重度联合免疫缺陷（SCID）小鼠的繁育及其应用研究初报

应用带过滤罩的透明鼠笼在层流架内繁育先天性Ｔ和Ｂ淋巴细胞免疫缺陷的重度联合疫缺陷（ｓｅｖｅｒｅＣｏｍｂｉｎｅｄＩｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ，ＳＣＩＤ）小鼠获得成功。１９９３年５月自中国医学科学院实验动物研究所引进了３对ｓｃｉｄ小鼠种鼠以来，现已近交繁育至第十代共繁育ｓｃｉｄ小鼠７Ｚ０只，其寿命均超过１２个月。平均产仔数为５．５只，不育率为１４．９％，离乳率为８８．２％。ｓｃｉｄ小鼠４－１０周龄的体重与ＢＡＬＢ／ｃ小鼠相比无明显差异，微生物学检测符合ＳＰＦ级小鼠标准。解剖发现其胸腺极小，胸腺的相对重量仅为同龄ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的６％左右；脾脏相对重量为２７－３７％；外周血淋巴细胞仅占白细胞总数的１１－２６％。应用酶联免疫酶标法测定３－４周龄和大于１０周龄的ｓｃｉｄ小鼠血清ＩｇＧ的含量均小于１×１０￣（－３）ｍｇ／ｍｌ，没有发现ｓｃｉｄ小鼠的“渗漏”现象。人癌移植于ｓｃｉｄ小鼠后获得３种人癌移植瘤：肺腺癌（ＬＡＸ－８３）、肝细胞肝癌（ＬＣ－４１２）、结肠粘液腺癌（ｃｏｌｏｎ），其平均瘤重均显著大于ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠。     

SCID小鼠几个特性的检测及其初步应用

我所于１９９３年６月将原饲养在北京实验动物中心的整个ｓｃｉｄ小鼠种群引人，目前生长繁殖状态良好。我们建立了组织学、生理学和免疫学等监测方法，对ｓｃｉｄ小鼠特性进行检测。４～８周龄小鼠，胸腺和脾脏相对重量小，外周血液中白细胞含量少，组织学观察胸腺无皮质结构，髓质保留，缺乏淋巴细胞，脾脏白髓内基本没有淋巴细胞，Ｔ淋巴细胞转化实验中，转化率为零，免疫电泳未监测出免疫球蛋白的存在，这些低龄小鼠渗漏率为１３．２％。３５周龄以上的高龄小鼠中，大部分个体免疫功能有所恢复，渗漏率达７１．４％。同时，我们对ｓｃｉｄ小鼠的应用也作了一些有益的探索。     

运用HSV－tk／ACV系统进行肿瘤基因治疗研究

构建了含ｐｇｋ启动子驱动的ＨＳＶ－ｔｋ基因的反转录病毒载体ｐＬＮＴＫ，将ＨＳＶ－ｔｋ基因转移至人脑胶质瘤ＳＨＧ４４细胞（命名为ＳＨＧＬＮＴＫ）及小鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６（命名为Ｂ１６ＬＮＴＫ）．体外实验证实核着类似物ＡＣＶ对ＳＨＧＬＮＴＫ细胞和Ｂ１６ＬＮＴＫ细胞的杀伤敏感性分别高于亲本细胞１０００和４００倍．转ＨＳＶ－ｔｋ基因细胞与亲本细胞按不同比例共培养时，亲本细胞对ＡＣＶ的敏感性明显增高，存在旁观者效应．首次应用人脑胶质瘤细胞株进行裸鼠体内实验，结果表明：ＡＣＶ能完全抑制ＳＨＧＬＮＴＫ细胞在裸小鼠体内肿瘤的形成，对裸小鼠体内已形成的ＳＨＧＬＮＴＫ肿瘤的治疗效果与对照ＳＨＧ４４肿瘤相比，肿瘤体积缩小８０％；用Ｂ１６ＬＮＴＫ细胞接种同系Ｃ５７／ＢＬ小鼠，经ＡＣＶ治疗后，Ｂ１６ＬＮＴＫ组小鼠的肿瘤较对照组Ｂ１６肿瘤小９５％．ＨＳＶ－ＴＫ／ＡＣＶ系统原位基因转移治疗ＳＨＧ荷瘤裸小鼠、Ｂ１６荷瘤小鼠，原位注射病毒悬液／ＡＣＶ治疗组的ＳＨＧ肿瘤、Ｂ１６肿瘤分别较对照组肿瘤小５０％，４３％，原位注射ＰＡ３１７／ＬＮＴＫ细胞，ＡＣＶ治疗的ＳＨＧ肿瘤较对照组肿瘤小９０％，以上实验结果，统计学上差异极显著，Ｐ＜０．０１．实验     

