用静息细胞培养法研究L—谷氨酸氧化酶的生物合成

建立了静息细胞培养系统，并以此研究了Ｌ－谷氨酸氧化酶生物合成的影响因素。结果表明，发酵１６ｈ的菌体在有诱导物情况下有酶的合成，无诱导物则无酶的合成，发酵４０ｈ的菌体在有，无诱导物的条件下均有酶的合成。对发酵１６ｈ的菌体研究表明：β－丙氨酸（Ｉ），α－酮戊二酸（Ⅱ），丙酮酸钠（Ⅲ）是酶合成的诱导物，谷氨酸（Ⅳ）则不是。而对发酵４０ｈ菌体而言：ＭｇＣｌ２，ＣａＣｌ２能促进酶的合成；Ｉ不能作氮源利用；Ｉ     

谷氨酸酶促反应中光替代谷氨酸氧化酶的研究

在弱碱性（ｐＨ＝１０．６）介质中,紫外光的照射引起谷氨酸的光化学反应,产生Ｈ２Ｏ２和ＮＨ３,与谷氨酸氧化酶存在下的酶促反应等效。以萘斯勒试剂使产物中的ＮＨ３显色并用分光光度法测定,以及以氯化血红素（ｈｅｍｉｎ）作为过氧化物酶的替代物,催化产物中的Ｈ２Ｏ２氧化、偶联对羟基苯乙酸（ＨＰＡ）的荧光反应并进行荧光检测。据此分别建立了间接测定谷氨酸的新方法。     

L-谷氨酸氧化酶高产菌株的快速筛选及诱变育种

用谷氨酸氧化酶测试液浸湿白卷纸置于菌落上,根据白卷纸上显示红色快慢、深浅,就能大致测得该菌落菌株产酶能力高低。该法可靠性大、工作量小、操作简便,显示结果快。利用该法,配合亚硝酸诱变,在短暂三个月内,将L-谷氨酸氧化酶产生菌株产酶能力提高了约25倍。     

用静息细胞培养法研究L－谷氨酸氧化酶的生物合成

建立了静息细胞培养系统，并以此研究了Ｌ－谷氨酸氧化酶生物合成的影响因素。结果表明，发酵１６ｈ的菌体在有诱导物情况下有酶的合成，无诱导物则无酶的合成，发酵４０ｈ的菌体在有、无诱导物的条件下均有酶的合成。对发酵１６ｈ的菌体研究表明：β－丙氨酸（Ⅰ）、α－酮戊二酸（Ⅱ）、丙酮酸钠（Ⅲ）是酶合成的诱导物，谷氨酸（Ⅳ）则不是。而对发酵４０ｈ菌体而言：ＭｇＣｌ＿２，ＣａＣｌ＿２能促进酶的合成；Ⅰ不能作氮源利用；Ⅰ～Ⅳ均具有高浓度抑制产酶、低浓度促进产酶的双重作用。     

L-谷氨酸氧化酶产生菌理性化筛选及液体发酵的研究

采用HNO_2诱变、平皿显色与理性化筛选方法,获得一株L-谷氨酸氧化酶高产稳定菌株Streptomyces sp.N_514。建立了液体发酵产酶的条件,考察了辅加成分对酶合成的影响。     

γ-聚谷氨酸锰的制备及其性质研究

 用γ-聚谷氨酸(γ-PGA)作为载体,鏊合金属离子锰,制备成一种新型的自由基清除剂.通过微生物发酵得到γ-PGA,将γ-PGA与MnSO₄按不同物质的量比反应,用ICP测定结合率,并对产物进行结构表征.用SOD试剂盒检测其体外抗氧化活性.结果发现γ-PGA经121℃高压、酸降解后得到分子质量为15000u左右的小分子γ-PGA.当COO^-与Mn²⁺物质的质比为1:2时,结合率可高达91%.经检测γ-PGA-Mn具有缓释能力,其SOD活性为2513.78U/mL.通过本研究得到的聚合物具有良好的抗氧化作用及缓释作用.     

