一株枯草芽胞杆菌的分离鉴定及其杀虫活性的研究

以从土壤中自行分离的219株芽胞杆菌中筛选的一株枯草芽胞杆菌菌株HX08为研究对象,通过菌落形态观察、扫描电镜、激光共聚焦显微镜等进行菌体形态观察以及16S rRNA基因同源性分析等一系列方法鉴定,该株细菌属枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis,命名为HX08,并将其16S rRNA基因序列提交上Genebank数据库,获得登陆号KF774302.通过生测发现,HX08菌株在60 h发酵时间段对棉铃虫的致死效果最好.对该菌株发酵液提取的活性蛋白进行初步研究,建立了HPLC技术分离体系,使用H2O做流动相,以0.5 mL/min流速洗脱,检测波长分别为215、254和280 nm,收集第15 mL收集管处即保留时间为31 min的2号峰粗分离物活性较高.切取SDS-PAGE胶上相对应活性峰目的蛋白质条带酶解,利用质谱(LTQ-MS)技术进行了分子特性分析,鉴定发现杀虫活性蛋白成分为草酸脱羧酶.     

苏云金芽胞杆菌高效电转化方法的建立

电转化已经成为苏云金芽胞杆菌工程菌构建过程中非常重要的一种外源基因导入方法.高效率的电转化方法将加速这类研究进展.通过对培养基、培养时间、感受态细胞制备、电转化缓冲液、电压参数的优化,建立一种高效的苏云金杆菌电转化方法.苏云金杆菌生长在含有0.5 mol/L山梨醇的BHI培养基中,30℃振荡培养至OD600值达到0.6～0.8,细菌细胞经1 g/L蛋白酶K在37℃处理20 min,然后用电转化缓冲液洗涤2遍,设定电压为1 800 V,电击1次.利用该方法,pHT315质粒在苏云金杆菌中的转化效率大幅提高.     

苏云金芽胞杆菌cry7Ab9基因的克隆与杀虫活性的测定

以辽宁省千山市的22株苏云金芽胞杆菌进行PCR cry型的cry7类基因鉴定,对cry7类基因进行克隆表达及生物活性测定,为cry基因储备奠定基础.菌株QZG121经比对后发现含有cry7Ab基因.克隆该基因全长序列为3 417 bp,编码1 138个氨基酸残基,相对分子质量为130 000,并在Gene Bank中登记,基因登录号为GU936713,由苏云金芽胞杆菌国际命名委员会正式命名为cry7Ab9.通过构建原核表达系统获得cry7Ab9基因表达蛋白,并进行暗黑鳃金龟幼虫杀虫活性的测定,7天校正死亡率10 mg.L-1为11.11%、100 mg.L-1为25.93%;两周校正死亡率10 mg.L-1为33.33%、100 mg.L-1为48.15%,LC50为289.99 mg.L-1.     

国产和进口柠檬酸消毒剂杀细菌芽胞效果的比较研究

为了比较国产和进口柠檬酸消毒剂的杀菌效果,采用悬液定量杀菌试验和消毒模拟现场试验,同时对国产柠檬酸消毒剂和进口柠檬酸消毒剂的杀细菌芽孢效果进行实验室研究.研究结果发现在试验温度80℃时,25%和50%国产柠檬酸消毒剂和进口消毒剂都对枯草芽胞杆菌具有明显的杀菌作用.杀灭对数值分别为〉7.31和〉7.26均具备同样的杀菌效果.     

响应面法优化苏云金芽胞杆菌YC-10发酵培养基

为获得杀线虫Bt菌株YC-10最佳培养基配方,以发酵液中伴胞晶体蛋白浓度为评价指标,利用Plackett-Burman实验设计和响应面分析法对YC-10的培养基配方进行室内摇瓶优化筛选.实验结果表明:大豆饼、玉米粉、氯化钙和磷酸氢二钾为4个显著影响因子,YC-10最优培养基配方为:黄豆饼25.73 g/L,玉米粉12.57g/L,CaCl_20.25 g/L,K_2HPO_40.43 g/L,ZnSO_40.20 g/L,MgSO_40.20 g/L,MnSO_40.25 g/L,FeSO_40.25 g/L.     

喂食Cry1Ac毒素对棉铃虫中肠类胰蛋白酶的影响

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)在芽胞形成过程中产生的原毒素被敏感昆虫吞食进入消化道后,在中肠蛋白酶的作用下经历一系列酶的剪切活化过程,形成具有杀虫活性的毒性肽.类胰蛋白酶因其在昆虫中肠内蛋白质水解和Bt毒素活化中起着重要作用而受到广泛研究.本研究提取了棉铃虫4龄幼虫的中肠BBMV蛋白,利用SDS-PAGE分析鉴定到喂食Cry1Ac毒素24 h后,棉铃虫幼虫中肠类胰蛋白酶的表达量呈明显下降趋势.该下降趋势很有可能是作为一种昆虫对Bt毒素作用的早期反应,通过影响Bt毒素在中肠中的酶解活化过程,从而为昆虫提供即时保护.     

