非司酮对人早孕期绒毛中PGF2α 合成及表达的影响

目的:通过对比观察米非司酮对人早孕期绒毛中前列腺素合成及表达的影响,探讨米非司酮终止早孕的分子机制.方法:采用免疫组化法检测环加氧酶-2(COX-2)及ELISA法检测前列腺素F2α(PGF2α)在米非司酮药流组与人流对照组(孕7～9周各12例)绒毛中表达的差异,了解米非司酮对人早孕期绒毛前列腺素合成及表达的影响.结果:米非司酮药流组滋养细胞中COX-2的表达较人流对照组明显增加(P＜0.01),其PU值(-x±S)分别为(33.52±9.16,13.42±7.53).米非司酮药流组绒毛中PGF2α的表达较人流对照组明显增加(P＜0.01),其质量浓度值(-x±S)分别为(30.14±8.20,15.01±4.14)ng/mL.结论:米非司酮可产生孕酮撤退效应,导致前列腺素合成酶COX-2水平升高,引起PGF2α合成增加,不利于妊娠的维持.     

米非司酮对早孕绒毛滋养细胞TSP表达及绒毛间质血管生成的影响

目的: 通过观察米非司酮对人早孕绒毛滋养细胞血小板凝血酶致敏蛋白(TSP)表达及绒毛间质血管生成的影响,探讨TSP在绒毛间质血管生成的作用.方法:采用免疫组化S-P法与图像分析技术对绒毛血管行体视学研究.结果:米非司酮药流组微血管长度密度较对照组减少(P<0.05),微血管体积密度显著减少(P<0.01);药流组绒毛滋养细胞层TSP表达显著高于对照组(P<0.01).结论:药流组绒毛滋养细胞TSP高表达与间质血管生成抑制相关.药流时绒毛间质血管形成发生障碍,不利于胚胎生存.     

HPLC定量检测体外培养巨噬细胞液中PGF2α方法的建立

采用香豆素类物质BDMC为衍生剂进行柱前衍生,以C8反相柱(4.6mm×150mm)为固定相,乙腈-甲醇-水(35∶10∶55)为流动相,流速为1.5mL/min,柱温为22℃,检测波长为Ex/Em=354nm/440nm,建立定量检测体外培养巨噬细胞液中PGF2α的HPLC方法.PGF2α峰呈尖峰,分离度良好;在25~500μg/L范围内成线性(R2=0.995 0);其精密度RSD为4.34%(n=5);重复性RSD为7.88%(n=6),稳定性RSD为4.43%(n=5);平均加样回收率为87.20%±7.63%(n=3).结论:该方法稳定、可靠、重复性好,可用于体外培养巨噬细胞液中PGF2α的定量检测.     

PGF2α和PGD2对体外绵羊卵巢颗粒黄体化细胞溶解及相关基因差异表达的影响

目的 本研究旨在探析PGF2α和PGD2对体外绵羊卵巢颗粒黄体化细胞溶解及其相关基因差异表达的影响,为解析绵羊发情分子调控机制提供依据.方法 体外培养哈萨克母羊卵巢颗粒细胞经黄体化处理后分别添加PGF2α、PGD2、PGD2+PGF2α进行诱导,采用ELISA技术检测P4浓度以及采用qRT-PCR技术检测黄体溶解相关基...     

米非司酮（RU486）对早孕人滋养细胞超微结构的影响

研究米非司酮（ＲＵ４８６）对早孕人滋养细胞超微结构的影响时，发现ＲＵ４８６可使滋养细胞发生核溶解，粗面内质网渠扩张，线粒体缩小和合体细胞片段脱落等形态改变。虽然ＲＵ４８６可在受体水体拮抗孕酮，但在滋养细胞及在脱膜细胞均无凋亡现象发生。说明ＲＵ４８６对上述组织的影响是继发的，其终止早孕的主要机理可能与子宫螺旋动脉减少供血有关。     

