c-fos启动子与GFP重组质粒的构建及在Pc12细胞中的表达

目的：构建c—fos启动子与GFP的重组质粒载体,并使其在体外培养哺乳动物pcl2细胞中表达．方法：Xba I、Hind Ⅲ双酶切含c—fos启动子的HF443质粒,纯化后与同样双酶切的绿色荧光蛋白基因连接;利用Lipofect AMINE 2000将重组质粒转染体外培养哺乳动物pcl2细胞．结果：加入Na^ 通道激活剂乌头碱后,转染后的pcl2细胞可发出较强的绿色荧光．结论：c—fos启动子与GFP重组质粒构建成功,并可用于哺乳动物活细胞c—fos基因的检测．     

齐墩果酸对衰老大鼠睾丸间质细胞胰岛素/IGF1通路关键基因表达的影响

为了探讨齐墩果酸对衰老大鼠睾丸间质细胞的作用,采用MTT法确定齐墩果酸最适药物浓度,氧化应激创建大鼠睾丸间质细胞衰老模型,RT-qPCR、免疫荧光和免疫印迹检测胰岛素/胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1, IGF1)信号通路关键基因转录情况和蛋白翻译情况,采用INSR抑制剂处理细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果显示:与正常组相比,INSR、IRS1、IRS2、IGF1的mRNA转录水平和蛋白翻译水平显著下降(P<0.05);IGFBP3的mRNA转录水平显著提高(P<0.05),免疫荧光和免疫印迹均未检测到此基因表达;与衰老组相比,齐墩果酸组明显逆转此现象(P<0.05);齐墩果酸能明显抑制衰老组细胞的凋亡(P<0.05),INSR抑制剂处理后,细胞凋亡率明显高于齐墩果酸组(P<0.05).综上可知,齐墩果酸通过调控胰岛素/IGF1信号通路关键基因的转录和翻译延缓Leydig细胞衰老.     

原癌基因c—fos及其相关因子

c-fos基因是原癌基阂的重要成员,其表达受多种细胞活性物质的影响,通过其表达产物c-fos蛋白参与转录激活蛋白1的组成发挥生物学作用,并可以反过来对细胞因子进行调节,从而参与细胞的生长、增殖、分化途径上环节的调控。本文就原癌基因c—fos及其相关因子进行了综述。     

p38-p53-p21信号通路参与调控血管紧张素-Ⅱ诱导的人血管平滑肌细胞衰老

血管紧张素-Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)是一个重要的血管活性肠肽,对血管的结构和功能有重要的调控作用.研究显示,伴随机体代谢形成的AngⅡ激活后在体内外均可诱导血管平滑肌细胞发生衰老.但AngⅡ究竟通过哪条信号通路引起人血管平滑肌细胞衰老,衰老的细胞在RNA和蛋白质层面上到底发生了哪些改变,仍不清楚.为此,本研究通过转录组测序(RNA-seq),结合实时定量PCR(qPCR)以及Western blot等方法研究AngⅡ诱导人血管平滑肌细胞衰老中的基因表达谱改变及参与的信号通路,发现参与其他细胞衰老的TGF-β信号通路在AngⅡ诱导的人血管平滑肌细胞衰老中受损.研究进一步发现p38-p53-p21信号通路参与调控人血管平滑肌细胞的诱导衰老过程;而p38-p16信号通路则不参与此衰老调控.本研究也提供了证据支持p53的调控也发生在磷酸化水平上.     

c-fos在吸烟刺激骨吸收中的作用

目的探讨吸烟对人骨组织c—fos基因表达的影响。方法选取吸烟和不吸烟健康成年志愿者各10名,分为吸烟组和非吸烟组,吸烟组患者为每天吸烟20支以上,烟龄不少于10年;非吸烟组患者为不吸烟或每天吸烟不超过1支。各取约1克髂骨松质骨,提取其总RNA和总蛋白,采用RT—PCR测定C～fos mRNA的表达：采用Western blotting测定fos蛋白表达;采用免疫沉淀法测定fos蛋白磷酸化程度。结果吸烟组RT-PCR条带光密度值的c—fos／β-Actin比值高于非吸烟组的比值,差异有统计学意义（P〈0．05）。Western blotting检测,吸烟组c～fos的条带光密度值高于非吸烟组,差异有统计学意义（P〈0．01）。吸烟组c—fos免疫沉淀的条带光密度值高于非吸烟组,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论吸烟可以导致人骨组织c—fos基因与c—fos表达增加,其在骨质疏松发生中的作用有待进一步研究．     