谷氨酸脱氢酶(GDH)的性质

考察了GDH催化的最适条件:40℃,pH8.5,磷酸盐缓冲液离子强度为0.25mol/L.酶活性稳定的pH范围为5.5～9.0.甘油对GDH的热变性有明显的保护作用.     

牛奶黄嘌呤氧化酶的纯化及性质研究

本文建立从牛奶中分离纯化黄嘌呤氧化酶的工艺,该工艺采用正丁醇-硫酸铵分级提取、磷酸钙凝胶吸附、SephadexG-150层析纯化获得纯品．从磷酸钙凝胶上解吸到的XOD粗酶比活性达5．096I．U／mg－pr,提纯340倍,产率达74．3％．每单位粗酶的吸附剂用量以6mg为最佳．纯酶的最大紫外吸收在285nm处,酶活性测定的最适pH在8．60～10．15之间,最适温度在25℃～35℃间．1mol／LKCN、1．5％H2O2及甲醇对酶活力都有明显的抑制作用．经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示两条蛋白带．经黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶-Luminol（XOD－X－Luminol）发光体系检测结果表明20μl牛奶XOD（相当0．181．UXOD）的发光强度最大,其发光值受抑制50％的超氧化物歧化酶（SOD浓度（IC50）为1．14μg／ml（相当0．514USOD）．     

牛奶黄嘌呤氧化酶的纯化性质研究

本文建立从牛奶中分离纯化黄嘌呤氧化的酶的工艺,该工艺采用正丁醇－硫酸铵分级提取、磷酸钙凝胶吸附、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０层析纯化获得纯品。从磷酸钙凝胶上解吸到的ＸＯＤ粗酶化活性达５．０９６Ｉ．Ｕ／ｍｇ－ｐｒ,提纯３４０倍,产率达７４．３％。每单位粗酶的吸附剂用量以６ｍｇ为最佳。纯酶的最大紫外吸收在２８５ｎｍ处,酶活性测定的最适ｐＨ在８．６０～１０．１５之间,最适温度在２５℃～３５℃间。１ｍｏｌ／     

葡萄糖氧化酶修饰聚二甲基硅氧烷-纳米金电极的制备及其应用

利用聚二甲基硅氧烷-纳米金表面生物亲和性结合葡萄糖氧化酶,制备了葡萄糖氧化酶修饰的聚二甲基硅氧烷-纳米金软电极,并用计时安培法在磷酸盐缓冲体系中研究其对葡萄糖的催化氧化,实验结果表明该酶电极对葡萄糖具有明显的催化能力且在葡萄糖浓度为0.66 mM～100 mM的范围内,响应电流与葡萄糖浓度呈良好的线性关系。     

三相分离甾短杆菌胆固醇氧化酶及其性质

三相分离(TPP)是将硫酸铵与叔丁醇混合后形成有机相、中间沉淀相和水相。在20°C,调节发酵上清液的pH至6.0,加入硫酸铵使终浓度为400 g/L,溶解后加入与上清液等体积的叔丁醇,静置1 h分相,胆固醇氧化酶在有机相和水相之间形成蛋白沉淀,12 000 r/min离心10 min收集中间蛋白相,用pH 7.5,10 mmol/L的磷酸缓冲液溶解。结果表明:利用三相分离技术从乳化体系中分离纯化胆固醇氧化酶,比酶活提高了3.49倍,收率达93%。回收的酶液进一步经过DEAE-Sepharose Fast Flow纯化,比酶活从3.56 U/mg提高到30.15 U/mg。该酶最适反应温度为60°C,最适反应pH为7.5,酶的等电点为8.5,该酶在37°C,pH 6.0~8.0较为稳定。Hg2 和Ag 离子完全抑制胆固醇氧化酶的活性。     

大肠杆菌谷氨酸脱羧酶的纯化及其性质的研究

大肠杆菌菌体经机械研磨,硫酸铵分级,sephadex G-100层析,再用聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳进行纯化,得到电泳均一的 L-谷氨酸脱羧酶纯品.酶作用的最适pH 为4.4,在 pH3.6～5.8稳定;最适温度50℃,50℃以下稳定;于60℃保温30min,酶活力保留65%.此酶作用于 L-谷氨酸的 K_m 值为1.39×10~(-2)mol/L,金属离子 Zn~(2+),Cu~(2+),Mg~(2+),Fe~(2+)分别不同程度的抑制此酶,EDTA 无抑制作用.该酶在280nm 处有最大光吸收,与蛋白质在280nm 处有最大光吸收值的普遍性质相一致.     