米非司酮对大鼠在位及异位子宫内膜COX-2表达的影响

目的:探讨米非司酮对大鼠在位及异位子宫内膜环氧合酶-2(COX-2)表达的影响。方法:子宫内膜异位症(endom etriosis,EMS)大鼠随机分为正常对照组、低剂量和高剂量米非司酮组,灌胃4周后,分别取子宫内膜组织用免疫组化法测COX-2的表达。结果:1)不同实验组间在位内膜COX-2的表达强度均有明显差异,米非司酮高剂量组低于低剂量组(P<0.01)和对照组(P<0.01),低剂量组在位内膜COX-2的表达强度也明显低于正常对照组(P<0.01)。2)米非司酮高剂量组异位内膜COX-2的表达强度低于正常对照组(P<0.01)和低剂量组(P<0.01),而低剂量组异位内膜COX-2的表达强度和对照组比较差异无显著性。3)米非司酮高剂量、低剂量组异位内膜COX-2的表达强度均明显高于在位内膜(P<0.01),而对照组在位、异位内膜COX-2的表达强度差别无显著性。结论:米非司酮治疗EMS可能与降低COX-2的表达有关。     

survivin(存活素)在早孕绒毛及妊娠滋养细胞疾病中的表达

目的:研究早孕绒毛及妊娠滋养细胞疾病中survivin(存活素)的组织定位和表达,探讨survivin与妊娠滋养细胞疾病的关系。方法:采用免疫组化SP法检测14例正常早孕绒毛、14例葡萄胎、12例侵蚀性葡萄胎及12例绒癌滋养细胞中survivin的表达。结果:survivin在滋养细胞细胞核及细胞浆的表达强度PU值依下列顺序增加:正常早孕组、葡萄胎组、侵蚀性葡萄胎组及绒癌组,各组间的表达强度差异有统计学意义(P <0 0 5 )。结论:适度survivin是正确完成胚胎细胞有丝分裂和细胞增殖的必要条件,因survivin的过表达引起的细胞凋亡阻滞在妊娠滋养细胞疾病的发生发展过程中可能起重要作用     

2-α-羟基熊果酸对人白血病细胞HL-60的周期阻滞及凋亡作用

利用台盼蓝法、吖啶橙/溴乙锭双染检测法和流式细胞术检测了2α-羟基熊果酸对人急性早幼粒白血病细胞株HL-60的增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果表明,在低浓度（15-30μmol.l-1）时药物抑制HL-60细胞的生长,高浓度（30,35μmol.l-1）对细胞有致死效应,且呈现剂量依赖和时间依赖性;双染分析表明,药物能够诱导细胞凋亡,随着药物浓度增加和处理时间的延长,细胞凋亡率上升,并且伴有少量细胞坏死;进一步用流式细胞术检测,发现在20μmol.l-1时,2α-羟基熊果酸引起明显的G1期阻滞,随着药物浓度升高,周期阻滞作用明显加强。因此,细胞周期阻滞可能是药物抑制细胞增殖进而引起凋亡的原因。     

米非司酮对人输卵管胰岛素样生长因子-1及其受体表达的影响

目的: 探讨米非司酮对人输卵管上皮胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及其受体(IGF-1R)在增殖中、晚期表达情况的变化.方法:取育龄妇女增殖中、晚期输卵管,米非司酮组(8例)于术前12 h给予米非司酮25 mg口服,对照组(7例)不服用米非司酮,常规石蜡切片,用SP免疫组化法和图像分析技术检测IGF-1及IGF-1R的PU值的表达变化.结果:在月经周期的增殖中、晚期,无论米非司酮组或对照组,峡部、壶腹部、伞部上皮细胞IGF-1及其受体的表达,差异无显著性(P>0.05);在月经周期的增殖中、晚期,米非司酮组和对照组在输卵管相同部位上皮细胞IGF-1的表达差异无显著性(P>0.05);在月经周期的增殖中、晚期,在输卵管相同部位上皮细胞IGF-1R的表达米非司酮组较强,与对照组相比差异有显著性(P<0.05). 结论:米非司酮作用下,月经周期的增殖中、晚期人输卵管上皮IGF-1表达与对照组无明显差异,而IGF-1R的表达则明显强于对照组,说明米非司酮可能对该时期的输卵管环境造成改变.     

米非司酮对JAR细胞凋亡的诱导作用

米非司酮是一类抗孕激素和抗糖皮质激素药物,在临床被广泛用于早孕的终止．发现米非司酮能抑制人滋养层瘤细胞（ＪＡＲ）的生长．药物处理使细胞形态出现典型的凋亡特征．被处理细胞的ＤＮＡ经琼脂糖电泳呈凋亡细胞特有的云梯状条带．原位凋亡检测也证实了凋亡细胞的存在．临床样品分析证明,米非司酮药物流产的人绒毛组织也发生了明显的细胞凋亡．说明米非司酮诱导流产的机制除了对子宫蜕膜的作用外,还可能与诱导滋养层细胞凋亡有关     

