6株拮抗细菌对致病疫霉抑制作用的比较

比较在前期获得的明显抑制致病疫霉菌丝生长的6株细菌的抑菌性能及其防病潜力,为开发生防制剂防治马铃薯晚疫病提供依据.采用对峙培养法和打孔法测定6株细菌活体、菌液和无菌体发酵液对病菌菌丝生长的抑制作用,利用块茎切片法评价拮抗菌菌液对晚疫病的离体防治效果.结果表明,6株菌的菌液对菌丝生长的抑制作用均明显优于活体和无菌体发酵液,抑菌带宽度均在27mm以上,且均可引起菌丝体畸变,其中以WL2菌株的抑菌作用最强,活体、菌液和发酵液的抑菌带宽均在26mm以上,致畸作用也最强;此外,6株菌的菌液在离体块茎切片上的防病效果也以WL2菌液处理最好,病情指数最低(13.7),相对保护率最高(80.5%).这表明菌株WL2比其他5个菌株在防治马铃薯晚疫病方面有更大应用潜力.     

2种致病疫霉拮抗真菌混合发酵及抗菌物质稳定性研究

为获得防治马铃薯晚疫病稳定的生防制剂,对能够有效抑制致病疫霉的拮抗菌梨黑斑病菌LH-03和白菜黑斑病菌BH-09混合发酵的可行性及发酵条件进行了确定和优化,同时对混合发酵产物的抗菌稳定性进行了初步研究.结果表明,2种真菌之间无桔抗作用,可进行混合发酵,并且发现混合发酵后可有效提高2种真菌发酵液的抑菌活性;混合发酵的最佳...     

凝结芽孢杆菌TQ33产抗疫霉物质特性研究

凝结芽孢杆菌TQ33是从脱脂奶粉中分离出来的,发现其发酵液中活性代谢产物对甜瓜疫霉菌(Phytophthora drechsleri Tucker)、灰葡萄孢霉菌(Botrytis cinerea)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)、甜瓜枯萎病菌(Fusarium ox-ysporum)、苹果炭疽病菌(Glomerella cingulate)植物致病真菌有很好的抑制作用,其中对甜瓜疫霉菌具有较强的抑制作用,同时对抗甜瓜疫霉物质特性进行了研究,将具有抑菌活性的发酵液分别经过调节pH、加热、蛋白酶处理后发现,凝结芽孢杆菌TQ33发酵液具有一定的热稳定性;在pH,5～6时具有最大抑菌活性,发酵液经胰蛋白酶、中性蛋白、蛋白酶K处理后失去部分抑菌活性,初步分离纯化实验表明其中一种抗菌物质可能是苯乳酸,这表明凝结芽孢杆菌TQ33发酵液中可能含有苯乳酸,以及其他蛋白类抑菌物质.     

拮抗菌HT-6对致病疫霉的竞争及诱导性抑制

为深入了解细菌HT-6对致病疫霉(Phytophthora infestans)菌丝生长的抑制机理,采用琼脂柱对接法观察细菌HT-6对致病疫霉空间位点的竞争,铬天青(CAS)培养基观察嗜铁素的产生,硫酸-蒽铜比色法和水杨酸浓硫酸比色法分别比较葡萄糖和硝态氮的利用率,同时以致病疫霉及其细胞壁制剂(CWP)为诱导物,采用平板透明圈法观察HT-6产生的纤维素酶和β-1,3-葡聚糖酶,DNS法测定酶活并评价含有2种酶的无菌体发酵液对致病疫霉的抑制活性.结果显示,单独接种在PDA琼脂柱上的致病疫霉能沿琼脂柱生长并迅速扩展至黑麦固体培养基(Rye)表面生长,与致病疫霉菌饼对接的HT-6也能沿着琼脂柱生长并扩展至Rye培养基表面迅速蔓延,而与HT-6对接的致病疫霉菌丝体仅在PDA琼脂柱上生长,没有扩展至Rye表面,被HT-6的生长所阻止;HT-6能产生嗜铁素,致病疫霉不产生嗜铁素;HT-6对葡萄糖和硝态氮的利用率(75.66%和69.05%)均显著高于致病疫霉(55.97%和56.87%);HT-6菌株单独培养时不产生纤维素酶和β-1,3-葡聚糖酶,但致病疫霉菌体和CWP均能诱导HT-6产生这2种酶,其中菌体诱导后的2种酶活,分别为6.638、2.913 U,均显著高于CWP的诱导处理(1.326、1.289 U,P<0.05);CWP诱导后含有2种酶的HT-6无菌体发酵液对致病疫霉菌丝生长具有明显抑制作用(抑菌率为33.25%),但显著低于单独培养的HT-6菌液原液的抑菌活性(抑菌率为81.33%).这表明HT-6能够通过空间和营养竞争以及致病疫霉诱导产生的细胞壁降解酶抑制致病疫霉,其中以空间和营养竞争为主.     

