细胞内的“骨架”

如果说生命是一种非常神奇的现象,那么,细胞便是成就生命的载体,那么又是什么成就了细胞呢? 细胞本身就是一个复杂的社会,功能不同的众多分子承担着数不胜数的生命活动,即使一个最简单的细胞也比迄今功能最强大的计算机精巧得多.有些细胞里发展出了膜性结构,把进行相关生命活动的分子集中在一个膜泡里,这就形成了细胞器.细胞器是细胞质中具有一定结构和功能的微结构,组成了细胞的基本结构,使细胞能正常地工作、运转,主要有细胞核(负责遗传信息的储存和表达)、内质网(负责蛋白质和脂质的合成)、高尔基体(负责蛋白质的修饰和糖类的合成)和溶酶体(负责无用分子的消化)等等.细胞核是最大的细胞器,科学家根据细胞内是否发展出细胞核,将细胞分为原核细胞和真核细胞.真核细胞内有细胞核,原核细胞则没有.     

基因组复杂性进化的能量学

所有复杂生命体都是由真核细胞构成的。真核细胞从原核细胞进化而来在40亿年漫长历史过程中仅发生了一次,否则原核细胞将不能表现出演化出更高复杂性的趋势。这是因为,原核细胞基因组的规模受到     

生物膜与细胞进化

1、引言当今地球上存在的生物,从其微观结构上来讲包括前细胞生物、原核细胞和真核细胞。这反映了生物由简单到复杂,由低级到高级的演化方向。但是,无论是从现存的有机体还是绝灭的有机体化石中至今还未找到它们之间的过渡类型。由前细胞生物到真核细胞的演化过程中出现了两个明显的进化间断。生物微观结构演化的关键一环就是细胞膜或生物膜是如何产生的?真核细胞的膜相细胞器,尤其是具有双层生物膜的细胞核、线粒体及质体等是怎样起源的?所以,由前细胞到原核细胞再到真核细胞各阶段的演化     

小麦幼苗离体核转录活性的研究

目前,对于真核细胞尤其是植物细胞基因表达过程中的DNA复制、RNA转录以及细胞质和细胞外诸因子对它们的调节、控制,特别是与生长发育之间的联系了解的都是很不够的。其原因之一是受到了细胞核分离技术的限制。例如,在研究细胞核和细胞质专一相互作用时,其中一种方法是要分离出具有启动和合成完整RNA分子能力的活性细胞核,并且不能有细胞质成分对体外基因表达系统的污染。而在实践中,这样一种理想的体外基因表达系     

拟南芥翻译延伸因子EF1A的亚细胞定位研究

探讨了拟南芥的翻译延伸因子EF1A的亚细胞定位.以Col野生型拟南芥的cDNA为模板,通过高保真KOD扩增酶获得2 363bp的拟南芥转录延伸因子EF1A基因片段,将其与GFP融合后共同连入p1300表达载体,利用农杆菌侵染法将p35S∶GFP和p35S∶EF1A∶∶GFP转入野生型拟南芥中,观察转基因植物细胞中GFP的表达情况.结果显示:p35S∶GFP转基因植物中,细胞核中GFP荧光强度显著高于细胞质中荧光强度,但是在p35S∶EF1A∶∶GFP转基因植物中,细胞核中荧光强度与细胞质中荧光强度无显著差异,说明在进行蛋白翻译时细胞质中的EF1A含量显著高于细胞核中,这也为翻译延伸因子EF1A的亚细胞定位提供了实验依据.     

如何让停工"信使"蛋白体复工——谈健康精子生成机制

在精子细胞演变为精子的过程中,随着精子变形和细胞核的压缩,细胞核内的基因转录活动将完全停止,而后期精子细胞发育所需的基因需要提前转录为信使核糖核酸(mRNA),并以抑制状态储存于精子细胞,直至特定发育阶段再被选择性地激活翻译,合成蛋白质发挥生物学功能[1].这个现象就是精子形成过程中经典的"转录—翻译解偶联"事件,但如...     

BCR/ABL和SEA双基因重组载体的构建和表达

目的:构建和表达含BCR/ABL融合基因和葡萄球菌肠毒素A(SEA)的真核双表达质粒.方法:利用RT-PCR技术从K562细胞中扩增出含BCR/ABL融合位点基因片段,提取金黄色葡萄球菌基因组DNA扩增出SEA基因,分别将两基因片段连在pIRES载体的多克隆位点A和B上,构建BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA- pIRES-BCR/ABL重组质粒.将重组质粒转染K293细胞,RT-PCR鉴定重组质粒在真核细胞的转录情况, SDS-PAGE电泳鉴定目的蛋白在真核细胞的表达.结果:成功扩增出BCR/ABL和 SEA基因片段;双酶切鉴定BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA-pIRES-BCR/ABL重组质粒中含有BCR/ABL和SEA基因,测序证实完全正确;将重组质粒转染K293细胞后,经 RT-PCR扩增鉴定,插入到重组质粒的BCR/ABL和SEA基因能在真核细胞正常转录,经SDS-PAGE电泳鉴定重组质粒能够在真核细胞中表达BCR/ABL和SEA蛋白.结论:成功构建BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA-pIRES-BCR/ABL真核双表达质粒,可在真核细胞中正常转录并表达BCR/ABL和SEA蛋白.     