N-(2-吡咯甲酰基)-α-氨基酸甲酯的合成

以2-吡咯甲酸为原料,经酰氯化反应生成2-吡咯甲酰氯（Ⅲ）,Ⅲ再与α-氨基酸甲酯（Ⅱ）在n（Ⅲ）：n（Ⅱ）=1：1,二氯甲烷为溶剂,室温反应4h,合成了3个N-（2-吡咯甲酰基）-α-氨基酸甲酯（Ⅰ）,摩尔收率为79．5％～95．6％．通过^1H NMR、^13C NMR、IR、MS和元素分析对其进行了表征。     

HIF-1α表达对人乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响

为研究缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在人乳腺癌细胞中的表达及其与乳腺癌细胞侵袭转移能力的相关性,采用在培养基中加入CoCl2模拟化学缺氧培养细胞,RT—PCR和Western-blot、免疫细胞化学检测HIF-1α在人乳腺癌细胞MCF-7和MDA—MB-231中mRNA水平和蛋白质水平在缺氧前后的表达差异,及Millicell小室人工重组基底膜侵袭迁移实验检测缺氧前后两株细胞侵袭迁移能力的改变．结果发现：缺氧后,两株细胞的HIF-1α mRNA水平和蛋白质水平均较缺氧前增高（p〈0．01）,MDA—MB-231和MCF-7之间有显著差异（p〈0．01）;MDA—MB-231的侵袭转移能力明显增加（p〈0．01）,MCF-7的侵袭转移能力略有增加（p〈0．05）．表明缺氧上调HIF-1α转录及蛋白表达,进而促进乳腺癌细胞的侵袭转移能力．     

α-生育酚琥珀酸酯对乳腺癌细胞中IAPs家族蛋白表达的影响

目的检测α-生育酚琥珀酸酯(-αTOS)对MCF7和MDA-MB-453乳腺癌细胞增殖以及细胞中凋亡抑制蛋白家族(IAPs)表达的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定-αTOS对人乳腺癌细胞MCF7和MDA-MB-453增殖的抑制作用,细胞分别接种于96孔板后用浓度为51、0、255、0、75、1001、25和150μmol/L的-αTOS处理48 h后检测;细胞经50μmol/L、100μmol/L-αTOS处理122、4、48 h后,用RT-PCR的方法检测细胞内c-IAP1和c-IAP2 mRNA的转录水平;用Western Blot的方法检测c-IAP1和c-IAP2的蛋白质表达水平。结果-αTOS对人乳腺癌细胞MCF7和MDA-MB-453有显著的增殖抑制作用,并表现为剂量依赖性,-αTOS对MCF7和MDA-MB-453的IC50值(细胞半数死亡的药物浓度)分别为132μmol/L和74μmol/L;RT-PCR结果显示,-αTOS使两个细胞系的c-IAP1的转录水平显著下降,且呈时间依赖性;但对c-IAP2的转录水平没有明显影响;Western Blot的结果发现-αTOS使得这两种细胞系的c-IAP1蛋白质翻译水平也呈下降趋势,该结果与mRNA转录水平下降相一致,对c-IAP2蛋白质的表达几乎无影响。因此,α-TOS可能通过抑制c-IAP1蛋白的表达而抑制MCF7和MDA-MB-453乳腺癌细胞的生长增值,a-TOS有望开发成为新的预防和治疗乳腺癌的有效药物。     

丹参酮对滋养细胞胰岛素抵抗下IRS-1和p-ERK表达的影响

为了不同药物干预组的绒毛膜滋养层细胞中胰岛素受体底物-1(IRS-1)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)蛋白的表达及其与妊娠期高血压的关系.采用以下方法:①体外原代培养人绒毛膜滋养细胞,用沃漫青霉素作用于滋养细胞诱发胰岛素抵抗的细胞模型;②用蛋白印迹法检测lRS-1和磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK)在正常组、溶剂组、胰岛素抵抗组、丹参酮组和二甲双胍组中的变化.结果显示:①显微镜下可见细胞呈多边形.细胞平铺生长,有细胞融合后形成的合体滋养层细胞;②当细胞胰岛素抵抗时,IRS-1的GSR为0.685 7.较正常对照组GSR(0.541 7)升高了26.58%,加入药物改善胰岛素抵抗后,丹参酮组的GSR(0.589 0)降低了16.42%.二甲双胍组的GSR(0.642 9)降低了6.66%;③在沃漫青霉素诱发胰岛素抵抗时.P-ERK的GSR为1.7,较正常对照组GSR(1.083 3)升高了56.93%;加入药物改善胰岛素抵抗后丹参酮组的GSR(1.342 5)较抵抗组降低了26.63%,二甲双胍组的GSR(1.542 9)较抵抗组降低了10.18%.由此得出结论:①丹参酮2对IRS-1的胰岛素抵抗改善水平优于二甲双胍;②丹参酮2和二甲双胍对P-ERK均有降调作用;③丹参酮2通过对IRS-1、p-ERK的调节,改善了妊娠期高血压疾病的胰岛素抵抗状态.     