带HSV－tk基因的重组腺病毒杀伤离体肺癌细胞的研究

带有单纯疱疹病毒脱氧胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的腺病毒结合ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（ＧＣＶ）对分裂细胞有很强的杀伤作用．在感染复数（Ｍ．Ｏ．Ｉ,ＭｕｌｔｉＰｌｉｃｉｔｙｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｎ）达到１０００时对人体肺腺癌细胞Ａ５４９的杀伤几乎达到１００％．四种人体肺癌细胞株（Ａ５４９,ＬＡＸ,ＳＰＣ,ＳＫＹ）对带ＨＳＶ－ｔｋ的腺病毒（ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ）的杀伤作用表现出不同的敏感性．另Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ（ＡＣＶ）和ＧＣＶ对感染了重组腺病毒ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ的细胞都有一定杀伤作用,但杀伤效果有很大差别;就Ａ５４９而言,ＧＣＶ的杀伤作用比ＡＣＶ高７～８倍．此外ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ结合ＧＣＶ杀伤肿瘤细胞时有“旁观者效应”,即感染了ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ的细胞与未感染细胞混合后,后者也明显地遭到杀伤．     

在SCID小鼠体内建立人急性早幼粒细胞白血病腹水模型（scid－APL－A）

人急性早幼粒细胞白血病动物模型，至今尚未见报导。我们将体外培养的人急性早幼粒白血病细胞袜ＮＢ４细胞（Ｍ３型）１×１０￣６，接种在ｓｃｉｄ小鼠腹腔内，种后一个月，腹腔内长出腹水，以后每间隔３周用腹水传代，各代小鼠接种成活率为１００％，目前已传３５代．各代小鼠存活期稳定，平均存活时间为２１，６±２．３天。对ｓｃｉｄ－ＡＰＬ－Ａ细胞作生物学特性观察，其形态学、免疫学、细胞遗传学及分子学都有体外培养的ＮＢ４细胞的特点。用全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）治疗ｓｃｉｄ－ＡＰＬ－Ａ小鼠时，产生诱导分化作用，腹水细胞的ＮＢＴ还原反应及细胞膜表面分化抗原均有所增加，同时治疗组的ｓｃｉｄ小鼠平均存活时间较对照组的明显延长。此外还观察到治疗ＡＰＬ常用药物阿霉素对ｓｃｉｄ－ＡＰＬ－Ａ也有较强的生长抑制作用。上述结果表明。己建成的ｓｃｉｄ－ＡＰＬ－Ａ可以用于评价新药或巳知治疗ＡＰＬ药物的动物模型。     

Excellent扩张与Smach积

设Ｒ是有单位元的环，Ｓ是Ｒ的Ｅｘｃｅｌｌｅｎｔ扩张，Ｇ是有限群且｜Ｇ｜￣（－１）∈Ｒ．证明了Ｒ是右余半遗传环（ＱＦ－３环，ＧＶ－环）当且仅当Ｓ是右余半遗传环（ＱＦ－３环，ＧＶ－环），也当且仅当Ｓｍａｃｈ积Ｒ＃Ｇ是右余半遗传环（ＱＦ－３环，ＧＶ－环）．     

外源性DNA对小鼠自身DNA的保护作用

采用骨髓有核细胞微核率测定法，检测小鼠服用鲤鱼精巢ＤＮＡ后，６０Ｃｏ－γ射线对小鼠骨髓细胞染色体损伤的严重程度，结果表明，小鼠每天每千克体质量灌胃鲤鱼精巢ＤＮＡ１００ｍｇ，连续１５ｄ，可使总剂量６Ｇｙ的６０Ｃｏ－γ射线致小鼠骨髓有核细胞微核发生率减少４７．２％（Ｐ＜０．００１）；采用全血ＵＤＳ测定法，检测小鼠血细胞ＤＮＡ受紫外线损伤后的修复速度，结果表明，小鼠每天每千克体质量灌胃鲤鱼精巢ＤＮＡ３０ｍｇ，连续３个月，其全血ＵＤＳ增加４０．０２％（Ｐ＜０．００１）．     