对放线菌Sy11有诱导作用的致病疫霉信号分子研究

致病疫霉(Phytophthora infestans)能产生一种信号分子,诱导放线菌Sy11菌株产生抑菌物质从而抑制致病疫霉.为明确在哪种培养方式下致病疫霉更易产生这种信号分子以及信号分子的物质类别,本文采用生长速率法对致病疫霉单独培养(单独固体培养和单独液体培养)以及与Sy11共培养(对峙培养和混合培养)产生的信号分子诱导Sy11抑菌作用的活性进行了比较,并以不同有机溶剂对信号分子的物质类别进行了初步分析.结果显示,致病疫霉无论单独培养还是与Sy11共培养,均可产生诱导Sy11抑菌作用的信号分子,其中以在固体黑麦培养基上与Sy11对峙培养产生的信号分子的诱导活性最强,菌落直径为24.79 mm,但与其他3种培养方式所产生的信号分子的诱导活性并无显著性差异;对致病疫霉单独液体培养后无菌体发酵液的分析表明,其中脂类粗提物的诱导活性(菌落直径32.8 mm)远高于糖类(菌落直径61.5 mm)和蛋白质类(菌落直径60 mm)粗提物,进一步对其中脂类物质的萃取显示,乙酸乙酯的萃取效果明显优于乙醇和石油醚.乙酸乙酯萃取物诱导Sy11后对致病疫霉菌丝生长有显著的抑制作用(菌落直径为35 mm)与乙醇萃取液的处理达到显著性差异.以上结果表明,致病疫霉生长过程中无论单独培养还是与Sy11共培养均可产生能诱导Sy11抑菌作用的信号分子,该信号分子以脂类物质为主,可用乙酸乙酯萃取得到.     

解淀粉芽孢杆菌IMAUB1034抗真菌活性物质的初步研究

对解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)IMAUB1034活性物质的理化性质和盆栽实验中对甜瓜疫霉菌引起的病害的防治效果进行研究.结果显示,解淀粉芽孢杆菌发酵液对由甜瓜疫霉菌引起的病害具有一定防病效果,病情指数为40.22,生防效果达到35.9%.另外,其发酵液还能抑制甜瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、灰葡萄孢霉菌(Botrytis cinerea)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)、甜瓜疫霉菌(Phytophthora drechsleri Tucker)、苹果炭疽病菌(Glomerella cingulate)的生长.无菌上清液中的活性物质能耐高温、耐酸碱,在pH,2～10仍然能检测到很高的抑菌活性.但经过酶处理后抑菌活性降低程度不同.     

干酪乳杆菌IMAU10041抗甜瓜枯萎病菌的作用及理化性质

从60株乳酸菌中筛选出22株具有抗甜瓜枯萎病菌活性的乳酸菌菌株,其中9株具有较强抗甜瓜枯萎病菌活性.对这9株乳酸菌的抗植物致病真菌谱进行研究发现,9株菌对番茄早疫病菌(Alternaria solani)、甜瓜疫霉菌(Phytophthora drechsleri Tucker)、苹果炭疽病菌(Glomerella cingulate)、灰葡萄孢霉菌(Botrytis cinerea)的生长均有抑制作用.其中干酪乳杆菌IMAU10041对甜瓜枯萎病菌具有较强的抑制作用,并且对甜瓜疫霉和番茄早疫病菌有较高的抑菌活性.分别经过调节pH、加热、蛋白酶处理干酪乳杆菌IMAU10041的发酵滤液后,发现干酪乳杆菌IMAU10041发酵液具有一定的热稳定性;在pH 4.0时具有最大抑菌活性,在碱性条件下抑菌活性迅速失活;发酵液经胰蛋白酶、中性蛋白、蛋白酶K处理后失去部分抑菌活性,这表明干酪乳杆菌IMAU10041发酵液中可能含有一定的蛋白类抑菌物质.     