蛋白翻译后SUMO化修饰在动脉粥样硬化中的作用与机制

动脉粥样硬化是过程复杂的慢性炎症性疾病,涉及内皮激活、内皮功能障碍和局部炎症反应等多个关键病理步骤.小分子类泛素修饰因子(small ubiquitin-like modifier,SUMO)化修饰是真核细胞中常见的较新发现的蛋白翻译后修饰,参与多种细胞进程生物学事件,如DNA的转录活性细胞增殖分化、蛋白质的稳定性和定位细胞凋亡以及细胞信号转导等.近期研究发现, SUMO化在动脉粥样硬化发生发展的多个环节中起到重要的调控作用.针对动脉粥样硬化上述几个过程中涉及的蛋白翻译后SUMO化修饰对病程发展的调控作用及其机制的研究现状作一综述.     

癌基因C-jun及其缺失突变体过表达细胞株的构建与鉴定

为了探究转录因子C-jun在细胞中的生理功能,以真核细胞表达质粒pFlag-c-jun为模板,首先设计了C-jun DNA结合功能域缺失突变体的点突变引物序列,构建Flag-C-jun DNA结合功能域缺失突变体质粒pFlag-c-jun~(mut).通过细胞转染、药物筛选等方法,获得Flag-C-jun和Flag-C-jun~(mut)稳定表达的HelaS细胞株,用蛋白印记迹交和细胞免疫荧光染色方法对细胞株进行验证.鉴定结果表明,本研究成功构建了Flag-C-jun和Flag-C-jun~(mut)稳定表达的细胞株,且表达均在细胞核内.     

降解精对苯二甲酸生产废水特化菌株性能测定

将黄孢原毛平革真菌（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ,ＰＣ）真核细胞与ＹＺＩ土著细胞原核细胞的原生质体进行融合,构建而成Ｆｈｈ融合子;再将Ｆｈｈ与酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ,Ｙ９９）真菌真核细胞的原生质体进行融合,构建而成Ｆｈｈｈ融合子。Ｆｈｈ与Ｆｈｈｈ是跨真核原核两界细胞的两株融合子,对制霉菌素和链霉素同时存在抗性,孢子和菌丝形态均不同于ＰＣ菌。     

RIG-G基因在酵母双杂交后的蛋白互作验证

RIG－G基因是利用全反式维甲酸（ATRA）诱导，采用差异显示PCR方法从APL细胞系NB4中克隆到的一个新基因。采用酶母双杂交的方法筛到了与RIG－G发生相互作用的JAB1。由于在酵母这种低等真核细胞中缺少诸如高等真核细胞中各种保证蛋白正常生物学功能发挥所必需的翻译后修饰，这种方法筛到的阳性克隆并不一定代表了真实的作用，所以在COS7细胞中采用了CO－IP（co-immunoprecipitation）实验，间接法、直接法均证实了这种相互作用。     

eIF4E在肿瘤进展及靶向治疗中的研究进展

翻译调节细胞生长、分化和存活,翻译失调在细胞恶变及肿瘤进展中发挥重要的作用。帽翻译起始主要由真核细胞翻译起始因子eIF4E所决定,其活性受到e IF4E结合蛋白、自身磷酸化、泛素化等因素的调节。eIF4E是一个癌基因,在许多肿瘤中表达上调,其高表达提示预后不良。e IF4E优先促进某些肿瘤相关mRNAs的翻译及核输出,介导肿瘤的生长、转移甚至药物抵抗,参与肿瘤的进展。因此,eIF4E被视为肿瘤靶向治疗的一个重要靶点。本文就e IF4E基因的结构、调节机制以及在促肿瘤和靶向治疗中的最新研究进展进行综述。     

猪带绦虫抗原基因TS76真核表达的研究

将猪囊尾蚴抗原基因TS76亚克隆至VR1020真核表达载体中,用菌浇原位杂交法筛选重组质粒,将其转染Cos7细胞,用Northern Blot鉴定插入片段的mRNA转录,用ELISA检测其表达产物。结果表现：VTS76在真核细胞中能够转录TS76基因;表面产物被兔抗猪囊尾蚴高免血清所识别,在转染真核细胞后24h,即可检测到正确表达的猪囊尾蚴抗原蛋白。     

