固定化E.coli BL21(pTrc-gsh)细胞催化合成谷胱甘肽

分别以卡拉胶、明胶、海藻酸钠包埋E.coli BL21 (pTrc-gsh)细胞催化合成谷胱甘肽(GSH).从酶活收率及机械强度方面进行比较,选择卡拉胶为包埋载体,其最适pH为7.0,最适温度为40°C.相关物质对GSH的合成均有影响半胱氨酸、甘氨酸的最适浓度为20mmol/L,谷氨酸的最适浓度为60mmol/L;Mg2+/ATP为1～5(V/V)较合适;腺苷二磷酸(ADP)浓度为5mmol/L时对酶活的抑制为20%.优化条件下罐式反应器中GSH的产量为0.84g/L,操作稳定性较好;延迟加入甘氨酸时GSH产量可提高17.5%;与酵母生产ATP体系相耦联的共固定化体系在填充床中反应,GSH合成量达1.24g/L,收率比直接加入ATP提高24.2%.     

固定化E.coliBL21（pTc—gsh）细胞催化合成谷胱甘肽

分别以卡拉胶、明胶、海藻酸钠包埋E.coliBL21（pTrc-gsh)细胞催化合成谷胱甘肽（GSH）。从酶活收率及机械强度方面进行比较，选择卡拉胶为包埋载体，其最适PH为7.0，最适温度为40℃。相关物质对GSH的合成均有影响：半胱氨酸、甘氨酸的最达浓度为20mmol/L，谷氨酸的最适浓度为60mmol/L；Mg^2 /ATP为1-5（V/V）较合适；腺苷二磷酸（ADP）浓度为5mmol/L时对酶活的抑制为20%。优化条件下罐式反应器中GSH的产量为0.84g/L，操作稳定性较好；延迟加入甘氨酸时GSH产量可提高17.5%；与酵母生产ATP体系相耦联的共固定化体系在填充床中反应，GSH合成量达1.24g/L，收率比直接加入ATP提高24.2%。     

固定化啤酒酵母细胞合成5’-三磷酸腺苷

用K-卡拉胶包埋啤酒酵母制成固定化细胞,在0.05mol/L葡萄糖,0.022mol/L腺苷酸,0.012mol/LMgSO_4·7H_2O,0.2mol/L氯化钾,0.2mol/L磷酸钾缓冲溶液(pH7.0)中,35℃反应4小时,5′-三磷酸腺苷转化率可达42%,在50ml三角烧瓶中分批反应,连续使用5次,5′-三磷酸腺苷转化率仍维持在37%以上。     

用固定化啤酒酵母细胞合成胞嘧啶核苷二磷酸胆碱

κ－卡拉胶－魔芋多糖复配胶包埋的啤酒酵母细胞，经冻融处理后用于合成胞嘧啶核苷二磷酸胆碱（CDP－胆碱）。结果表明：250mL摇瓶中加入50mL反应液（葡萄糖400mol/L，CMP10mmol/L，磷酸碍碱50mmol/L,K2HPO4-KH2PO4缓冲液100mmol/L，MgSO410mmol/L,pH=8.0），固定化细胞1200g/L,34℃、150r/min下，反应4h后补加400mmol/L葡萄糖，反应8h可使60％以上的CMP转化为CDP－胆碱。反应液经灭菌和添加辅酶I（NAD^ ）后，固定化细胞可连续使用4次，CDP－胆碱转化率维持在40％以上。     

由腺嘌呤酶促合成三磷酸腺苷的研究

对利用啤酒酵母体内的酶系直接把腺嘌呤合成为三磷酸腺苷(ATP)进行了研究,提出了适用于工业生产的反应系统。经我校办工厂试产证明:由腺嘌呤形成ATP的重量转化率平均达120%。用数学上的“正支设计”研究了反应系统中各物质对ATP形成的影响,证明啤酒酵母及无机磷量是主要因素;为了提高由腺嘌呤转化成ATP的转化率,使用两次发酵是必要的。文中同时介绍了由腺嘌呤直接酶促合成腺嘌和腺-磷(AMP)的反应系统。二者的重量转化率分别可达154.9%及205%。文中对由腺嘌呤合成ATP的途径作了初步讨论。     

