沙棘叶多酚的分离纯化及其活性分析

近年来，药食同源植物因其绿色环保引起了人们极大的关注。山西省是沙棘资源大省之一，但其开发利用远远不足。沙棘叶中富含黄酮、多酚、萜类等化合物，具备较好的保健与医药价值。因此，本研究优化了沙棘叶中自由酚、结合酚的提取，并对其抑制肿瘤细胞生长活性进行评价。首先比较了80%丙酮、80%乙醇、超纯水、80%甲醇、80%乙酸乙酯5种溶剂提取了沙棘叶自由酚的效率，结果发现沙棘叶甲醇提取物中总酚、黄酮、单宁含量均显著高于其他溶剂，且较其它4种溶剂的提取物，其对结肠癌细胞表现出显著的增殖抑制作用。然后采用不同的水解方法从甲醇提取自由态多酚后的沉淀物中提取沙棘叶结合酚，结果表明碱水解法得到的总酚、黄酮、单宁含量及对肿瘤细胞生长抑制活性显著高于酸水解法，且高于自由酚。为得到较纯的活性多酚，进一步分别选用极性、非极性的大孔树脂进行纯化，筛选出最优树脂为HPD600。然后用30%、60%、95%的乙醇梯度洗脱多酚，发现60%的乙醇洗脱液具较强抑制肿瘤细胞增殖的作用。本研究的实施为我省野生沙棘资源在生物医药领域的开发利用提供了理论依据。     

萌发青稞营养成分、多酚含量及抗氧化活性研究

以瓦蓝、14-946、昆仑15号青稞为原料,研究了不同萌发时间对青稞主要营养成分、多酚含量及抗氧化活性的影响。结果表明:在萌发期间,青稞中的总淀粉、β-葡聚糖、游离酚、结合酚、总酚及游离黄酮含量呈下降趋势,脂肪、蛋白、纤维及结合黄酮与总黄酮含量呈上升趋势。萌发处理显著提高了参试青稞游离态提取物清除DPPH自由基能力,降低了青稞游离态提取物的铁离子还原能力及ABTS自由基的清除能力;显著降低了参试青稞结合态提取物清除DPPH自由基、ABTS自由基能力及铁离子还原能力。蓝色青稞(瓦蓝)经萌发后其游离态提取物具有较强抗氧化活性,黑粒青稞(14-946)经萌发后其结合态提取物能保存较强的抗氧化活性。相关分析表明,青稞中主要营养成分(脂肪、总淀粉、纤维、β-葡聚糖)含量与多酚及抗氧化活性有显著的相关性,营养成分含量的高低可以用来评估其酚类物质含量与抗氧化活性;游离酚、结合酚与3种抗氧化能力均呈极显著正相关,说明酚酸类物质是青稞不同形态多酚提取物抗氧化活性的主要贡献者,这为选择专用型青稞品种提供了便捷的方法。萌发可以改变青稞中的营养成分、多酚含量及抗氧化活性,因此选择合适的青稞籽粒颜色与适宜的萌发时间能更好地保留青稞的生物活性物质,有益于青稞资源的开发利用。     

不同品种肉桂中酚类物质抗氧化和抑制糖消化酶活性比较研究

为研究肉桂中酚类物质体外抗氧化活性和抑制糖消化酶活性,以台湾土肉桂、清化肉桂、云野肉桂和西江肉桂4个品种肉桂为研究对象,分析其游离态和结合态多酚含量、游离态和结合态黄酮含量以及游离态和结合态多酚粗提物抗氧化能力和体外抑制糖消化酶活性,并对肉桂游离态和结合态多酚、游离态和结合态黄酮含量与其体外抑制糖消化酶活性进行相关性分析。通过UHPLC-MS/MS法对4个品种肉桂游离态酚类化合物进行分析。研究结果表明:4个品种肉桂中总多酚和总黄酮含量分别为58.99～71.62mg/g和46.49～58.05mg/g,游离态多酚和黄酮含量明显高于结合态多酚和黄酮含量；品种对肉桂的抗氧化活性和糖消化酶抑制活性影响显著,其中台湾土肉桂的抗氧化活性和糖消化酶抑制活性都显著高于其他3个品种(P＜0.05)；游离态和结合态多酚含量、游离态和结合态黄酮含量与α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶和蔗糖酶的IC₅₀之间具有显著的负相关性(P＜0.05)。进一步通过UHPLC-MS/MS发现,原花青素类、槲皮素-3-O-葡萄糖苷和芦丁可能是肉桂抑制糖消化酶的主要活性物质。对不同品种肉桂生物活性差异的研究能够为肉桂的品种筛选、精深加工和高效利用提供理论参考。     