pEGFP-N1/PDX1真核载体的构建与表达

目的: 构建胰腺十二指肠同源框蛋白1 (pancreatic and duodenal homeobox factor 1, Pdx1)转录因子真核表达质粒,并检测其在真核细胞中的表达能力及其生物活性.方法:以人胚胎胰腺组织基因组的mRNA为模板经RT-PCR扩增获得Pdx1基因编码序列,克隆到真核表达载体pEGFP-N1的多克隆位点中,构建pEGFP-N1/Pdx1真核表达质粒,并转染L02细胞,用RT-PCR、免疫组化、间接荧光法和Western Blot检测目的基因表达情况.结果:酶切与测序结果表明目的基因序列克隆正确;RT-PCR检测目的基因Pdx1 mRNA在靶细胞L02中表达;免疫组化和间接荧光结果证实Pdx1主要存在于细胞核内;Western blot检测到细胞核内Pdx1目的蛋白.结论:完成人Pdx1基因克隆,成功构建了目的基因Pdx1真核表达载体,并在L02细胞中获得有效表达.     

真核细胞基因转录抑制机制的研究

真核细胞的基因转录抑制受多方面的调节,目前的研究已经揭示了转录因子产生转录抑制的分子机制,蛋白之间的相互作用产生的转录抑制等几方面的作用机制.研究了全酶与基因的转录、染色质与真核基因转录抑制、干扰激活因子活性等,在真核细胞基因转录抑制中起的作用.     

真核细胞转录的分子机理——2006年诺贝尔化学奖述评

2006年度诺贝尔化学奖授予了美国斯坦福大学医学院的结构生物学教授科恩伯格,表彰他在研究真核细胞转录分子机理方面的贡献.科恩伯格在真核细胞转录调节控制分子机制方面的研究中取得了突破性进展.他将现代生物化学技术和结构测定结合起来,在原子水平重建酵母RNA聚合酶以及一系列和模板DNA、产物mRNA、底物核酸、调节蛋白功能有关的复合物,从而使真核细胞转录的机理得到全面、深刻而清晰的阐述.     

EWS抑制TRIF和IKKε激活的IRF3的转录活性

为了研究EWS蛋白质对IRF3转录活性的影响,以及EWS蛋白对IRF3信号通路的调节,在真核细胞293T中表达Flag-EWS蛋白质,通过双荧光报告系统研究EWS对TRIF和IKKε激活的IRF3转录活性的影响。结果显示Flag-EWS蛋白质能够在真核细胞293T中正确表达,过表达EWS能够抑制TRIF和IKKε激活的IRF3转录活性,而且能够直接抑制IRF3的转录活性。     

Era蛋白(E.coli ras-like protein)——一个可能参与真、原核细胞信号调控的新分子开关

充足的证据表明:G蛋白作为真核细胞的重要分子开关参与细胞的增殖调控以及部分代谢调控过程。而近年来在大肠杆菌中新发现的Era蛋白(E.coli ras-like protein)则是与已知的三聚体G蛋白和小分子G蛋白不同的一种新的GTP结合蛋白。进一步的研究发现该类GTP结合蛋白不仅存在于原核的大肠杆菌中,而且在高等植物、人类细胞中均含有该蛋白的同源蛋白。大肠杆菌的Era蛋白主要位于细胞膜的内侧,在细胞质中也有一定的分布;真核细胞ERA(ERG)蛋白来源于原核细胞,定位于线粒体或叶绿体上。ERA或ERG蛋白有可能担负着与其它两类G蛋白同样重要的分子开关功能。已有的研究表明,Era蛋白参与调节原核生物的细胞分裂、细胞周期以及部分细胞代谢过程;在哺乳动物细胞中,ERA的同源蛋白可能与细胞周期的G1期调控以及细胞凋亡有关;真核植物中相关研究报道尚少,推测该蛋白可能与种子的正常发育有关。     

14-3-3η抑制TRIF和IKKε激活的IRF3的转录活性

为了研究EWS蛋白质对IRF3转录活性的影响,以及EWS蛋白对IRF3信号通路的调节,在真核细胞293T中表达Flag-EWS蛋白质,通过双荧光报告系统研究EWS对TRIF和IKKε激活的IRF3转录活性的影响.结果显示Flag-EWS蛋白质能够在真核细胞293T中正确表达,过表达EWS,能够抑制TRIF和IKKε激活的IRF3转录活性,而且能够直接抑制IRF3的转录活性.     

细胞不对称分裂机制--芽殖酵母接合型不对称转换

芽列酵母的母细胞与子细胞呈不对称接合型转换，其原因是只有母细胞可表达编码核酸内切酶的基因HO，使相反接合型的缄默基因转位到活动位点取代了原来的接合型基因。HO的不对称表达是因在细胞分裂的末期至G1早期，子细胞核中存在有Ashlp转录抑制因子。Ashlp的不对称分布是由其mRNA的定向转运而实现的：ASH1 mRNA在有丝分裂期被转录出之后，通过接头蛋白She2p和She3p与肌球蛋白Myo4p结合成核糖核蛋白颗粒，经肌动蛋白纤维转运到子细胞远端皮层而锚定并翻译。