固定化Streptomyces sp.108转化美伐他汀为普伐他汀的研究

报道了链霉菌(Streptomyces sp．108)固定化细胞制备的最适条件。初始底物(美伐他汀)浓度300mg/L，间接补加底物总浓度达到800mg/L时，普伐他汀产量为495mg/L，转化率为60％。在底物浓度为300mg/L时重复发酵3次，500mg/L时重复发酵2次，转化率分别达50．5％和53％。     

固定化青霉素酰化酶在光敏感可再生两水相体系中催化青霉素G为6-APA

在一种光敏感可再生高聚物(PNBC 300000)与葡聚糖20000(Dextran 20000)形成的两水相体系中进行固定化青霉素酰化酶的相转移催化青霉素G产生6-APA的反应。在这个两水相体系中,当pH为7.8,底物浓度为62 mmol/L,反应温度为20℃,在50 mmol/L KCl存在下,6-APA的分配系数可达8.4。催化动力学显示,达到平衡的时间近6 h,PG(Na)转化率约82.6%。3批半连续反应转化率为60%~70%,较相近条件下的单水相反应得率提高近20%。在两水相中,底物及产物主要分配在上相,固定化酶分配在下相,底物青霉素G进入下相经酶催化产生的6-APA及苯乙酸又转入上相,从而解除了青霉素酰化酶催化反应的底物及产物抑制作用,达到提高产物得率的效果。形成两水相的高聚物通过488 nm的激光照射可实现循环利用,高聚物的光照回收率在95%~98%。     

假单胞菌B5生物合成邻苯二酚的研究

以假单胞菌B5菌株(实验室筛选)为实验菌株 ,完成了游离细胞发酵条件优化和发酵保护剂甘油最适用量的研究。在 6g/L的苯甲酸钠和 1.1g/L培养基上30℃培养 24h ,邻苯二酚(catechol)产量达到 2.5g/L ,分子水平转化率为 52.3%;同时进行细胞固定化材料、固定化条件和固定化发酵条件的实验。以 1.5%壳聚糖和 0.1%的海藻酸钙为固定化介质 ,0. 1%的戊二醛交联制备得到的固定化细胞成球形 ,直径约为 2.5mm ,在苯甲酸钠 (6g/L)培养基中可连续批次发酵 12次 ,邻苯二酚平均产量约为每批次 1.5g/L。     

逆境胁迫对拟南芥细胞质、叶绿体和细胞外ATP水平的影响

利用荧光共振能量转移的ATeam蛋白作为ATP生物传感器,建立检测拟南芥细胞质、叶绿体和细胞外ATP的检测体系,研究植物在不同非生物胁迫(NaCl、 PEG 6000和低温)下细胞质、叶绿体和细胞外ATP水平的变化.结果表明,在较高强度的胁迫(200 mmol/L NaCl、 10%～20%w(PEG6000)和0～4℃)下,细胞质ATP水平下降.在各水平PEG 6000胁迫下,叶绿体中ATP水平保持稳定; 10℃低温处理导致叶绿体中ATP水平升高, 200 mmol/L NaCl处理导致叶绿体ATP水平下降,其他强度的NaCl以及低温处理未显著改变叶绿体ATP水平.在中等强度的NaCl和PEG 6000胁迫(100 mmol/L NaCl和5%～10%w(PEG 6000))下,细胞外ATP水平升高; 4～10℃低温胁迫处理导致细胞外ATP水平下降.     