蝉花提取物通过促进氧化胁迫应答抑制H2O2诱导的HeLa细胞衰老

本实验探究蝉花提取物(CCE)通过促进HeLa细胞的氧化胁迫应答抑制H2O2诱导的细胞衰老.在实验中,使用不同浓度的CCE处理HeLa细胞48h或72h,检测细胞的存活率.然后使用H2O2在HeLa细胞中诱导氧化胁迫,检测CCE处理组和对照组细胞的β 半乳糖苷酶活性和ROS水平的变化.HeLa细胞经CCE处理72h之后,提取RNA,通过实时荧光定量实验检测CAT、SOD1、SOD2、GPX1等抗氧化基因的表达量.结果表明：CCE抑制HeLa细胞的增殖,且呈剂量依赖效应,较低浓度的CCE（≦0.100mg/mL）对细胞生长无明显抑制作用.0.100mg/mL的CCE处理HeLa细胞72h后能够显著地促进CAT和SOD1 等基因的转录,从而降低H2O2产生的过量ROS,抑制细胞衰老.     

蝉花提取物通过促进HeLa细胞氧化胁迫应答抑制H_2O_2诱导的细胞衰老

本实验探究蝉花提取物(CCE)通过促进HeLa细胞的氧化胁迫应答抑制H_2O_2诱导的细胞衰老.在实验中,使用不同浓度的CCE处理HeLa细胞48h或72h,检测细胞的存活率.然后使用H_2O_2在HeLa细胞中诱导氧化胁迫,检测CCE处理组和对照组细胞的β-半乳糖苷酶活性和ROS水平的变化.HeLa细胞经CCE处理72h之后,提取RNA,通过实时荧光定量实验检测CAT、SOD1、SOD2、GPX1等抗氧化基因的表达量.结果表明:CCE抑制HeLa细胞的增殖,且呈剂量依赖效应,较低浓度的CCE(≦0.100mg/mL)对细胞生长无明显抑制作用.0.100mg/mL的CCE处理HeLa细胞72h后能够显著地促进CAT和SOD1等基因的转录,从而降低H_2O_2产生的过量ROS,抑制细胞衰老.     

TBX2基因沉默抑制卵巢癌细胞增殖同时促进细胞衰老发生

卵巢癌已成为致死率最高的妇科恶性肿瘤,缺乏特异性分子靶点是引起其高致死率的重要因素之一.TBX2是发育相关转录因子T-box基因家族成员之一,已证实其在黑色素瘤等多种肿瘤中异常表达.本实验通过免疫组化检测了人良性卵巢囊肿组织与卵巢癌组织中TBX2蛋白表达,并采用CCK8法、克隆形成实验、SA-β-Gal染色等方法,分析了在卵巢癌细胞中敲低TBX2后对细胞增殖和衰老的影响.结果表明TBX2在卵巢癌组织中高表达,同时TBX2基因沉默抑制了卵巢癌细胞增殖和克隆形成,诱导了P21WAF1和P16INK4A表达上调,促进了细胞衰老发生.     

血管内皮细胞凋亡过程中几种癌基因表达的研究

为了研究细胞凋亡的分子调控机制 ,用光学显微技术、DNA凝胶电泳和Northernblot方法 ,研究了去除生长因子 (FGF和血清 )和蛇毒诱导的两个血管内皮细胞凋亡系统中 p53、c H ras、c myc和bcl 2基因的表达 .发现去除生长因子诱导的细胞凋亡过程中 ,p53基因表达显著增加 ,c H ras和c myc基因表达无变化 ;蛇毒诱导细胞凋亡过程中 ,p53基因表达显著增加 ,c H ras和c myc基因表达无变化 .在正常生长和凋亡细胞中均未检测到bcl 2基因的明显表达 .实验结果表明 :p53基因参与上述两种细胞凋亡诱导系统的分子调控 ;c H ras基因只参与去除生长因子诱导的细胞凋亡过程 ,而不参与蛇毒诱导的细胞凋亡过程 ;这两种细胞凋亡诱导系统均与c myc基因表达无关 ;未见bcl 2基因明显参与血管内皮细胞的凋亡过程 .     

高浓度葡萄糖促进人二倍体成纤维细胞迅速衰老

利用光学显微镜观察和酸性β-半乳糖苷酶染色技术研究了高浓度葡萄糖对人二倍体成纤维细胞2BS细胞衰老进程的影响,并用流式细胞仪检测了此过程中活性氧和线粒体膜电位差的变化。结果表明：200 mmol/L的葡萄糖对2BS细胞有生长抑制作用,能引起活性氧含量的变化,导致线粒体膜电位差显著下降,并诱导了细胞的衰老。这为氧化损伤假说提供了新的证据,并为研究活性氧和复制衰老之间的关系提供了较好的体系。     