荔枝果肉多酚不同极性分部的构成谱及其抗氧化活性比较

利用乙酸乙酯和正丁醇2种不同极性溶剂对荔枝果肉多酚提取物水溶液分部萃取,采用高效液相色谱分析不同极性分部萃取物的多酚组分及其含量差异,并采用细胞抗氧化法评价其抗氧化活性差异。结果表明:荔枝果肉多酚不同极性分部的得率、总酚含量、总黄酮含量、多酚组成及含量、抗氧化活性存在显著性差异。3个极性分部萃取物的得率以水相最高(36%),正丁醇相(32%)次之,乙酸乙酯相(16%)最低。总酚含量以乙酸乙酯相最高,正丁醇相次之;总黄酮含量以正丁醇相最高,乙酸乙酯相次之;而抗氧化活性以正丁醇相最强,水相次之。乙酸乙酯相多酚组成主要为原花青素B2、表儿茶素等原花青素类化合物;正丁醇相多酚组成主要为槲皮素-3-芸香糖-7-鼠李糖苷等黄酮类化合物。     

白花菜子不同溶剂提取物总多酚、总黄酮含量及抗氧化活性测定

测定了白花菜子四种不同溶剂提取物的总多酚含量、总黄酮含量和体外抗氧化活性。以没食子酸为对照品,采用福林-酚试剂法测定白花菜子提取物中总多酚的含量;以芦丁为对照品,采用可见-紫外分光光度法测定白花菜子提取物中总黄酮的含量。通过测定DPPH自由基清除率、氢氧基清除率和还原能力来评价白花菜子提取物的抗氧化活性。在四种白花菜子不同溶剂提取物中,总黄酮含量从高到低的顺序为乙酸乙酯提取物(CAEE)甲醇提取物(CME)石油醚提取物(CPEE)二氯甲烷提取物(CCE);总多酚含量从高到低的顺序为CMECAEECPEECCE。白花菜子提取物各种方法抗氧化活性从高到低的顺序为CMECAEECPEECCE,与总多酚含量顺序一致。结果表明白花菜子乙酸乙酯提取物总黄酮含量最高,白花菜子甲醇提取物总多酚含量最高,且甲醇提取物具有很强的抗氧化活性,可以用作抗氧化药物或食品添加剂,因此有必要对白花菜子的化学成分、体内抗氧化活性和机理进行深一步的研究。     

秦艽不同提取物中3种环烯醚萜苷的含量测定

测定陕西陇县和凤县地区10批秦艽药材水提取物和80%乙醇提取物中龙胆苦苷、落干酸、獐牙菜苦苷3种活性成分的含量。采用HPLC-ELSD法,Hedera C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.5%乙酸为流动相,进行梯度洗脱分离检测。结果显示80%乙醇提取的提取物量高于水提取的提取物量,以及醇提取物中龙胆苦苷、落干酸、獐牙菜苦苷的含量都比水提取物中的含量高,并且提取物中这3种活性成分以龙胆苦苷含量最高,落干酸次之,獐牙菜苦苷含量较低。表明通过80%的乙醇对秦艽药材中化学成分提取的效果优于水提取。     

库鲁木提草中多酚的提取工艺优化及其抗氧化活性的研究

探讨正交设计法优化库鲁木提草中多酚的提取工艺并测定库鲁木提草多酚抗氧化作用.采用正交设计方法考察了提取温度、超声时间、料液比和溶剂体积分数对多酚收率的影响,获得了多酚的最佳提取条件.以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2,1-连氮基-双-(3-乙基并二氢噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)和羟基研究了提取多酚对自由基的清除能力;利用铁离子还原法测定多酚提取物的抗氧化活性能力.结果显示库鲁木提草多酚的最佳提取条件为超声波时间30 min,超声温度35℃、溶剂浓度30%、料液比1∶120 g/mL的条件下,多酚提取率最高.随着库鲁木提草多酚浓度的提高,对·DPPH、·ABTS、·OH的清除率以及铁离子还原能力增大.研究结果表明,库鲁木提草中的多酚具有一定的抗氧化活性,并且清除能力与多酚浓度成正比.     