苏云金杆菌4.0718菌株InhA的鉴定和不同生长时期的表达分析

免疫抑制因子A (Immune Inhibitor A, InhA)是苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt)分泌的一种锌金属蛋白酶,具有水解昆虫抗菌肽的活性.为了研究InhA在Bt 4.0718菌株中的重要功能,利用SDS-PAGE分离了Bt 4.0718菌株营养生长中期、芽胞早期和芽胞晚期的细胞总蛋白质,通过MALDI-TOF/TOF MS分析以及数据库搜索,鉴定到了相对分子质量为86.5kD、pI为5.37的InhA蛋白质.然后采用双向电泳(2-DE)技术检测该蛋白质在不同时期表达量的差异,发现分离和鉴定到的InhA及相对分子质量为75kD、pI为5.13的InhA precursor蛋白质在营养生长中期的表达量比较高,说明InhA在营养生长中期前已开始形成,直到芽胞早期达最大表达量,但芽胞晚期的图谱分析和质谱鉴定均未发现InhA. InhA在营养期的高效表达说明:Bt进入昆虫体内后,InhA在Bt细胞生长繁殖初期表达,并抑制昆虫体内的抗菌肽对Bt细胞的裂解作用,从而有助于Bt在昆虫宿主中的生存,为芽胞期晶体和芽胞的形成以及菌株毒力的发挥奠定了基础.     

直接器官发生途径的榉树微繁体系建立

为了建立通过直接器官发生途径的榉树微繁技术体系,以当年生带芽茎段为外植体,进行了榉树不定芽的直接诱导试验.结果表明:适合不定芽诱导的培养基为MS+BA 2.25~4.50μmol/L,有效芽诱导率达到76.67%;继代增殖培养的培养基为MS+BA 2.25μmol/L,增殖系数为5.1;壮苗培养基为MS+BA 2.25μmol/L+GA31.45μmol/L;生根培养基为1/2 MS+NAA 2.69μmol/L+活性炭0.1 g·L-1,生根率77.78%,生根数达4.5条.     

高温产生物表面活性剂菌种的筛选及性能评价

从胜利油田油井产出液及含油污水等样品中分离出16株能利用原油的菌株.通过原油平板涂布和液体发酵培养,筛选出1株能在高温(60℃)、高压(10 MPa)下以原油为唯一碳源生长且能有效产出生物表面活性剂的菌株CH2.原油作用实验结果表明其对胜利油田东辛原油降粘率可达48.5%,原油含蜡量降低12.6%,原油凝固点降低3.0℃;红外光谱分析显示该菌株产生的生物表面活性剂为糖脂类,经分子生物学初步鉴定菌株CH2为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus).物理模拟驱油实验显示聚合物驱油后,注入CH2菌液60℃培养21 d时可提高原油采收率8.6%.     

番茄苹果复合汁乳酸菌发酵饮料的研制

以番茄和苹果为原材料,制备复合果蔬汁,添加保加利亚乳杆菌Lactobacillus bulgaricus与嗜热链球菌Streptococcus thermophilus(比例为1∶1)进行发酵,开发研制番茄苹果复合汁乳酸菌发酵饮料.通过正交实验确定番茄苹果复合汁乳酸菌发酵饮料的最佳发酵工艺条件为:番茄汁与苹果汁的混合比例为2∶1,脱脂乳添加量为14%,乳酸菌接种量为7%,发酵温度为43℃,发酵时间为18 h.     

关于映射芽的右等价的若干结果

S.S.—T.Yau对全纯函数芽的右等价进行了刻划,本文则研究C~∞映射芽的右等价。文中§1讨论右等价的映射芽的若干性质,§2给出两个映射芽右等价的一些充分条件。而§1中所得到的结果对于识别二映射芽不是右等价来说显然是有用的。     

菌种发酵歧化甘油产1,3 PDO条件研究

以甘油为原料,通过单因素实验对菌株间歇发酵法生产1,3 丙二醇的生产条件进行了研究.结果表明：最适的甘油含量为40 g/L,最适氮源为(NH4)2HPO4,用量为3 g/L,pH 7.5,温度为30 ℃,装液量为40%,摇床转速为100 r/min,发酵时间为24 h.在最佳培养基组成与最佳发酵条件下发酵了3批,最终的1,3 PDO浓度平均值为23.2 g/L,甘油的摩尔转化率为70.2%,比优化前的60.5%提高了9.7%.     

