包囊游仆虫休眠细胞中大核和线粒体DNA的多态性

为了探索纤毛虫休眠细胞中两套遗传系统的作用特征,对包囊游仆虫（Euplotes encysticus）休眠细胞与营养细胞大核DNA和线粒体DNA进行了RAPD比较.结果显示,在所选用的35条随机引物中,包囊游仆虫大核DNA共扩增出220条片段,其中以休眠细胞大核DNA为模板扩增出18条特有片段,以营养细胞大核DNA为模板扩增出44条特有片段,两者存在28%的差异.在所选用的32条随机引物中,线粒体DNA共扩增出154条片段,其中以休眠细胞线粒体DNA为模板扩增出19条特有片段,以营养细胞线粒体DNA为模板扩增出25条特有片段,两者有29%的差异.这些结果表明,包囊游仆虫休眠细胞与营养细胞的大核DNA结构存着一定的差异;两者的线粒体DNA结构也存在差异.因此,包囊游仆虫在休眠细胞形成过程中,大核DNA、线粒体DNA结构可能都发生了一定的变化,并且这些变化可能与休眠细胞形成过程中的形态结构和代谢活动等剧烈变化以及休眠状态下的生理生化变化密切相关.所得结果为揭示纤毛虫细胞结构的分化与细胞遗传物质的作用关系提供了基础资料.     

冠突伪尾柱虫休眠与营养细胞线粒体DNA的比较

为研究纤毛虫休眠状态下线粒体的行为特征及功能与纤毛虫形成包裹的关系，采用RAPD 技术对冠突伪尾柱虫休眠与营养细胞线粒体DNA进行了比较。结果表明，在选用的15条随机引物中，有5条引物的扩增产物完全相同，其余10条引物的扩增产物各有差异。15条引物共扩增出84条片段，其中共享片段为28条，共享度为66.7％。这说明休眠细胞线粒体DNA 与营养细胞线粒体在很大程度上是一致的，但仍存在一定差异，据此推测细胞在形成包囊的过程中，某些线粒体DNA结构可能发生了改变，这些改变可能与线粒体在包囊内的行为特征及功能有关。     

茄子雄性不育株和可育株的胞质DNA和核DNA差异分析

以茄子(Solanum melongenaL)雄性不育株“正兴1号”(S)和可育株(F)的总DNA为模板,对60个随机引物进行了筛选,找到5个其RAPD(Random amplified polymorphic DNA,RAPD)扩增产物在茄子雄性不育系和对照材料间存在稳定差异的引物．将该5个引物同时扩增总DNA、核DNA和线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)．以总DNA为模板时得到多态性片段9个,以核DNA为模板时得到5个,以mtDNA为模板时得到9个．以总DNA为模板时得到的9个扩增片段中,有5个在总DNA和mtDNA中同时出现,而在核中没有出现,即认为来自mtDNA,这5个片段中,有4个来自可育株,1个来自不育株,说明不育株和可育株在mtDNA上存在差异;有4个片段同时出现在以总DNA和核DNA为模板的扩增中,但在以mtDNA为模板的扩增中却没有出现,认为是来自核DNA,这4个片段中,有3个来自不育株,一个来自可育株,说明可育株和不育株在核DNA上也存在差异．结果初步表明：新发现的茄子雄性不育可能是核质相互作用所引起．     