致病疫霉诱导放线菌Sy11菌株的抑菌作用

在筛选致病疫霉拮抗菌过程中,发现放线菌Sy11菌株对致病疫霉的抑制作用是由于致病疫霉对Sy11的诱导作用.为了进一步明确致病疫霉对Sy11的诱导方式和条件,采用平板对峙共培养法探讨了致病疫霉诱导Sy11的适宜培养基、培养温度、培养时间以及诱导后Sy11菌株抑菌作用的持续时间等.结果显示,只有活体致病疫霉才能诱导Sy11的抑菌作用,死亡的致病疫霉菌体没有诱导作用;用黑麦培养基20℃黑暗对峙培养7d,从Sy11菌落向外12mm处的无菌体琼脂块的抑菌作用最强,抑菌率达到79.38%,与Sy11菌株完整菌落的抑菌率86.47%相近;而且发现致病疫霉诱导1次后,Sy11的抑菌能力即可连续传递13代,且抑菌率保持在65%以上.这些结果表明,Sy11是在受到活体致病疫霉诱导之后才对致病疫霉有抑制作用,且抑菌作用具有遗传性.     

致病疫霉菌株交配型的检测及其检测方法的比较

致病疫霉(Phytophthora infestans)是马铃薯晚疫病的病原体,可导致马铃薯大面积减产。致病疫霉的有性生殖可以产生卵孢子,由于其抗逆性较强,利于致病疫霉渡过不利的生存环境,给马铃薯晚疫病的有效防治带来巨大的困难。致病疫霉的有性生殖属于异宗配合,即A1、A2交配型同时培养时才会产生卵孢子。因此,快速而有效地检测致病疫霉菌株的交配型将为致病疫霉有性生殖分子机理的研究及致病疫霉的防治奠定基础。通过直接配对法、纸盘法和分子标记法三种方法,对5株来源不同的致病疫霉菌株进行了交配型检测。三种方法的检测结果均表明,菌株HQK8-3、2PO-D、USA1的交配型与ATCC标准菌株64093的交配型一致,为A1交配型,而菌株2PO82001、P7723的交配型与ATCC标准菌株32835的交配型一致,为A2交配型。说明三种方法均可有效鉴定致病疫霉交配型,但三种方法各有优缺点,应根据实验条件,采取合适的方法进行菌株交配型测定。     

3株致病疫霉拮抗放线菌复合发酵及其抑制机理

为提高拮抗放线菌控制马铃薯晚疫病的稳定性,采用涂布法和显微观察法对从土壤中筛选到的活体状态能显著抑制致病疫霉菌丝生长的3株放线菌进行了复合发酵方式及发酵条件的初步优化及抑菌机理的研究.结果表明:3株放线菌之间无明显拮抗作用;以培养种子液3 d、先接入NB8培养2 d后再接入NB11和NB12为最佳发酵方式,抑菌率最高可达97.7%,明显优于NB8(87.4%),NB11(20.0%)和NB12(28.2%)单独发酵液的抑制作用;当初始pH为自然值、28℃时,3株菌复合发酵后抑菌活性最高.复合发酵液对病原菌菌丝生长产生明显抑制作用,致使菌丝变形或孢子囊发生异常破裂.     

拮抗真菌和放线菌复配发酵产物对马铃薯晚疫病的防病作用

抑制作用最强;预先处理马铃薯块茎后,复配发酵液的防效(病情指数44.44%)也明显优于单独发酵液.复配发酵液在防治马铃薯晚疫病中具有更大的应用潜力.     

