经水摄入三氯乙烯对BALB/c小鼠干扰素-γ和白细胞介素-4的影响

探讨经水摄入三氯乙烯(TCE)对BALB/c小鼠的干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)的影响。将60只BALB/c雌性小鼠随机分为3组:空白对照组、溶剂对照组和TCE染毒组,每组20只,TCE染毒组经饮水摄入2.5g/L TCE,染毒2、4、8、12周,每组各处死5只小鼠,取其外周血和脾脏。利用免疫组化法检测脾脏组织中IFN-γ和IL-4的表达,ELISA法检测外周血血清中IFN-γ和IL-4的含量。与空白对照组和溶剂对照组相比,TCE染毒组小鼠脾脏与血液中IFN-γ和IL-4的表达明显上升,IFN-γ/IL-4比例明显下降,且差异有统计学意义。经水摄入TCE能够同时上调小鼠体内IFN-γ和IL-4的表达,进而可能上调Th1和Th2细胞免疫应答,而Th2细胞上调更占优势,故Th1/Th2比例下降。     

白细胞介素23与小鼠支气管哮喘相关性研究

目的通过检测哮喘鼠血清中白细胞介素23(IL-23)在哮喘组和对照组中的水平及与IL-5,IFN-γ,IL-17之间的相关性,探讨其在哮喘病中的作用.方法将24只健康雌性BALB/C小鼠随机分为两组,卵白蛋白(OVA)致敏并激发的哮喘模型组(Asthma,简称A组)和正常对照组(Control,简称C组),每组12只,OVA致敏末次激发24 h后,各组小鼠眶静脉取血,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数并分类.ELISA法检测血清IgE,IL-5,IFN-γ,IL-17和IL-23的含量,取肺组织行组织病理学检测.结果 A组病理学改变、动物行为学改变、血清IgE水平增高均证明哮喘模型制备成功;IL-5显著增高,IFN-γ降低;A组小鼠血清中IL-23,IL-17水平高于C组,IL-23与IL-17含量成正相关关系(r=0.763,P0.05),与IL-5,IFN-γ无相关性.结论 IL-23与哮喘发病密切相关,其机制可能是通过调节IL-17的产生促使哮喘发病;IL-23对IFN-γ和IL-5无明显调节作用.     

白细胞介素23基因沉默对支气管哮喘小鼠的影响

目的观察白细胞介素23(IL-23)基因沉默对肺组织IL-23蛋白表达、哮喘鼠气道炎症和支气管肺泡灌洗液(BALF)中干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-5(IL-5)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平的影响.方法构建siRNA IL-23表达载体并通过脂质体转染获得高浓度的含有siRNA IL-23的浓缩液,RT-PCR和WB法检测IL-23mRNA及IL-23蛋白表达水平,确定转染成功.通过滴鼻方式吸入到卵蛋白(OVA)致敏的小鼠体内,观察其对BALF中炎症细胞的影响;ELISA方法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞因子IFN-γ,IL-5,TNF-α,ICAM-1的变化;HE染色观察肺组织病理学改变;WB法检测肺组织中IL-23蛋白表达.结果与对照组相比,模型组及空质粒组BALF中IL-5,TNF-α,ICAM-1水平升高,IFN-γ水平下降,肺组织中IL-23蛋白表达量升高(P0.01),沉默组上述各项指标明显下降,IFN-γ水平升高(P0.01);病理学检测结果表明:与对照组相比,模型组和空质粒组气道内有大量炎性细胞浸润,沉默组炎症受到抑制(P0.01).结论 IL-23在哮喘发病中起重要作用,阻断其基因表达可以明显改变哮喘症状.     