白花蛇舌草中多糖抑制骨肉瘤的作用机制

为探讨白花蛇舌草(Hedyotis diffusa)活性成分对骨肉瘤的作用及其机制,对白花蛇舌草中分别提取的黄酮类、三萜酸类、香豆素类和多糖类化合物,用噻唑蓝(MTT)法检测不同提取物对MG-63细胞活性的影响;同时建立裸鼠骨肉瘤移植瘤模型,观察不同提取物对移植瘤生长的抑制作用;并通过流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化,蛋白质免疫印记(Western blot)检测Bax及Bcl-2蛋白表达水平.结果显示:4种提取物都对MG-63细胞的增殖具有明显抑制作用,并呈现明显的剂量依赖性,最优药物质量浓度为80μg/mL;在此质量浓度下4种提取物对裸鼠移植骨肉瘤均具有抑制作用,其中多糖类对MG-63细胞活性和移植瘤生长的抑制作用最强,明显促进MG-63细胞凋亡,阻滞细胞周期;Bax表达量在48h内随着白花蛇舌草多糖类提取物作用时间延长而增加,而Bcl-2表达量则降低.由上述结果可知,白花蛇舌草活性成分中多糖类的抗肿瘤活性最强,其作用机制可能是通过抑制骨肉瘤细胞增殖、促进细胞凋亡和阻滞细胞周期来达到抑瘤效果.     

海带抗氧化多酚的制备及活性研究

用1:1的氯仿:甲醇超声提取海带成分,并用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇依次进行萃取,利用DPPH法、邻二氮菲-Fe2+氧化法、铁氰化钾还原法和邻苯三酚自氧化进行抗氧化实验,同时与抗氧化剂2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)和没食子酸(GA)进行对照。结果显示海带提取物与各萃取组分均具有较强的抗氧化能力,其中乙酸乙酯提取物(EA)抗氧化活性最强。在50μg/mL浓度时,EA清除DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基的能力和还原能力均高于抗氧化剂BHT,且清除超氧阴离子自由基的能力也高于GA;另外,Aqueous组分在所有测定浓度下清除羟自由基能力均高于GA,清除O2-的能力也高于BHT。海带各提取物总酚含量的分析表明总酚含量与抗氧化活性之间具有一定的相关性,总酚含量高其抗氧化能力也相应提高,表明多酚是提取物中重要的抗氧化成分。4种抗氧化方法的比较表明DPPH法的相关系数最高(R=0.987),是海带体外抗氧化实验最有效的方法。     

麻栎树皮多酚含量的测定及抗氧化活性的研究

采用分光光度法、DPPH法和连苯三酚红(PR)法对麻栎树皮提取物进行多酚化合物含量及抗氧化活性测定,讨论了用不同溶剂提取对多酚含量的影响.结果表明采用70%乙醇进行提取,提取物中多酚含量最高,为(6 589.91±43.32)mg/100 g.抗氧化活性测试中,麻栎树皮的不同溶剂提取物对DPPH自由基和羟自由基都表现出较高的清除率,其中麻栎树皮70%丙酮提取物的活性最好,在0.18 mg/m L质量浓度下,对DPPH自由基清除率为70%,在0.38 mg/m L质量浓度下,对羟自由基氧化率为75%.     

美洲大蠊提取物对3株人肺癌细胞的体外抑制作用

目的:观察美洲大蠊提取物(CⅡ-3)对3株人肺癌细胞的细胞毒作用,探讨CⅡ-3对人肺癌细胞的体外抗肿瘤活性.方法:采用MTT法观察CⅡ-3对3株人肺癌细胞的影响.结果:CⅡ-3对3株人肺癌细胞的生长均有一定的抑制作用,在最高浓度(300μg/ml)时抑制率几乎为100%,且存在一定的剂量依赖性和时间依赖性.结论:CⅡ-3对3株人肺癌细胞生长有抑制作用,值得进一步研究.     

荔枝果肉不同极性多酚提取及其抗氧化活性比较

分别选用体积分数为60％乙醇和80％丙酮从荔枝果内中提取多酚,并用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水等4种不同极性溶剂对其多酚提取物进行分部萃取,采用DPPH自由基法、FRAP法和ABTS法比较荔枝果肉不同极性多酚的体外抗氧化活性差异.结果表明,采用80％丙酮提取的荔枝果肉多酚提取物的ABTS抗氧化活性显著强于60％乙醇提取...     