包囊游仆虫细胞的类中间纤维细胞骨架体系

应用生化分级抽提,并结合DGD包埋 去包埋透射电镜样品制备方法显示,包囊游仆虫营养细胞和休眠细胞中,均存在由直径10 nm左右的单根纤维及单根纤维聚集成的纤维束为结构单元形成的类中间纤维细胞骨架体系.其中,营养细胞的类中间纤维构成的细胞质三维网架,在细胞膜内缘以较密集的纤维网占有了整个表质层,在表质层内缘的细胞质深部纤维形成较松散的网络,网内常见附着有细胞器及一些电子密度颗粒;核纤层位于大核核膜内缘,纤维紧密聚集成网;核骨架纤维网分布比较致密,未见有电子密度颗粒附着.休眠细胞中含有与营养细胞相似的纤维网架结构,但位于细胞内不同层次的纤维网比营养细胞中的同种结构要致密得多,这可能与纤毛虫形成包囊时细胞大范围的收缩有关.并且值得注意的是,在休眠细胞包囊壁的内层壁中也观察到相似于中间纤维的纤维网络,其纤维网均匀和致密地分布在整个包囊壁层中.电泳图谱显示,纤毛虫形成包囊后,保留了营养细胞中的部分蛋白条带,失去了部分条带,新产生了一些特异的条带.结果表明,包囊游仆虫的类中间纤维 核骨架体系,是细胞在营养条件下和休眠状态下都稳定存在的结构,它可能起到比微管类骨架更重要的作用.并且休眠细胞中该体系产生的一些特异蛋白条带,可能是纤毛虫休眠生命活动中的重要蛋白.     

一种腹柱虫包囊形成和解脱过程中核的行为研究

腹柱虫Ｇａｓｔｏｓｔｙｌａ ｓｐ．成包囊过程中,其纤毛器的分化不论是从细胞前端或是细胞后端开始,其大、小核的变化是相同的。首先,两个大核先出现复制带,然后两个大核融合成一个圆球形融合大核。另外也观察到二核包囊和四核包囊,融合大核在包囊进入休眠之前出现复制带,改组后的融合大核在休眠包囊中分裂为二。在成包囊过程中,两个小核中的一个被吸收。出包囊时,小核分裂为二,融合大核行无丝分裂成两个大核。     

龙柚芽变系的RAPD分析鉴定

利用100个10bp的随机引物对龙柚的4个芽变系的基因组DNA进行RAPD扩增分析,探讨芽变系遗传物质的变化．在这100个随机引物中,筛选出能在4个芽变系中扩增出稳定多态性片段的引物11个,一共扩增出了63条片段,其中多态性片段有19个,占30．16％．聚类分析的结果,芽变系2和4的遗传距离最小（0．1001）,相似系数最大（0．9048）．表明了芽变引起的遗传物质的改变能够通过无性繁殖的方式存在,用RAPD的方法来分析不同芽变系的遗传关系是可行的．     

利用RCR技术合成基因的新方法

以多条末端互补的寡核苷酸链为模板,用PCR技术能够一次扩增出目的基因片段．将预合成的350bp目的基因片段分为6条寡聚核苷酸链(S1～S6),每相邻两条寡聚核苷酸链的末端有18个碱基的互补区．先将S1S2,S3S4,S5S6分别用Taq酶延伸补平形成3条双链DNA;再将S1S2,S3S4,S5S6三条双链DNA以3：1：3的比例混合,用预先设计的含有多克隆位点的引物进行PCR扩增,一次性扩增出完整的350bp目的基因片段．     

应用RAPD技术初步分析无裂栉江珧四种类型的基因组DNA

利用3个随机引物(S453，S454，S463)对无裂栉江珧(Atrina pectinata Linaeus)的4种类型：青口、黄口、沙螺、棘螺基因组DNA进行RAPD分析，并对RAPD的实验条件行了优化研究。10～20ng的高纯度DNA用作模板，退火温度为39℃时，RAPD扩增的效率较高，扩增的带纹清晰可辨。3个引物中，引物S453和S463获得了清晰的RAPD扩增结果，引物S454未获得有效扩增，共扩增出8条清晰的DNA片段。8条清晰的类群特异或类群共享的DNA片段，能将沙螺、棘螺、油螺(青口与黄口的合称)区分开来，尚未发现能将青口与黄口分开的RAPD扩增带。     