自然杀伤（NK）细胞在免疫缺陷小鼠体内的研究进展

为了研究自然杀伤细胞对正常人及人类恶性淋巴造血细胞的排斥作用，将严重的联合免疫缺陷突变小鼠或ｂｅｉｇｅ小鼠分别与Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠杂交。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ－ｓｃｉｄ小鼠显示成熟的Ｔ、Ｂ细胞严重丢失并伴随ＮＫ１．１细胞的百分比增加。虽然２月龄内的小鼠血清免疫球蛋白含量甚微，但７．５月龄的小鼠均可检出免疫球蛋白。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ－ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄ小鼠与Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ＋／＋对照组小鼠比较，溶血性补体     

小鼠集落刺激因子（CSFs）的体外诱导研究

用体外淋巴细胞培养系统，对一些非淋巴因子诱导小鼠脾细胞产生集落刺激因子（ＣＳＦｓ）进行研究的结果发现，静止的小鼠脾细胞对原激酶（ＵＫ）不产生应答，只有当ＣｏｎＡ刺激后才能产生ＣＳＦｓ；表皮生长因子（ＥＧＦ）与ＣｏｎＡ协同作用能明显诱导ＣＳＦｓ的产生．人绒毛膜促性腺激素（ＨｃＧ）可直接作用于静止的脾细胞，使其产生ＣＳＦＳ．剂量依赖试验表明当ＵＫ为１６００ＩＵ／ｍｌ，ＥＧＦ为２０ｎｇ／ｍｌ，ＨＣＧ为４００ＩＵ／ｍｌ时所诱导的ＣＳＦｓ活性达到最高值．此外，ＣＳＦｓ的诱导还具有时间依赖关系．ＵＫ作用６０ｈ，ＥＧＦ和ＨＣＧ作用４８ｈ诱导产生的ＣＳＦｓ活性达到最高值．ＨＣＧ抗体中试验进一步说明ＨＣＧ可直接作用于脾细胞．联苯胺染色结果表明ＵＫ．ＥＧＦ和ＨＣＧ诱导的条件培养液中均不含红系集落刺激因子．     

Ge-132对荷瘤小鼠NK细胞活性及红细胞免疫功能的影响

为探讨Ｇｅ－１３２抗癌作用机制,进行了Ｇｅ－１３２对荷瘤小鼠脾脏ＮＫ细胞活性和红细胞免疫粘附功能影响的体内实验研究,结果表明,Ｇｅ－１３２对小鼠移植瘤（Ｓ１８０）的生长具有显著的抑制效应,抑制率达５５％,荷瘤小鼠脾脏ＮＫ细胞活性明显低于正常对照组,Ｇｅ－１３２能使其恢复;荷瘤小鼠ＲＢＣ－Ｃ３ｂ受体花环率和肿瘤ＲＢＣ花环率明显低于正常对照组（Ｐ〈０．０１）,ＲＢＣ－ＩＣ花环率则高于正常对照组（Ｐ〈０     

清洁级小鼠感染嗜肺巴氏杆菌情况的初步调查

从１５只患结膜炎、肺炎的小鼠中分离出嗜肺巴氏杆菌１２株。随后对其群体中１０个品系８５只小鼠进行普查,结果感染率最高为ＣＢＡ及ＡＭＭＳ／１３小鼠,达２５％,ＡＢＬＢ／ｃ及ＡＭＭＳ／１也有检出,应引起生产者足够的重视。     

应用层流柜饲养实验性糖尿病Scid小鼠体会

Scid小鼠缺乏T和B淋巴细胞免疫功能,实验性糖尿病又进一步增加其感染机会,饲养难度更大。应用层流柜划分饲养及工作区,并设立“污染手制度”,在清洁环境内局部控制为SPF环境;日常饲养中适量添加维生素,成功饲养实验性糖尿病(Sevore Combined Immunodeficience Scid)小鼠四批,最长9周,顺利完成实验。实践证明,通过严密的环境控制,严格的操作程序,在清洁级环境中应用层流柜局部控制为SPF环境,短期饲养实验性糖尿病Scid小鼠是可行的。     