河西走廊盐碱土壤中抗马铃薯干腐病放线菌的筛选鉴定

研究了从河西走廊盐碱土壤中分离得到的256株放线菌对马铃薯干腐病菌的抑菌效果.采用平板对峙法、生长速率法及活体组织法筛选拮抗菌,对其进行形态及分子鉴定.结果显示:菌株XA06225对靶标菌表现出强的抑制作用,平板初筛抑菌带为5.03cm,发酵滤液复筛抑菌率为54.45%,发酵液处理可有效抑制马铃薯块茎病斑直径扩散,对马铃薯干腐病的防效为65.45%.结合其形态、生理生化特性和16SrRNA基因系统发育分析,初步鉴定为球孢链霉菌(Streptomyces globisporus).     

来源于酸马奶的植物乳杆菌Bx6-2抑制甜瓜疫霉菌的研究

采用生长速率法测定植物乳杆菌Bx6-2的发酵液对甜瓜疫霉菌菌丝生长的影响,并对抑菌活性物质的理化性质进行了研究.结果表明,该菌的发酵液对甜瓜疫霉菌菌丝的生长有抑制作用.发酵液中的活性物质有较好的热稳定性,在pH 6.0时抑菌效果较好,对酸性蛋白酶敏感,对中性蛋白酶不敏感,常温下10 d的稳定性较好.通过调节pH、酶处理和加热处理实验,说明其抑菌活性物质不是乳酸,蛋白质类物质起了一定的抑菌作用,但其抑菌现象可能是与其他物质共同作用的结果.     

拮抗菌HT-6引起致病疫霉菌体的生理变化

为了解核桃内生细菌HT-6对致病疫霉的抑制作用机理,采用对峙培养和传统培养相结合的方法检测了受拮抗菌HT-6抑制不同阶段后致病疫霉菌丝体内部分活性物质、抗性相关酶活、电导率以及溶氧量的变化.结果显示,随对峙培养时间延长,受抑制组与对照组中致病疫霉菌丝体内可溶性糖和淀粉含量虽然均呈增加趋势,蛋白质含量均呈下降趋势,但受抑制组可溶性糖、淀粉及蛋白质含量均远低于对照组,且均在对峙培养第15天时差异最大(P<0.01);受抑制组和对照组菌丝体内苯丙氨酸解氨酶、多酚氧化酶和过氧化物酶3种酶活的变化趋势与上述3种物质的变化趋势相似,但均在培养的第12天达到最高,且受抑制组菌体内3种酶活均远高于对照组,与对照达到极显著差异(P<0.01).此外,受拮抗菌HT-6抑制后致病疫霉菌丝体内的电导率(162.77 μS/cm)显著高于对照组(60.03 μS/cm),而溶氧量(47.13%)显著低于对照组(56.1%).这些结果表明:HT-6菌株可通过抑制或大量消耗致病疫霉菌丝体内部分活性物质,同时增加细胞膜透性、降低呼吸作用实现对致病疫霉菌丝体生长的抑制作用.     

致病疫霉拮抗真菌研究进展

致病疫霉主要引起马铃薯和番茄的晚疫病,是严重制约马铃薯和番茄生产可持续发展的首要因素.生产中可利用的措施主要有选育和利用抗病品种、农业栽培措施和化学农药,但因病菌生理分化明显、遗传变异迅速,现有措施难以完全有效控制该病,发掘致病疫霉拮抗微生物并研发安全高效的微生物农药是当前的主要研究方向之一.综述了近年来对于致病疫霉拮抗真菌的研究进展,并指出了在该领域中存在的一些问题和今后的研究重点,以期对马铃薯晚疫病的生物防治发挥推进作用.     

枯草芽孢杆菌WL2脂肽粗提物对致病疫霉的抑制作用及其分离鉴定

为明确枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WL2产生的脂肽对致病疫霉菌丝体生长的影响及其预防马铃薯晚疫病的潜力,以滤纸片法检测脂肽粗提物对菌丝生长的抑制效果,显微镜观察脂肽粗提物对致病疫霉孢子萌发的影响,离体组织培养法明确脂肽粗提物对晚疫病的预防效果,高效液相色谱法(HPLC)纯化脂肽、电子喷雾质谱(ESI-MS)鉴定脂肽种类.结果表明,当脂肽粗提物质量浓度为25μg/mL时,抑菌圈直径为5.9mm,抑制后的菌丝恢复生长速度仅有5.2mm/d,与对照组(11.2mm/d)存在显著差异(P0.05);当脂肽质量浓度为3μg/mL时,孢子囊萌发比率只有9.7%,用质量浓度为4μg/mL的脂肽抑制后,释放游动孢子比率只有7.6%,与对照组均存在显著差异(P0.05);脂肽粗提物(20μg/mL)对晚疫病的预防效果最好,病情指数最低(20.6),与对照组病情指数(73.1)有显著差异(P0.05);经HPLC分离和ESI-MS鉴定,明确了WL2菌株可产iturinA和surfactin两类脂肽物质.以上结果说明WL2菌株产生的脂肽在预防马铃薯晚疫病方面具有较大的潜力.     