多酚氧化酶在逆向胶团中的动力学性质与稳定性

本文研究了马铃薯多酚氧化酶在AOT/正己烷和Triton Χ-100/环己烷-正丁醇两种逆向胶团中的动力学性质和稳定性。研究表明,酶在AOT/正己烷中有较高的活性和很低的稳定性,而在Triton Χ-100/环己烷-正丁醇中有较低的活性和较高的稳定性。酶的活性和稳定性与胶团中水的体积分数（θ）相关。其动力学常数K_m则与水相接近。     

固载葡萄糖氧化酶的壳聚糖/二氧化硅杂化膜的制备及表征

利用生物相容性良好的天然高分子聚合物壳聚糖(CS)与甲基三甲氧基硅烷(MTOS)通过原位溶胶-凝胶法制备壳聚糖/二氧化硅有机无机杂化复合膜,用此膜对葡萄糖氧化酶进行固定,用红外光谱法、扫描电镜法对膜进行了表征.以电沉积普鲁士蓝的玻碳电极和固定化酶膜构建葡萄糖生物传感器,用循环伏安法和记时电流法对固定化酶的效果进行了评价,结果表明,用于研制固定化酶生物传感器时,杂化膜比单纯的壳聚糖膜对底物的响应时间快并能很好地保持酶的活性.     

P-5m八肽多克隆抗体的制备及应用

目的制备P-5m八肽的多克隆抗体并进行初步鉴定和应用,为研究P-5m八肽的功能及作用机制获得重要的实验工具.方法将9-氟甲氧羰基(Fmoc-)固相合成法合成的P-5m八肽纯化后与载体蛋白-血蓝素联接;取偶联后的多肽皮下注射免疫新西兰白兔,并加强免疫得到抗血清,以C18反相色谱分离柱分离纯化;通过间接ELISA方法测定血清效价;利用Transwell实验和Western blot方法初步鉴定多克隆抗体拮抗P-5m八肽抑制肿瘤细胞转移的效果.结果纯化后的抗体经间接ELISA测定效价均大于1∶160 000,表明获得高效价的多抗;通过Transwell实验证明该抗体能够封闭P-5m对肿瘤细胞侵袭的抑制能力;通过Western blot方法证实此抗体效价较高,特异性较强;该多克隆抗体能够封闭P-5m在SW620细胞中上调E-cadherin表达的作用,并阻遏P-5m对MMP-2和MMP-9表达的下调作用,与对照组比较差异具有统计学意义(P0.05).结论 P-5m多克隆抗体可用于Transwell和Western blot等实验,为研究P-5m八肽的功能及抗肿瘤转移作用机制提供实验依据.     

Preparation and Mechanical Properties of a Novel Textile Pad for Wound Debridement

Various types of wound debridement approaches are currently available in clinical practice such as autolytie, enzymatic. biodebridement, mechanical, and surgical debridemenl techniques. A critical look at these various options can explain their potential but also their limitations. In this study, a novel textile pad, which is composed of polyester filaments on the fleecy side and a bioeompatible coating on the opposite side, was made to provide a safe, inexpensive, easier and especially more efficient debridement process that can be used in all healthcare settings by all healthcare practitioners. Eighteen kinds of samples were prepared with different pile density, ground yarn count and coating amount. Dimensional morphology, stitch density, mass per unit area and mechanical properties were investigated to study the intrinsic relationship of structure and properties of textile pad for wound debridement. Results showed that tensile strength and suturing strength at piped site increased obviously with the increment of ground yarn count, while the amount of coating could also have a slight impact on these two properties. However, compressive load was mainly affected by pile density, with no obvious relation to ground yarn count and coating amount.