钙调神经磷酸酶诱发的核转运及与LTP的相关性

利用具有不依赖钙和钙调素的钙调神经磷酸酶 (CaN) 45ku片段 ,在海马无细胞体系中模拟CaN的活化 .然后通过电泳检测核抽提液中蛋白组分的变化 ,发现一个 15ku蛋白水平的显著提高 .而且利用人参总皂甙诱发LTP后 ,该蛋白在核内的水平也显著提高 .结果表明 ,在海马 ,CaN的活化诱发了一种已经存在的蛋白组分向核内转运 ,并且这种转运与海马LTP的诱发和维持是密切相关的     

钙调神经磷酸酶对大鼠体内LTP的影响

钙调神经磷酸酶（calcineurin,CN)被动认为在突触可塑性及在海马长时程增强（long term potentiation,LTP)中发挥了一定的作用。在两种整体LTP模型的基础上,观察了CN特异性抑制剂环胞菌素A（cyclosporin,A,CsA)对大鼠海马齿状回LTP的影响。CsA能部分阻断高频刺激诱发的LTP,但它只减小了群峰电位（population spikes,PS)幅度的增加,对PS潜伏期的缩短没有影响。另一方面,CsA能完全阻断人参皂甙诱发的LTP,不仅抑制了PC幅度的增加,也阻断了PS潜伏期的缩短。结果提示,突触后神经元的CN在海马LTP的诱发过程中起着重要的作用。     

钙调神经磷酸酶催化结构域的活性和性质

钙调神经磷酸酶（Ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ,ＣＮ）是唯一的Ｃａ＾２＋／钙调素（Ｃａｍｏｄｕｌｉｎ,ＣａＭ）信赖的蛋白磷酸酶,由催化亚基Ａ（ＣＮＡ,６１ｋｕ）和调节亚基Ｂ（ＣＮＢ,１９ｋｕ）１：１组成。用ＰＣＲ方法构建了仅含ＣＮＡ催化结构域的编码区ｃＤＮＡ序列。经在Ｅ．ｃｏｌｉ中诱导表达,纯化,制备了ＣＮＡ催化结构域多肽。以ＰＮＰＰ为底物,研究了其磷酸酶活力。结果表明,在有ＣａＭ和ＣＮＢ时,其活性为ＣＮ     

钙调神经磷酸酶在CaM,Mn~(2+)存在时的构象变化

钙调神经磷酸酶(Calcineurin,CaN)是由A,B两亚基1:1组成的二聚体酶.A亚基是CaN的催化亚基,上有钙调素(CaM)、B亚基和金属离子结合位点.B亚基是调节亚基,上有4个Ca~(2+)结合位点,在维系酶的活性构象方面起着重要的作用.肖方祥等用Mn~(2+)作为Ca~(2+)探针进行了CaN,CaN+CaM结合Mn~(2+)的ESR研究,其结果表明,CaN上有2个Mn~(2+)结合位点,然而分离的A,B亚基上分别有2个、4个Mn~(2+)结合位点,CaN-CaM复合物     

金属离子Mn~(2+),Ni~(2+)和钙调神经磷酸酶的相互作用

钙调神经磷酸酶(Calcineurin,CaN,EC 3.1.3.16)是目前所知的唯一依赖于钙/钙调素的磷蛋白磷酸酶.CaN全酶分子量为80ku,大亚基A(61 ku)是催化亚基,小亚基B(19ku)是调节亚基并且与钙调素相似.CaN的活性受多种二价金属离子的调节,Mn~(2+),Ni~(2+)就可以强烈激活CaN.由于Mn~(2+),Ni~(2+)与Ca~(2+)在原子半径、电荷等性质上十分相似,因此,研究它们与CaN的相互作用对于揭示CaN的催化调控机理以及生物大分子高级结构方面具有重要意义.本室已经纯化了CaN,并且利用电子顺磁共振(ESR)方法研究了Mn~(2+)与全酶及A,B亚基的结合.本文将AAS(原子吸收光谱)与ESR两种方法结合,进一步研究了Mn~(2+),     

金属离子对重组钙调神经磷酸酶A亚基的作用

进行了金属离子对重组钙调神经磷酸酶Ａ亚基催化活性和溶液构象作用的研究和分析。Ｍｎ＾２＋,Ｎｉ＾２＋,Ｍｇ＾２＋／Ｃａ＾２＋对钙调神经磷酸酶Ａ亚基的激活能力不同,大小排序为Ｎｉ＾２＋〉Ｍｎ＾２＋〉Ｍｇ＾２＋／Ｃａ＾２＋。相应的ＣＤ谱和内源荧光光谱测定表明,金属离子诱导了此酶Ａ亚基构象状态的改变。并以钙调神经磷酸酶Ａ亚基激活作用最强的Ｎｉ＾２＋为例,进行其不同浓度对酶活性和构象影响的对应研究。结果提示