雄黄对MRL／lpr小鼠脾细胞分泌干扰素-γ、白细胞介素-6的影响

目的：探讨雄黄（As4S4）对MRL／lpr狼疮鼠脾脏细胞分泌干扰素-γ（IFN-γ）、自细胞介素-6（IL-6）的影响。方法：将20周龄MRL／lpr狼疮小鼠和正常C57BL／6J小鼠无菌条件下取出脾脏,制成脾脏淋巴细胞悬液,体外经植物凝集素P（PHA-P,终浓度20mg／L）、白细胞介素-2（IL-2,终浓度10^6IU／L）常规刺激48h后,随机分组进行如下实验：（1）不同浓度As4S4溶液（6．5、12．5、25、50mg／L）作用24h;（2）As4S4对MRL／lpr小鼠和C57BL／6J小鼠作用：①PBS组：空白对照;②As4S4组：25mg／L;以上各组继续培养24h,酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组培养液IFN-γ、IL-6表达量。结果：（1）MRL／fpr狼疮鼠PBS组IFN-γ的分泌高于C57BL／6J小鼠PBS组（P〈0．01）。（2）在MRL／加狼疮鼠中,与PBS组相比,As4S4组（25mg／L）IFN-γIL-6的分泌水平下降。（3）在C57BL／6J小鼠中,PBS组和As4S4组之间IFN-γ、IL-6浓度水平无明显差异。结论：As4S4下调MRL／lpr狼疮鼠IFN-γ、IL-6的分泌,而对C57BL／6J小鼠脾细胞IFN-γ、IL-6的分泌无明显影响。     

维生素E对硫丹染毒小鼠脾细胞因子基因转录的影响

目的 为了探讨维生素E对硫丹染毒ICR小鼠脾细胞因子白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）和γ-干扰素（1FN．γ）基因转录的影响,我们设计了该实验。方法将24只ICR小鼠随机分成对照组、硫丹染毒组（染毒组）和染毒同时给予维生素E（VE）组（实验组）,所用硫丹和维生素E的剂量分别是：0mg／（kg·d）和0mg／（kg·d）（对照组）、0．8mg／（kg·d）和0mg／（kg·d）（染毒组）和0．8m∥（kg·d）和100mg／（kg·d）（实验组）。灌胃21d后,取其脾,用Real—Time PCR法检测其脾脏IL-2、IL-6、IFN-1基因转录的变化。结果染毒组小鼠脾细胞因子IL-2和IL-6 mRNA水平与对照组相比明显升高,IFN-γ,mRNA水平虽有升高趋势,但无显著变化。实验组小鼠脾IL·2和IL-6 mRNA水平明显低于染毒组,IFN·-γ mRNA水平虽有降低趋势,但与染毒组相比无显著变化。结论上述结果说明,硫丹能促进小鼠脾脏细胞因子IL-2和IL-6的基因转录,但对IFN-γ基因转录没有显著影响;维生素E能缓解或部分缓解硫丹的作用。     

水溶性壳聚糖对1型糖尿病小鼠胰腺Th1及Th2相关细胞因子表达的影响

该研究旨在探讨水溶性壳聚糖(WSC)对1型糖尿病(T1DM)小鼠胰腺Th1、Th2相关细胞因子表达的影响。采用多次小剂量链尿佐菌素注射的方法建立T1DM小鼠模型,对建模成功的T1DM小鼠给予连续12周WSC干预。采用逆转录-聚合酶链式反应检测干预后小鼠胰腺Th1相关细胞因子IFN-γ以及Th2相关细胞因子IL-4的m RNA表达水平。结果发现,WSC能够有效地降低T1DM小鼠胰腺IFN-γ的m RNA表达,同时也有效地降低T1DM小鼠胰腺IFN-γ与IL-4的比例。     

龙须菜寡糖分离纯化和抗食物过敏功效的研究

为探究深海细菌Flammeovirga pacifica降解龙须菜所产生的寡糖抗食物过敏功效,以龙须菜为原料,通过发酵、超滤、Superdex Peptide HR 10/300柱层析等方法获得高纯度寡糖.离子色谱结果显示:分离纯化获得的寡糖主要为四糖和六糖,其质量分数分别为48.47%和25.69%.小鼠过敏模型实验结果表明,腹腔注射该寡糖(100μg/只)能显著降低过敏小鼠血清特异性Ig E和Ig G1水平,提高特异性Ig G2a水平.通过灌胃(10 mg/只)能显著降低小鼠粪便中组胺的水平,且能有效缓解空肠组织过敏病理现象.小鼠脾淋巴细胞实验结果显示,该寡糖能在转录和转译水平上显著降低Th2细胞因子(IL-4、IL-5、IL-13)含量,促进Th1细胞因子IFN-γ分泌.说明该寡糖能有效调节辅助性T细胞的免疫功能向Th1细胞转换,从而抑制Th2细胞主导的食物过敏反应.     