三种不同植物多酚提取物的抗真菌活性研究

采用紫外分光光度法对三种不同植物材料的多酚提取物进行了总多酚含量测定,并采用试管液基稀释法在不同的温度条件下对粗提物进行了抗真菌活性试验,测定其最低抑菌浓度(MIC)。试验结果表明,不同的楹度对多酚粗提物的抑菌性有一定的影响;龙血竭的总多酚含量最高,对全部供试真菌具有显著抗菌活性,其[MIC]为(0.078-20.0)mg/mL;落叶松和樟子松树皮提取物的总多酚含量次之,对大部分供试菌株具有抑制作用,其[MIC]为0.156 mg/mL-20.0 mg/mL。     

藏药沙棘枝叶多糖的提取与含量测定

目的确定得糖率最高的提取部位并测定该部位提取物中多糖含量.方法以沙棘枝叶多糖得率为标准,通过超声波辅助-乙醇回流脱脂-热水浸提提取方法,比较水提取物、甲醇提取物、乙酸乙酯提取物的得糖率;Sevage法除蛋白后,采用苯酚-浓硫酸法测定沙棘多糖中总糖的含量.结果乙酸乙脂提取物、甲醇提取物、水提物部位的得糖率分别为4.01%、4.84%、6.42%,且水提物中总糖平均含量为28.51%.结论超声波辅助方法提取沙棘枝叶中的多糖,得糖率高;苯酚-浓硫酸法测定沙棘枝叶中多糖含量的方法简便、灵敏、准确,适合于沙棘多糖含量的测定.     

沙棘果渣三萜酸富集、表征及其体外α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

为提高沙棘果渣的综合利用价值,采用十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)填料减压洗脱法对沙棘果渣中的三萜酸进行富集制备,并通过高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(HPLC-Q-TOF-MS/MS)对其中含有的三萜酸类化合物进行了表征,同时对其α-葡萄糖苷酶的抑制活性进行了评价。结果表明,富集后总三萜酸质量分数从10.20%提高到了75.01%。HPLC-Q-TOF-MS/MS结果显示,富集后三萜酸含量最高的组分中含有麦珠子酸、山楂酸、科罗索酸、齐墩果酸、熊果酸及其衍生物在内的11种五环三萜类化合物。α-葡萄糖苷酶抑制实验结果表明:三萜酸含量最高的组分半抑制浓度IC₅₀为(0.040±0.160)mg/mL,活性显著高于阳性对照阿卡波糖,说明沙棘果渣中的三萜酸成分具有降低糖尿病患者餐后血糖的潜在能力。ODS减压洗脱法富集三萜酸,极大地提高了三萜酸的含量,并具有较高的回收率,研究以期为沙棘果渣三萜酸的综合利用提供一定的理论基础和数据支持。     

沙棘果总黄酮提取工艺及抗氧化性研究

以沙棘果为原料,乙醇溶液为主要溶剂,沙棘果总黄酮提取量为评价指标,采用超声波辅助法在单因素实验基础上结合响应面分析法,综合考察了超声提取时间、提取温度、提取液(乙醇)体积分数、液料比4因素对沙棘果总黄酮的提取量影响.结果表明,沙棘果中总黄酮的最佳提取条件为：超声提取时间34 min、提取温度77℃、提取液(乙醇)体积分数60%、料液比22.8∶1.在此工艺条件下沙棘果总黄酮得率为5.694 mg/g,与理论预测值5.770 mg/g的RSD值为1.33%,小于5%,模型拟合性良好.对制得的沙棘果总黄酮提取物粗品,采用清除DPPH自由基法与羟自由基法,以同浓度的维生素C溶液作为阳性对照,进行体外抗氧化活性测定.按清除DPPH自由基法得到的维生素C、沙棘果提取物的IC₅₀值分别为0.13、2.32 mg/mL,按羟自由基法得到的IC₅₀值分别为0.11、0.45 mg/mL,说明沙棘果总黄酮具有较好抗氧化活性.     