葡萄多酚酸奶的加工工艺

以葡萄籽浸提液、脱脂乳粉为原料,研制了一种新型的功能酸奶——葡萄多酚酸奶。从葡萄籽浸提液的添加方法和添加量对发酵速度和品质的影响,葡萄多酚酸奶配方的确定,葡萄多酚在酸奶加工中的变化等方面研究了葡萄多酚酸奶的制作工艺。结果表明:葡萄多酚酸奶的工艺为葡萄籽浸提液在灭菌前添加;适宜添加量为占葡萄多酚酸奶体积分数0.07;最佳配方为乳酸菌接种量为占葡萄多酚酸奶体积分数0.05,糖的质量浓度为100 g/L,环糊精的质量浓度为10 g/L,发酵时间4 h;葡萄多酚除在杀菌工艺中有所损失外,在发酵过程中非常稳定;葡萄籽浸提液对酸奶后酸化过程有轻微抑制作用。     

人胚肺二倍体细胞株KMB17在培养过程中的自然凋亡

用延长培养周期方法诱导人二倍体胚肺细胞株ＫＭＢ１７自然凋亡,经光学显微镜、荧光显微镜、细胞流式仪、电子显微镜,证明ＫＭＢ１７细胞出现典型的凋亡特征：细胞圆缩、细胞核浓缩破裂、核染色质凝缩后分布于核膜边缘呈新月状和典型的凋亡峰．研究表明人胚肺二倍体细胞（ＫＭＢ１７）在培养过程中易出现自然凋亡．提示可望通过提高细胞对环境压力的耐受能力,预防或延缓细胞培养过程中的自然凋亡,提高操作单元细胞产品的生产效率．     

基于HPLC的葡萄籽提取物指纹图谱的建立

葡萄籽提取物是一种高效的抗氧化剂,其抗氧化效果远高于绿茶等。利用反相HPLC建立葡萄籽提取物的中药指纹图谱,以便于对其质量的优劣进行监测。实验分析了12个不同产地的葡萄籽提取物样品,采用了国家食品药品监督管理局推荐的"中药色谱指纹图谱相似度软件评价系统(2004 A版)"计算处理。建立了25个指纹峰、6个共有峰,确定了3个主要的指纹峰。通过夹角余弦法计算了12个产地的葡萄籽提取物的相似度。建立的指纹图谱可以用来评价不同产地葡萄籽提取物的优劣;并依此为标准,为进一步控制葡萄籽提取物的质量提供依据。     

三元乙丙橡胶紫外老化表观行为及纳米防老化剂作用机制

基于荧光紫外加速老化实验,追踪三元乙丙橡胶的老化过程,研究添加纳米防老化剂对材料表观老化行为和抗老化能力的影响,并利用傅里叶红外光谱和紫外吸收光谱分析纳米防老化剂的作用机制.随着老化时间的延长,试样表面粗糙度增加,色差和失光率变大,羰基指数上升,紫外吸收率下降.傅里叶红外光谱分析显示,表面二氧化硅膜包覆抑制了纳米二氧化钛的光催化作用,延缓了三元乙丙橡胶的老化进程.添加纳米防老化剂后,试样表面孔洞密度减少,色差和失光率分别降低0.97和22.29%,羰基指数下降0.06,紫外光吸收率升高3.92%,三元乙丙橡胶的抗紫外老化能力提高.     

基于粘度和延度变化的沥青抗老化性能评价方法

针对当前道路沥青的抗老化性能评价方法的不足,研究了5种道路沥青老化过程中的粘度和延度的变化规律,提出了基于135℃粘度和15℃延度的沥青抗老化性能评价方法,并建立了评价沥青抗老化性能的老化度和抗老化系数指标。研究结果表明:该评价方法及指标可以区分不同沥青在整个老化过程中的抗老化性能,评价指标中老化度可以评价不同老化时间的老化程度,有助于预测沥青路面在老化作用下出现开裂病害的时间;抗老化系数体现了沥青本身的抗老化性能,为沥青的选择提供了依据。     

利福定对果蝇寿命的影响

本文研究利福定喂饲果蝇对其寿命的影响。试验组液体饲料分别含利福定10、5和2.5ppm,结果发现这三个浓度的利福定对果蝇均有延寿效应,其中,10ppm的利福定对雄果蝇的延寿效果最好,平均寿命延长22.4％(p<0.05),5ppm的利福定对雌果蝇的延寿效果最好,平均寿命延长19.2％(p<0.05)。而且,它们的最高寿命也有显著延长,提示利福定是一种较好的抗衰老药物。     

响叶杨(Populus adenopoda)种子的形成及其寿命

<正>用显微技术及软X射线摄影,定位观察响叶杨种子发育过程中的形态变化与胚胎发育的对应关系。根据观察、试验的结果,讨论了环境条件与种子寿命的关系;还测定了响叶杨种子寿命的变化规律及其影响因素,探索延长这种子寿命的方法。