单增李斯特菌致流产小鼠子宫中Th1和Th2细胞因子的变化

为探讨Th1和Th2细胞因子在单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)致小鼠流产中的作用,用LM感染妊娠小鼠和小鼠巨噬细胞,统计胚胎存活率,酶联免疫测定(enzyme linked lmmuno sorbent assay,ELISA)小鼠子宫组织中和巨噬细胞培养基中主要的Th1和Th2细胞因子水平.结果显示,LM诱导的流产小鼠子宫中Th1细胞因子水平显著增加,溶血素O(listeriolysin O,LLO)基因缺陷型(Δ hly)LM感染组胚胎存活率和子宫中Th1、Th2细胞因子水平无显著变化;LM感染的巨噬细胞分泌的Th1细胞因子和白细胞介素-4(interleukin, IL-4)水平显著增加,IL-10水平显著降低,Δ hly LM感染组Th1和Th2细胞因子水平无显著变化.因此,LM感染后子宫中Th1/Th2细胞因子失衡诱导了小鼠流产,这可为临床防治LM诱导的流产提供科学依据.     

1,25(OH)_2VD_3在过敏原特异性免疫治疗花粉过敏哮喘中的应用

以1,25(OH)₂VD₃为佐剂制备软叶针葵花粉变应原疫苗,以小鼠致敏哮喘模型为研究对象进行特异性免疫治疗.通过检测小鼠气道高反应性、血清中特异性抗体、细胞因子以及肺组织病理学切片等指标对治疗模型的构建进行评价,探讨1,25(OH)₂VD₃在过敏原特异性免疫治疗花粉过敏哮喘免疫机制中的作用.结果表明:以1,25(OH)₂VD₃为变应原疫苗能有效抑制花粉特异性IgE的产生和Th2细胞因子IL-4分泌,促进封闭性抗体IgG2a产生和Th1细胞因子IFN-γ的分泌,增加耐受性细胞因子IL-10生产,使Th2反应向Th1反应转变.1,25(OH)₂VD₃在花粉过敏性哮喘治疗中能大幅提高过敏原特异性免疫治疗的疗效.     

Th1/Th2型细胞因子平衡与正常妊娠的关系

目的:探讨Th1/Th2型细胞因子平衡与正常妊娠之间的关系.方法:采用酶联免疫吸附方法检测40例非妊娠妇女和42例正常妊娠妇女的血清中Th1型细胞因子(IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-1 β)及Th2型细胞因子(IL-4、IL-6、IL-10和IL-13)的表达水平.结果:非妊娠组相比,妊娠组血清中IL-2和TNF-α的表达水平明显降低(P值均＜0.05),IL-4和IL-10的表达水平明显升高(P值均＜0.05);而两组血清中IFN-γ、IL-1β、IL-6和IL-13表达水平的差异无统计学意义(P值均＞0.05).结论:正常妊娠是以分泌Th2型细胞因子为主的,提示Th1/Th2型细胞因子的平衡可能在正常妊娠中发挥重要作用.     