高比强胞状铝合金耐火性能的研究

采用耐火极限这个指标来衡量胞状铝合金的耐火性能,用有限元分析方法计算了温度场及耐火极限.胞状铝合金具有很好的耐热性能,以略高于铝合金熔点的温度660℃加热时,厚为26mm、孔隙率为76%的胞状铝合金的耐火极限为无限长,且形状不发生变化;要使胞状铝合金的背面温度达到熔点,必须提高加热温度.胞状铝合金在高于710℃的温度下加热,其体积发生收缩,且收缩率随温度升高而增大.     

菌种发酵歧化甘油产1,3-PDO条件研究

以甘油为原料,通过单因素实验对菌株间歇发酵法生产1,3-丙二醇的生产条件进行了研究.结果表明:最适的甘油含量为40g/L,最适氮源为(NH4)2HPO4,用量为3g/L,pH 7.5,温度为30℃,装液量为40%,摇床转速为100r/min,发酵时间为24h.在最佳培养基组成与最佳发酵条件下发酵了3批,最终的1,3-PDO浓度平均值为23.2g/L,甘油的摩尔转化率为70.2%,比优化前的60.5%提高了9.7%.     

施氮对萝卜芽芥子油苷含量的影响

以心里关萝卜芽为材料,研究了施氮处理对萝卜芽次生代谢产物芥子油苷含量的影响.结果表明,氮素供给影响萝卜芽的芥子油苷含量.氮素浓度为4 mmol·L-1时,萝卜芽中总芥子油苷含量显著高于对照(0 mmol·L-1),其余氮素浓度下(2、8、16 mmol·L-1)总芥子油苷含量则低于对照.脂肪族芥子油苷总含量及单一种类芥子油苷含量的变化趋势与总芥子油苷含量相似.吲哚族芥子油苷总含量以及吲哚基-3-甲基芥子油苷和1-甲氧吲哚基-3-甲基芥子油苷含量在各施氮处理下均低于对照.     

锦鸡儿(Caragana sinica)芽增殖与植株再生

以锦鸡儿(Caragana sinica)新生茎段为外植体,进行组织培养和快速繁殖。结果表明:芽诱导的最佳培养基为MS+15μmol/L 6-BA+1μmol/LNAA;增殖培养最佳培养基为MS+5μmol/L 6-BA+0.1μmol/L NAA+2μmol/L GA_3;以1/2MS+10 g/L蔗糖为培养基,增施0.15%CO_2可达到较好的生根效果;锦鸡儿茎段芽诱导较容易,但增殖培养需添加适当浓度的GA_3;增施CO_2可提高试管苗生根率和存活率。     

婴儿双歧杆菌高浓度培养的研究

试验比较了婴儿双歧杆菌在TPY,MRS和TM培养基的生长情况,发现TM作为婴儿双歧杆菌的生长培养基相对较好;在对TM进行优化后,进行流加碱培养.测定婴儿双歧杆菌在发酵培养基中的生长曲线、pH和吸光值的变化,确定发酵终止时间为20 h,此时菌数可达6.02×109 cfu/mL.     

防风根段不定芽发育的形态学研究

采用常规石蜡切片方法研究了防风根段不定芽的发生过程,发现不定芽的发生有两种途径：直接器官发生和间接器官发生．根段的粗细对不定芽的分化影响不大;根段极性不明显,在茎端和根断均有不定芽的产生．     

番茄下胚轴系列切段离体培养反应的研究：Ⅲ 不定芽的发生

离体条件下,番茄幼苗下胚轴系列切段在有外源IAA、玉米素和TIBA时,其不定芽的发生表现出:1.外源IAA和玉米素均促进不定芽产生,玉米素作用大于IAA;TIBA具有较强的促进生芽效应。2.切段形态学两端不定芽形成存在极性现象,IAA和玉米素均可减弱这种极性表现,而TIBA在削弱极性方面作用不显著。3.下胚轴系列切段中不同切段在外源IAA、玉米素、TIBA刺激下,形成不定芽的反应存在明显差异,总体上讲其中部切段为敏感区,上、下部切段敏感性差。     

嘧肽霉素发酵培养基及发酵条件的优化

通过单因子试验和多因子均匀试验确定了嘧肽霉素产生菌不吸水链霉菌的摇瓶发酵条件。发酵培养基最佳配方为花生饼粉(2%),可溶性淀粉(8%),酵母粉(0.3%),(NH4)2SO4(1%),CaCO3(0.65%),NaCl(0.45%)。250 mL三角瓶装液量30 mL,培养基初始pH=6,28℃,在220 r.min-1摇床上发酵120 h,可获得较高的嘧肽霉素产量,抑菌圈直径可达32 mm,增产31%。