吴茱萸水煎液对寒凝血瘀型痛经大鼠模型的影响

为了观察吴茱萸水煎液对寒凝血瘀型痛经大鼠模型的影响,本实验制作了寒凝血瘀型痛经大鼠模型,通过离体子宫平滑肌实验,观察吴茱萸水煎液对大鼠子宫活动的影响;测定大鼠血浆NO、6-Keto-PGF1α含量的改变。结果显示:吴茱萸水煎液能够抑制缩宫素引起的子宫痉挛性收缩;可使痛经大鼠血浆NO、6-Keto-PGF1α含量均明显升高。吴茱萸水煎液可通过抑制子宫平滑肌收缩、调节血浆NO、6-Keto-PGF1α含量治疗寒凝血瘀型痛经。     

α-溴-2，5-二甲氧基苯乙酮的合成

通过甲醇体系中利用溴化氢溴代仪α-氯2，5-二甲氧基苯乙酮的方法，获得了α-溴-2,5-二甲氧基苯乙酮，进一步和苯甲酸反应得到了苯甲酸-（2，5二甲氧基苯羰甲基）酯。研究表明该化合物在非极性溶剂苯中，没有光化学活性。在具有氢给体能力的甲醇溶剂中，也没有观察到任何光化学变化。     

米非司酮对人胎肝细胞超微结构的影响

目的：探讨米非司酮对胎肝细胞超微结构的影响。方法：将中孕期引产的病例分为米非司酮组与对照组，每组各５例，孕周为１８～２１周孕。米非司酮组在引产前６ｈ服用１５０ｍｇ米非司酮，然后行水囊引产术，对照组则只行水囊引产术。胎儿娩出后，取肝组织进行样品制备以供电镜观察。结果：与正常的胎肝细胞对照，米非司酮引产的肝细胞胞质内脂滴、自噬泡及含铁体较为常见，糖原颗粒局部减少或缺如，肝细胞间成红细胞极为常见，其它细胞器则未见明显变化。结论：米非司酮可造成胎肝组织缺氧，因此引起的糖酵解尚可勉强维持肝细胞的能量需求。     

按大肠杆菌高表达序列设计的人干扰素α-2b基因的化学合成和克隆

根据大肠杆菌高表达序列重新设计了人干扰素α-2b基因编码区的核苷酸序列,应用化学合成的方法合成了多个互补DNA片段,经互补片段分别退火和连接后,将完整编码区分两段分别克隆于pUC19质粒中,进行DNA序列分析,分别选取序列完全正确的两种克隆片段进行重组.获得了与设计序列完全一致的含有完整编码区的人干扰素α-2b基因.     

整合素αvβ3对正常和癌变的人滋养层细胞分泌基质金属蛋白酶的影响

胚胎植入过程中,滋养层细胞对母体子宫内膜的侵润过程与肿瘤的迁移非常类似,显著区别在于前者是受严格调控的有节制侵润.利用体外培养的人早孕胚胎细胞滋养层细胞和人绒毛膜上皮癌细胞模型,通过RT-PCR、明胶酶谱和免疫细胞化学分析等手段,对比研究了整合素αvβ3对正常和肿瘤细胞产生基质金属蛋白酶的调节.结果表明,正常细胞滋养层细胞和绒毛膜上皮癌细胞均可产生整合素αvβ3;整合素αvβ3抗体能够促进正常滋养层细胞产生基质金属蛋白酶的能力,但抑制绒毛膜上皮癌细胞中基质金属蛋白酶的分泌.这表明整合素能够调节基质金属蛋白酶表达,同时也表明正常和肿瘤化的滋养层细胞中基质金属蛋白酶的表达存在截然不同的调节机制.     

粟甾酮类似物2α,3α—二羟基—6—胆甾酮的合成

本文报道粟甾酮(2)A/B环类似物2α,3α-二羟基-6-胆甾酮(1)的合成。以胆甾醇(4)为起始物,经硝化、还原和酸催化水解,得3-羟基-6-羰基胆甾烷(6),碱催化苯磺酰化,消去苯磺酸得6-羰基-2-胆甾烯(8),用KMnO_4-PEG800氧化后得目标物(1)。总产率45.1％。本合成路线的总产率高、步骤少,并且产物的后处理简便。