黄芪甲苷对辐射诱导损伤小鼠肺脏组织结构及Caspase-3,TNF-α表达的影响

辐射会导致多种器官发生炎症或纤维化现象,而黄芪甲苷(Astragaloside Ⅳ, AS-Ⅳ)可通过抑制TNF-α和Caspase-3的表达来减轻组织的病理学损伤.本实验通过构建辐射前AS-Ⅳ给药小鼠模型,探讨AS-Ⅳ对辐射诱导的肺损伤的预防作用.将50只清洁级昆明小鼠随机分为对照组、辐射组、10 mg·kg^-1AS-Ⅳ预防组、20 mg·kg^-1AS-Ⅳ预防组和40mg·kg^-1AS-Ⅳ预防组.小鼠给予AS-Ⅳ灌胃一个月后,以8 Gy的60Coγ射线进行全身辐射,5 d后采集肺组织,通过HE染色和天狼星红病理学检测观察肺脏形态变化,采用免疫组织化学法检测肺组织中Caspase-3,TNF-α的表达.结果显示,与对照组相比,辐射组肺泡细胞出现炎性细胞浸润和纤维化,肺泡壁增厚,肺泡细胞及呼吸性细支气管壁细胞中Caspase-3,TNF-α的表达较对照组显著增高(P<0.01);AS-Ⅳ给药可显著改善辐射诱导的肺组织形态结构损伤,减少Caspase-3,TNF-α的表达(P<0.01),40 mg·kg     

杂粮早餐粉对砷致小鼠生殖毒性的缓解作用

以昆明种纯系雄性小白鼠为受试动物,检测杂粮早餐粉对砷(As)引发的生殖毒性的影响。As染毒组小鼠饮用水中含10mg/L的As,干预组在As染毒的同时用杂粮早餐粉灌胃,6周后检测小鼠睾丸组织的抗氧化指标,并对睾丸组织结构进行分析,统计精子畸形率。结果表明:通过饮用水摄入As能诱发实验动物睾丸组织氧化胁迫,使超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性下降,还原型谷胱甘肽(GSH)含量下降,脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量显著(P0.05)升高,睾丸组织结构出现病理性改变,精子异常率显著(P0.05)升高;用杂粮早餐粉干预后,小鼠睾丸组织的SOD和CAT活性提高,GSH含量升高,MDA含量降低,睾丸组织结构趋于正常,精子畸形率下降。上述结果表明,所用杂粮早餐粉能使砷染毒动物的睾丸组织结构和功能趋于对照组,对促进男性健康具有积极的作用。     

斯氏狸殖吸虫感染大鼠致肝纤维化形成过程中IL-4和IFN-γ表达及意义

 探讨斯氏狸殖吸虫感染大鼠致肝纤维化形成过程中细胞因子IL-4和IFN-γ表达及意义,为阐明Th1/Th2在斯氏狸殖吸虫感染大鼠肝纤维化形成及调节作用提供实验依据.SD大鼠36只,随机分为正常对照组(n=6)、感染1周组(n=5)、感染2周组(n=5)、感染4周组(n=5)、感染8周组(n=5)、感染12周组(n=5)和感染16周组(n=5),每鼠腹腔注射斯氏狸殖吸虫囊蚴15个.按感染时间处死各组大鼠,观测各项指标.HE染色和V G染色观察肝组织纤维化病理形态学变化.免疫组织化学法测定IL-4,IFN-γ在大鼠肝纤维化形成过程中的表达动态变化.HE染色和V G染色肝组织病理形态学结果显示:随着感染时间的延长,胶原纤维面积比值(S/T)和肝纤维化评级在逐渐增加,肝组织纤维化的程度逐渐加重.免疫组织化学显示:IFN-γ的表达阳性细胞百分率在1~8周逐渐增加,到第8周末时达到最大,在12周到16周又逐渐减少;而IL-4表达阳性细胞百分率在1~16周逐渐增加,到第12周末IL-4表达开始增加迅速. 斯氏狸殖吸虫感染大鼠可引起肝脏纤维化病变,IL-4和IFN-γ在斯氏狸殖吸虫感染大鼠致肝纤维化形成过程中表达增加,其纤维化病变程度与感染时间、IL-4和IFN-γ的表达增加有关.提示Th1细胞分泌的细胞因子IFN-γ和Th2细胞分泌的细胞因子IL-4在斯氏狸殖吸虫感染大鼠致肝纤维化的自发性免疫调节中起作用.     

