrids, but there were no differences among the materials with divergent sequences, indirectly proving that S ₅ ⁿ is a non-functional gene.     

不同直链淀粉含量水稻籽粒淀粉积累及其相关酶的活性变化研究

以4个不同直链淀粉(AC)含量水稻品种为研究材料,研究籽粒淀粉积累规律及其相关酶的活性变化,并分析了两者之间的相关性.结果表明直链淀粉积累速率、支链淀粉积累速率、颗粒结合型淀粉合成酶(GBSS)和可溶性淀粉合成酶(SSS)活性均呈单峰曲线变化.所有水稻品种直链淀粉含量在花后5～15 d增幅最大;支链淀粉含量在花后5～20 d有一个极显著增加的过程,B6优4761增幅最大.Logistic方程拟合淀粉积累过程发现,直链淀粉积累量的高低主要取决于最大积累速率的高低,而最大积累速率出现的早晚和活跃积累天数的长短决定了支链淀粉积累量的高低.高AC含量品种菲优188直链淀粉积累量、积累速率及GBSS活性最大值显著大于其它水稻品种;糯稻品种成糯88在花后15 d的支链淀粉积累量和积累速率最大,但其籽粒SSS活性较低.灌浆后期,高AC含量品种菲优188的籽粒千粒重明显大于其余水稻品种.相关分析表明,所有水稻品种籽粒淀粉积累速率均与GBSS、SSS活性呈正相关,说明籽粒淀粉积累量的高低还受到GBSS和SSS活性的影响.     

水稻Os05g0442400基因启动子分析以及由Os05g0442400基因启动子引导GUS报告基因在转基因水稻中的表达

采用Plant CARE和PLACE软件分析预测水稻Os05g0442400基因启动子序列中可能存在的顺式作用元件.结果显示,在起始密码子ATG上游1500bp区域内,除了启动子基本的核心作用元件外,还存在一些与植物抵御非生物胁迫过程有关的作用元件、脱落酸应答元件、光诱导启动子作用元件、病原菌诱发因子作用元件,以及根特异性结合位点.采用根癌农杆菌介导法成功将Os05g0442400 promoter::gus构建导入"中花11"水稻.由不同组织部位GUS染液检测表明:在水稻苗期,内源Os05g0442400基因可能主要在根部表达;随着水稻生殖期的延续,水稻内源Os05g0442400基因在颖壳中的表达区域由上向下面积增大,并在抽穗后达到最大表达区域.这些结果可能与Os05g0442400基因启动子上分别存在根特异性结合位点和光诱导启动子作用元件具有一定的联系.     

不同因子对绞股蓝培养细胞的总皂甙和总黄酮影响的初步分析

不同光照条件对绞股蓝培养细胞的总皂甙含量无显著影响,在光照条件下总黄酮含量较黑暗条件下高．在蔗糖30g／L、葡萄糖40g／L时,总皂甙和总黄酮的含量最高．琼脂糖浓度0．1％时,最有利于总皂甙和总黄酮的积累．     

水稻突变体B1-24的细胞学观察及其激素调控

以半矮化水稻突变体B1-24及其野生型惠阳珍珠早(Hyz)幼苗为材料,探究其细胞学特征及其对激素的响应.在光下生长的B1-24幼苗比Hyz矮14.62%,第一真叶长度短11.18%,黄化苗植株的中胚轴长度增长41.89%,但Hyz的胚芽鞘长度比之长28.71%.细胞学观察发现,与野生型相比,突变体第一真叶叶片细胞长度和宽度都无显著差异.B1-24黄化苗的胚芽鞘细胞长度仅为Hyz的45.95%,而中胚轴细胞长度是其118.28%.B1-24对激素GA3(600 μg/ml)和IAA(7 μg/ml)的处理敏感,其细胞长度显著增长,植株表型更接近Hyz.而50 μg/mL PAC处理使其严重缩短.推测B1-24的半矮化突变可能与激素合成或响应有关     

略论异译经在佛典校勘方面的作用 ——以《起世经》及其异译为例

以《起世经》及其异译为例，从衍文、误文、脱文三个方面举证30例，尝试说明可以利用并译经对汉文佛典进行校勘，并指出在此过程中需要注意的一些问题。     

不同温度培养对根癌农杆菌生长及水稻幼胚再生的影响

设计26,30,34,36,38,40℃6个温度对根癌农杆菌进行培养.结果显示:根癌农杆菌在38℃和40℃条件下无法生长;将水稻幼胚经26℃诱导获得的愈伤组织分别放置在农杆茵不能耐受的38℃和40℃环境中培养.并设计了7,14,21,28d不同培养时间,同时以26℃常规培养温度作为对照,分析在较高温度条件下培养对水稻愈伤组织再生的影响.结果显示:水稻幼胚诱导的愈伤组织经过38℃所有时间及40℃部分时间(7,14d)下模拟抗性筛选培养,仍然能够正常生长,而且经38℃、14d继代培养的愈伤组织植株再生率比26℃常规培养提高63.17%,统计分析两者达显著差异.     

种植转Bt水稻对固氦细菌多样性和固氮酶铁蛋白基因nifH的水平转移的影响

通过对具有不同种植年限和不同种植强度的转Bt基因水稻与非转Bt基因水稻土壤中的细菌以及固氮细菌群落结构进行研究,发现转Bt水稻的种植可能会影响土壤中微生物群落的多样性,但是这种影响的可能只是暂时的,通过对测量种植水稻的芽长实验也得出相似的结论．另外,根据16SrDNA基因构建的系统发育进化树揭示了本实验分离的固氮细菌的遗传多样性,发现实验土壤中的固氮细菌主要分为放线菌门（Actinobacteria）（92％）和α-变形菌门（α-Pro—teobacteria）两大类．分离出的8株典型的固氮菌株,其16SrDNA基因和固氮基因nifH的序列两者的分布不一致,nifH的分布更为紧凑,为固氮基因可能发生了原位水平基因转移提供了证据．