合成4–羟基异亮氨酸的大肠杆菌构建及其催化体系优化

4–羟基异亮氨酸具有血糖水平依赖的促胰岛素分泌特性,是治疗糖尿病的潜在新药.将异亮氨酸羟化酶(isoleucinedioxygenase,IDO)编码基因ido于大肠杆菌(Escherichcoli)中表达,获得工程菌株E. colipET-ido.以该菌株为研究对象,建立和优化了其合成4–羟基异亮氨酸的静息细胞催化体系.结果表明:在最佳条件下(静息细胞27 g/L,L–异亮氨酸250 mmol/L,α–酮戊二酸250 mmol/L,FeSO48 mmol/L,VC6 mmol/L,反应温度35℃,pH9.0)反应12 h,4–羟基异亮氨酸产量和转化率分别达到249.6 mmol/L和99.8%,较优化前均提高了34.5%和7.5%.这是目前已报道的生物法合成4–羟基异亮氨酸的最高产量,为推动该化合物的微生物合成奠定了良好的基础.     

聚乙烯亚胺对海藻酸固定化酵母细胞的强化作用

用聚乙烯亚胺处理后的固定化酵母细胞裂解的最适温度提高，米氏常数也略高于游离细胞的Ｋｍ值．     

酵母固定化细胞及固定化增殖细胞的制备

本文介绍用褐藻胶制备酵母固定化细胞及固定化增殖细胞。实验表明;固定化细胞活力高,化学稳定性好,机械强度大,能重复使用,发酵时间短等特点。     

固定化酵母细胞连续发酵生产酒精的研究

在３００Ｌ容量塔式发酵器中进行固定化酵母细胞连续发酵酒精的小型中放实验，固定化酵母细胞可连续使用３个月以上，在温度３０℃左右，ｐＨ＝４～５及糖浓度１８％（Ｗ／Ｖ）（１１°Ｂｘ）时，每升固定化酵母可产酒精２５～３０ｇ．     

固定化酵母发酵法生产女贞子特色保健果酒的研究

主要对固定化酵母的条件及女贞子果酒的发酵工艺进行了研究．采用正交实验法设计优化苹果发酵时酵母的固定化条件为：海藻酸钠浓度为3％,氯化钙浓度为3％,固定化时间为6h．通过对初始糖度及女贞子加入量的单因素实验得出：当初始糖度为18％、女贞子加入量为10g／300mL时,发酵速度较快且具有良好的风味．     

正交法设计固定化酵母细胞最佳培养基

本文用正交试验法对固定化酵母发酵培养基进行研究,用四因素三水平的 L_9(3~4)表安排实验,选择出最佳发酵条件。     

固定化酵母流化床生物反应器发酵玉米淀粉的研究

对固定化酵母流化床生物反应器发酵玉米淀粉进行了研究.结果表明,在南阳混合酵母、拉斯12号酵母以及古巴Ⅱ号酵母3种酵母中,南阳混合酵母最适合作为固定化的菌种.发酵醪初糖为9 86～15 88°Bx,发酵时间为6～11h,成熟发酵醪中酒精的体积百分比含量达4 8%～9 2%,反应器的乙醇生产能力为3 8～4 5g/(L·h),凝胶的乙醇生产能力为11 3～13 6g/(L·h),残糖均低于1 0°Bx.     

混合载体固定化酵母酒精萃取发酵的研究

以十二烷醇为革取剂,对以海藻酸钠和聚乙烯醇混合载体固定化酒精酵母乙醇发酵进行了研究．探讨了革取剂对酵母细胞的毒性及革取剂用量、搅拌速度、基质浓度等因素与乙醇革取发酵的关系,并测定了革取过程中乙醇的分配系数．为固定化酒精酵母乙醇发酵与溶剂革取耦合新工艺的开发研究提供初步资料．     

固定化细胞颗粒珠制备条件的研究

利用喷雾法、注射器滴入法和压力注入法进行固定化细胞的制备,其中压力注入法在聚乙烯醇浓度为12%,温度为40℃,喷射压力为0.05MPa时制备的固定化细胞颗粒的粒径为1.0mm,机械强度好,酒精发酵在20h时使酒精体积分数达9.2%,转化率为97.2%.