痰热清注射液对流感病毒感染小鼠免疫功能的影响

观察痰热清注射液对流感病毒FM1感染小鼠免疫功能的影响,并探讨其作用机制.采用流感病毒FM1感染小鼠模型,设正常对照组、模型组、利巴韦林阳性药物组、痰热清注射液大、中、小剂量组.分别用MTT法、淋巴母细胞法、巨噬细胞NO2-释放法、ELISA法测定T及B淋巴细胞的增殖功能I、L-2及IFN-γ的活性I、L-4及TNF-α浓度.痰热清注射液大、中、小剂量组明显增强流感病毒FM1感染小鼠的T,B淋巴细胞的增殖能力,并明显提高模型组T细胞培养上清中IL-2含量;痰热清注射液明显提高模型组肺匀浆中IFN-γ及IL-4含量,降低肺匀浆中TNF-α含量.痰热清注射液直接刺激T,B淋巴细胞的增殖,并通过细胞因子IL-2,IFN-γ,TNF-α等作用调控Th1与Th2细胞的平衡,增强机体的抗病毒免疫功能.     

五味子木脂素对哮喘模型小鼠Th2相关炎症因子的影响

目的观察五味子总木脂素对哮喘模型小鼠的干预作用,并分析其对Th2相关炎症因子的影响.方法将雄性BALB/c小鼠随机分为3组,分别为对照组、哮喘模型组和五味子木脂素组,其中,模型组和五味子木脂素组运用卵清蛋白(OVA)联合氢氧化铝建立小鼠的哮喘动物模型,五味子木脂素组灌胃给予五味子木脂素30 m g/kg,1次/d,连续8 d,其余组以蒸馏水作为对照,运用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中卵清蛋白特异性抗体Ig E和肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)的水平,并观察肺组织病理学变化.结果与模型组比较,五味子木脂素组小鼠的哮喘症状得到明显改善,肺组织的炎性损伤明显减轻,体内IL-4、IL-5和Ig E的水平也显著下降.结论五味子木脂素具有良好的治疗哮喘的生物活性.     

结核杆菌ESAT-6基因疫苗对结核杆菌感染小鼠的免疫保护效果研究

为研究结核杆菌ESAT-6基因疫苗的免疫原性及对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果,将雌性C57BL／6N小鼠32只,随机分为4组,即结核杆菌ESAT-6基因疫苗组、BCG组、pcDNA3．1（＋）组和PBS组。取小鼠脾细胞培养上清检测细胞因子水平;并按效靶比例分别为100：1、50：1、10：1进行CIL杀伤活性检测。用结核杆菌H37Rv国际标准强毒株静脉注射攻击小鼠,计数肺和脾组织中的结核杆菌菌落数,对小鼠部分肺和脾组织作病理切片,HE染色观察组织病变程度,Z—N染色检查抗酸杆菌,观察陔疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。结果表明,结核杆菌ESAT-6基因疫苗对小鼠结核杆菌感染有一定的免疫保护效果,可诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,细胞因子IFN-γ和IL-1分泌增加,IL-4分泌减少,CTL特异件活性增加;使小鼠肺和脾组织中的结核杆菌菌落数较空载体组显著减少,组织病变明显减轻。     

共刺激分子B7和CD40对日本血吸虫感染小鼠Th1/Th2免疫偏移的调控作用

为观察干预B7/CD28和CD40/CD40L共刺激信号对Th1/Th2细胞因子表达水平和Th1/Th 2免疫偏移的调控作用, 分别取小鼠感染日本血吸虫后6、8、10和12周的脾淋巴细胞经抗CD8 0(B7-1)mAb、抗CD86(B7-2)mAb、抗CD40mAb和抗CD40LmAb处理后培养72h,用ELISA 双抗体夹心法测定培养上清中IFN-γ和IL-4的表达水平的动态变化并分析干预2种不同的共刺激信号对 Th1/Th2免疫偏移的影响.结果显示抗CD80mAb和抗CD86mAb均能显著抑制IL-4的表达水平, 尤其是抗CD86mAb对IL-4抑制作用尤为明显.抗CD40mAb和抗CD40LmAb也能影响Th2细胞因子的表达.其中以阻断CD40分子的作用更为显著.结果提示B7/CD28和CD40/CD40L共刺激信号可以调节Th1/Th2细胞因子的表达水平和调控Th1/Th2免疫偏移.干预B7/CD28和CD40/CD40L 介导的共刺激信号调控Th1/Th2免疫偏移有可能是一种控制血吸虫卵肉芽肿病变新型的免疫治疗途径.     