纤毛虫伪红色双轴虫营养细胞和休眠包囊的超微结构观察

应用扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)对腹毛类纤毛虫伪红色双轴虫(Diaxonella pseudorubra)的营养期细胞和休眠包囊进行了超微结构观察.与营养期细胞相比,在包囊形成过程中,细胞皮层纤毛器中纤毛杆被全部吸收,但一部分基体和表膜下的微管保留下来,形成"尾柱虫类包囊".纤毛虫休眠细胞中也存在自噬泡消化现象,其中,自噬泡不仅将失去功能的线粒体等膜性细胞器进行消化,也将细胞内色素颗粒、黏液泡及共生菌等包裹在内,经历消化过程.结果表明,自噬泡消化是休眠细胞生命活动中渡过不良环境条件的基本过程,其消化对象不仅涉及细胞内胞器,还可能涉及细胞内共生体;线粒体、黏液泡、色素颗粒及共生菌等在细胞休眠生命活动中可能是细胞内物质利用和能量的主要来源.     

绵羊角蛋白关联蛋白KAP6-1基因5'端调控区的分子克隆及测序结果比较

根据绵羊毛囊角蛋白关联蛋白（KAP6-1）基因已知DNA序列设计合成了两个特异性引物,以绵羊基因组DNA为模板,PCR扩增出1042bp的特异性片段,连接到pMD19T载体中获得该片段克隆．经过快速提质粒法筛选、限制性内切酶分析表明该克隆包含所需的目的片段．DNA测序结果也证明该克隆片段与原基因5＇端调控区序列相比具有很高的一致性．研究结果为今后制备转基因克隆动物,在毛囊细胞中特异性表达绒毛生长调控基因奠定了基础．     

包囊游仆虫营养细胞和休眠细胞的胞器酶细胞化学

为探索毛基体非吸收型休眠包囊的生命活动特征及其胞器的功能,本文应用电镜酶细胞化学方法检测了包囊游仆虫在不同生理状态下的胞器酶反应活性及其定位：（1）在营养细胞中的食物泡膜位置出现紧密排列的腺苷三磷酸酶反应颗粒,但在休眠细胞中酶反应颗粒则聚集在细胞表膜区;（2）营养期细胞中,酸性磷酸酶反应颗粒分布在处于不同消化时期的食物泡或自噬泡内,在休眠期细胞中酶反应颗粒定位在自噬泡周缘;（3）营养细胞的线粒体内膜有稀疏的琥珀酸脱氢酶反应颗粒,休眠细胞中在分散的线粒体内也有稀疏的酶反应颗粒,但反应活性比前者要弱得多.作者由所得结果推测,大部分情况下休眠细胞的酶反应活性较营养细胞的同种反应弱;不同类休眠细胞的生命活动中,其酶的功能和作用部位可能是不一样的;在休眠细胞中也发生着消化和营养利用的过程,也经历着线粒体的功能作用过程.     

差异序列聚类算法在四膜虫遗传分析中的应用

用差异序列聚类算法分析了上海四膜虫三株克隆间期细胞大核ＤＮＡ含量变动规律,讨论了调节大核ＤＮＡ量在一定阈值内的可能机制,说明序列类算法具有普遍的生物学意义。     

低能N+注入凤仙花的变异检测

以低能N 注入凤仙花(Impatiens balsaminaL)种子后获得了高茎、矮茎2个变异品系.对其进行过氧化物同工酶(POD)检测的结果表明,2个变异品系叶片的POD分子大小、表达强度和条带数目与对照相比都发生了一定变化.随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)分析结果也表明变异品系DNA链的脱氧核苷酸序列发生了变异,从25个随机引物中筛选出了9个具有多态性.实验证明适当剂量的低能N 注入能够在基因水平引起凤仙花的变异,为花卉产业的发展提供了一种遗传育种手段.     