真菌Penicillium sp. MO3 产生的抗菌肽AF2的分离纯化和性质的研究

从真菌Penicillium sp. M03发酵液中提取到一种具有抗菌活性的肽类物质AF2,并对其性质进行初步研究. 真菌发酵液经纱布过滤,离心后经10000D超滤膜超滤,冻干,以纯水溶解经Sephadex LH-20,DEAE Sepharose及Sephadex G-15进行分离纯化得到纯净物质,并对其基本性质进行研究. 结果证明：AF2具有典型的肽类物质特征反应,分子量约为1155,含有12种常见氨基酸,对酸碱,胰蛋白酶,β-内酰胺酶稳定,对热有较好的耐受性.     

真菌Penicillium sp.MO3产生的抗菌肽AF2的分离纯化和性质的研究

从真菌Penicillium sp.M03发酵液中提取到一种具有抗菌活性的肽类物质AF2,并对其性质进行初步研究.真菌发酵液经纱布过滤,离心后经10000 D超滤膜超滤,冻干,以纯水溶解经Sephadex LH-20,DEAE Sepharose及Sephadex G-15进行分离纯化得到纯净物质,并对其基本性质进行研究.结果证明：AF2具有典型的肽类物质特征反应,分子量约为1155,含有12种常见氨基酸,对酸碱,胰蛋白酶,β-内酰胺酶稳定,对热有较好的耐受性.     

一株水霉拮抗放线菌FX11的筛选鉴定及其安全性和抑菌稳定性

试验以寄生水霉Saprolegnia parasitica为靶标菌,通过平板对峙及发酵液抑菌试验筛选获得一株拮抗菌FX11,其抑菌带平均宽度达18.30±1.52 mm,发酵液抑菌率为68.40%。试验通过形态学特征及16S rRNA基因序列分析对该菌株进行鉴定,并研究其安全性和抑菌稳定性。结果显示,该菌株为Streptomyces polychromogenes;其发酵液对散鳞镜鲤、彭泽鲫、大鳞副泥鳅3种淡水鱼稚鱼的存活率无显著影响(P0.05);拮抗菌FX11经10次传代后抑菌效果未发生显著变化(P0.05);其发酵液经不同温度处理后,抑菌活性变化差异不显著(P0.05);pH变化对拮抗菌发酵液抑菌活性影响显著(P0.05),拮抗菌发酵液在pH 6.0～8.0范围内抑菌率最高。研究结果表明,菌株Streptomyces polychromogenes FX11对水霉病原菌具有显著拮抗作用,且传代稳定,其发酵液对试验鱼苗安全,具有较好的热稳定性和酸碱适应性,在水霉病生物防治中具有良好的应用价值。     

甘肃马铃薯贮藏期真菌性病害病原菌的分离鉴定

对甘肃省马铃薯贮藏期真菌性病害的病原菌进行了分离鉴定,共鉴定到8种病原真菌,引起6种贮藏期真菌病害,分别为:致病疫霉(Phytophthom infestans)引起马铃薯晚疫病,茄链格孢(Alternaria solani)引起马铃薯早疫病,茄丝核菌(Rizoctonia solani)引起马铃薯黑痣病,具柄细基束梗孢(Cephalotrichum stemonitis)引起马铃薯褐腐病,Verticillium tricopsis引起马铃薯萎蔫病,Fusarium solani和F.sambucinum引起马铃薯于腐病.马铃薯为V.tricopsis的新寄主,具柄细基束梗孢(C.stemonitis)引起马铃薯褐腐病、F.sambucinum引起马铃薯干腐病在我国属首次报道.