中药喘可治注射液对小鼠腹腔巨噬细胞的影响

目的:研究中药喘可治注射液(CKZ)对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡、一氧化氮(NO)释放和细胞因子分泌的影响,并探讨其作用机制.方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,制备单细胞悬液,加入CKZ(终体积分数20 μL/mL)孵育4 h后, 加入过氧化氢(H2O2)、放线菌酮(CHX)、环磷酰胺(CTX)诱导细胞凋亡,荧光酶标仪结合Sytox Green染色检测细胞凋亡;加药孵育4 h后,加入细菌脂多糖(LPS,终质量浓度10 μg/mL)和IFN-γ(终质量浓度80 ng/mL),24h后Grass试剂盒检测巨噬细胞NO的量;加药孵育4 h后,加入LPS(终质量浓度10 μg/mL)和IFN-γ(终质量浓度80 ng/mL),24h后流式细胞仪结合Cytometric Bead Array(CBA)技术检测细胞因子的释放.结果:CKZ能抑制H2O2、CHX、CTX诱导的细胞凋亡;促进非刺激状态下巨噬细胞NO和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α 5种细胞因子的产生, 抑制LPS和IFN-γ刺激的NO和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α5种细胞因子的产生.结论:CKZ可抑制巨噬细胞凋亡,并对巨噬细胞NO的分泌和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α5种细胞因子的生成具有双向调节作用.     

种植性胃肿瘤鼠Th1/Th2相关上游转录因子及细胞因子的表达

从基因水平了解种植性胃肿瘤鼠辅助性T细胞(Th)的免疫平衡状态。建立Walker-256种植性胃肿瘤大鼠模型,观察其生存状态,从心脏血中分离单个核细胞(MNC)进行细胞培养,用RT-PCR法检测GATA-3、T-bet、IL-4、IFN-γ基因表达水平。种植性胃肿瘤鼠较正常对照组GATA-3表达增高,T-bet表达降低(P<0.05),IL-4水平高于正常对照组,而IFN-γ水平低于正常对照组(P<0.05)。种植性肿瘤大鼠存在Th细胞特异性转录因子、细胞因子基因水平的Thl/Th2平衡紊乱,以Th2亚群亢进为主,肿瘤鼠机体处于抗肿瘤免疫抑制状态。     

骨髓间充质干细胞对实验性变态反应性脑脊髓炎小鼠的治疗作用

为了探讨骨髓间充质干细胞(BMMSCs)对小鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用,将36只小鼠随机分为3组,每组12只,分别为对照组、模型组和BMMSCs组.采用不同方法治疗8周后,通过反转录PCR(RTPCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)分别检测小鼠脊髓组织中白介素-1(IL-1)、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的mRNA水平和蛋白水平.结果显示:与对照组比较,模型组IL-1、IL-2、IL-12、TNF-α和IFN-γ的mRNA水平和蛋白水平上调(p0.05),而IL-4和IL-10下调(p0.05);与模型组比较,BMMSCs组IL-1、IL-2、IL-12、TNF-α和IFN-γ的mRNA水平和蛋白水平下调(p0.05),而IL-4和IL-10上调(p0.05).进而用苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠脊髓组织形态学改变,结果显示:对照组脊髓组织的结构正常,神经细胞形态完好;模型组脊髓组织内出现大量炎性细胞;BMMSCs组脊髓组织内没有发现明显的炎性细胞.由上述结果可知,BMMSCs对EAE小鼠具有治疗作用,其机制与抑制炎性因子的表达和减少变态反应性脑脊髓炎对脊髓的损伤有关.