10种报春花亲缘关系的ISSR分析

 利用简单重复序列间(ISSR)标记对10种报春花的种间变异进行了研究,从40个引物中筛选出11个能扩增出清晰带型并具多态性的引物,共扩增出了86条DNA片段,分子量在300～2000bp之间,平均每条引物扩增出7.81条DNA片段.采用POPGENE软件,计算了种间的Nei氏距离,并用UPGMA法构建了系统树,结果表明:这10种报春花明显聚为三大类:即鄂报春,无粉头序报春,灰岩报春聚为一类;滇北球花报春,报春花、欧报春聚为一类;香海仙报春,橘红灯台报春,霞红灯台报春,海仙花聚为一类.其中第3类与形态学分类结果一致.并探讨了香海仙报春与海仙花的关系.     

Identification of differentially expressed genes in photo-period sensitive genic male sterile rice by randomly amplified cDNAs using RAPD primers

The fertile and sterile young panicle representational populations were constructed by bulked sampling method using young panicles in the photo-period sensitive stage of fertility transformation. Two populations were analyzed using cDNA-RAPD. The results showed that: (i) bulked sampling method can be employed to analyze differentially expressed genes using cDNA-RAPD, taking an advantage in avoiding false positive caused by conventional sampling method. (II) Among 150 random primers used, 83 primers amplified the same banding patterns, and 34 primers amplified the same banding pattern but different staining of intensity on gel. (iii) 33 primers amplified differential cDNA bands between fertile and sterile cDNA populations, and the ratio of polymorphism was 22%. It is concluded that there may exist a lot of genes relating to sterility, which makes the differentially expressed cDNA fragments complicated.     

Identification of differentially expressed genes in photo-period sensitive genie male sterile rice by randomly amplified cDNAs using RAPD primers

The fertile and sterile young panicle representational populations were constructed by bulked sampling method using young panicles in the photo-period sensitive stage of fertility transformation. Two populations were analyzed using cDNA-RAPD. The results showed that: ( i ) bulked sampling method can be employed to analyze differentially expressed genes using cDNA-RAPD, taking an advantage in avoiding false positive caused by conventional sampling method. ( ii ) Among 150 random primers used, 83 primers amplified the same banding patterns, and 34 primers amplified the same banding pattern but different staining of intensity on gel. ( iii ) 33 primers amplified differential cDNA bands between fertile and sterile cDNA populations, and the ratio of polymorphism was 22%. It is concluded that there may exist a lot of genes relating to sterility, which makes the differentially expressed cDNA fragments complicated.     

蜡梅品种的RAPD分析

从200个随机引物中筛选出16个多态性稳定的引物,对38个蜡梅品种进行遗传多样性和亲缘关系RAPD分析.共扩增出154条DNA片段,其中,多态性DNA带98条,占总扩增片段的63.6%.应用Popgene32软件进行Nei相似性系数和遗传距离计算,并利用UPGMA法构建聚类树状图,把供试的38个蜡梅品种分为7个大类,聚类结果与形态分类结果基本一致.结果表明,RAPD标记可用于蜡梅品种鉴定和亲缘关系探讨.     

Genetic relationships among Chinese and American isolates of Phytophthora sojae assessed by RAPD markers

The genetic diversity of three geographic populations of Phytophthora sojae from China and the United States was determined using random amplified polymorphic DNA （RAPD）. The purpose was to explore genetic relationships among Chinese and American isolates of the organism. 21 random primers were selected among 200 random primers screened. A total of 223 reproducible RAPD fragments were scored among 111 individuals, of which 199 （89.23%） were polymorphic. Analysis of genetic variation showed that there existed higher genetic variation in the United States population in comparison to the Chinese populations. Nei＇s genetic identity and principal component analysis indicated that the populations of Fujian and United States are closer to each other than to Heilongjiang populations. Shannon-Wiener diversity index revealed that the United States populations have a higher genetic di- versity than that of Chinese populations. These data are in support of the hypothesis that P. sojae in the United States might not have been introduced from China.