补血草不同部位多酚提取物的抗氧化能力

采用多种体外评价体系研究了补血草不同部位多酚提取物的抗氧化能力,结果表明:在4种不同的检测体系中,补血草根、根茎、叶和花的多酚提取物表现出不同的抗氧化能力水平.还原力从大至小依次为根>根茎>叶>花;FRAP值和TEAC值大小顺序依次分别为根>根茎≈叶>花,根≈根茎≈叶>花;而对β-胡萝卜素-亚油酸漂白的抑制作用大小为花>叶>根>根茎.光谱分析显示,根、根茎和叶提取物及花提取物的主要组分分别为原花色素类和黄酮类.在不同评价体系中,补血草不同部位多酚提取物的抗氧化能力与原花色素含量(R2=0.5450～0.9201),与黄酮含量(R2=0.7764～0.9993)均呈显著正相关.可见,补血草多酚提取物具有很强的体外抗氧化能力,且活性强弱与其原花色素和黄酮含量的高低密切相关.     

阴地蕨、银粉背蕨总黄酮和总酚含量及其抗氧化能力分析

测定了阴地蕨(Botrychium ternatum (Thunb) Sw.)和银粉背蕨(Aleuritopteris argentea(Gmel.) Fee)乙醇提取物的总黄酮和总酚含量,及其对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的清除能力、2,2'-联氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基的清除能力和Fe的还原力.结果表明:1)阴地蕨和银粉背蕨乙醇提取物样品中总黄酮质量分数在4. 2～41. 2 mg·g~(-1)之间,总酚质量分数在3. 9～16. 4 mg·g~(-1)之间,两者地上部分总黄酮和总酚含量均高于地下部分的,阴地蕨与银粉背蕨的总黄酮和总酚含量存在一定差异; 2)阴地蕨和银粉背蕨的乙醇提取物对DPPH、ABTS自由基具有一定的清除能力及还原力,且提取物抗氧化活性与总黄酮和总酚含量存在浓度依赖.     

草玉梅抗肿瘤活性成分的分离与鉴定

对毛茛科银莲花属植物草玉梅(Anemone rivularis)根茎的乙醇[(乙醇)=95%]提取物采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法进行抗肿瘤活性测试.活性筛选结果表明:草玉梅乙醇[(乙醇)=95%]提取物的石油醚萃取物(Ⅰ)、乙酸乙酯萃取物(Ⅱ)和正丁醇萃取物(Ⅲ)对人肝癌细胞株(QGY-7703)、人结肠癌细胞(COLO-205)和人肺癌细胞(A549)具有不同的抑制作用.经反复纯化制备化合物,从乙酸乙酯萃取物中分离出4个化合物,根据化合物的理化性质分析、波谱解析、对照品比较以及与文献报道对比,鉴定出化合物的化学结构分别为4-羟基苯甲酸(1)、3-羟基-4-甲氧基苯甲酸(2)、香豆酸(3)和咖啡酸(4).化合物1─4为从该属植物中首次分离得到.     

不同品种龙眼果肉酚类物质的抗氧化活性比较

为研究不同龙眼品种资源中酚类物质、黄酮类化合物含量及其抗氧化性差异,选取广东省农业科学院果树研究所龙眼资源圃的24个龙眼品种,分析其果肉中游离态和结合态总酚、总黄酮物质的含量,采用DPPH自由基清除能力、ABTS总抗氧化能力、FRAP抗氧化能力和氧自由基吸收能力ORAC四种不同方法评价其体外抗氧化能力差异;不同龙眼品种果肉总酚、总黄酮含量与DPPH、ABTS、FRAP、ORAC四种不同方法测定的抗氧化能力的变幅和变异系数较大,呈现出显著的基因型差异;不同品种龙眼果肉的多酚和黄酮的含量分别与ABTS自由基清除能力、FRAP和ORAC呈极显著(p<0.01)正相关关系,而与DPPH自由基清除能力的EC₅₀值呈极显著负相关关系(p<0.01)。采用快速聚类法将24个不同品种的龙眼聚成多酚及总黄酮含量和抗氧化能力差异显著的三大群类。不同品种龙眼果肉游离态和结合态酚类物质含量与其抗氧化活性均呈显著正相关关系,提示酚类物质是龙眼果肉抗氧化活性的主要成分;酚类物质和黄酮类物质在龙眼果肉中主要以游离态存在,其中结合态平均占总酚含量的17.45%。