维生素E对小白鼠骨髓细胞染色体畸变效应的实验研究

灌胃有毒源污水或皮下注入苯诱发小白鼠骨髓细胞染色体畸变率分别为4.0%和5.0%,4h后灌胃维生素E,染色体畸变率分别下降为1.0%和1.5%,P相似文献   

小鼠非清髓性单倍体相合骨髓移植模型的建立

目的建立小鼠非清髓性单倍体相合骨髓移植模型,为研究移植前诱导免疫耐受或移植后输注供者细胞促进植入提供研究平台。方法以CB6F1雌性小鼠为受鼠,移植前1 d予450 cGy全身照射（TBI）后,随机分为2组,实验组移植0 d输注C57BL/6雄性小鼠骨髓有核细胞5×107/只,对照组不予移植。然后监测受鼠造血恢复、检测供鼠性别决定基因（SRY）判断植入情况,以及外周血供者细胞尤其CD3＋细胞嵌合状态,同时观察小鼠急性移植物抗宿主病（aGVHD）的发生情况。结果对照组小鼠均存活,仅表现轻度aGVHD,血象移植后30 d内基本恢复正常水平。实验组小鼠SRY基因在移植后＋14 d、＋30 d、＋60 d时检测PCR结果均阳性,供鼠外周血淋巴细胞、单核细胞、粒细胞嵌合率在移植后14 d分别为23.8%、36.9%%、19.4%;30 d分别为49.9%、53.2%、54.4%;60 d分别为67.6%、51.6%、56.9%,其中CD3＋细胞嵌合率分别为4.4%、21.2%、54.4%。结论 450 cGyTBI的非清髓性预处理方案,可以诱导受鼠免疫耐受、供者骨髓细胞植入,嵌合率处于中低水平混合嵌合状态。     

造血重建小鼠骨髓中成纤维细胞的起源

选择Y染色体特异的性别决定基因(Sry)作为新的细胞遗传标志,采用PCR技术对小鼠骨髓细胞重建造血的性能和造血重建小鼠骨髓中成纤维细胞的起源进行研究.将正常雄鼠骨髓细胞输注给经致死剂量射线照射的受体雌性小鼠,PCR技术检测结果表明,在活存小鼠的骨髓、脾脏、胸腺和淋巴结中均具有供体起源的细胞.而正常雄鼠或5-氟尿嘧啶处理的雄鼠骨髓细胞输注给受体雌性小鼠后,造血重建小鼠骨髓中的成纤维细胞则为受体起源.由此可见,小鼠骨髓中的成纤维细胞与造血细胞具有不同的起源.     

环磷酰胺诱导小鼠骨髓嗜多染红细胞微核阳性率分析

对环磷酰胺（４０ｍｇ／ｋｇＢＷ）诱导昆明小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率进行了统计分析,结果表明：微核率均值雌性为３１．６８,标准差为９．４１;雄性为２８．３２,标准差为７．６７,阴性对照组微核率均值雌性为１．７８,标准差为０．５５;雄性为１．６８,标准差为０．４５,环磷酰胺组（４０ｍｇ／ｋｇＢＷ）微核率与阴性对照同性别微核率相比,均有极显著性差异（Ｐ〈０．０１）,经Ｆ检验,环磷胺组和阴性对照组每组雌,     

Bone marrow cells regenerate infarcted myocardium

Myocardial infarction leads to loss of tissue and impairment of cardiac performance. The remaining myocytes are unable to reconstitute the necrotic tissue, and the post-infarcted heart deteriorates with time. Injury to a target organ is sensed by distant stem cells, which migrate to the site of damage and undergo alternate stem cell differentiation; these events promote structural and functional repair. This high degree of stem cell plasticity prompted us to test whether dead myocardium could be restored by transplanting bone marrow cells in infarcted mice. We sorted lineage-negative (Lin-) bone marrow cells from transgenic mice expressing enhanced green fluorescent protein by fluorescence-activated cell sorting on the basis of c-kit expression. Shortly after coronary ligation, Lin- c-kitPOS cells were injected in the contracting wall bordering the infarct. Here we report that newly formed myocardium occupied 68% of the infarcted portion of the ventricle 9 days after transplanting the bone marrow cells. The developing tissue comprised proliferating myocytes and vascular structures. Our studies indicate that locally delivered bone marrow cells can generate de novo myocardium, ameliorating the outcome of coronary artery disease.     

草苁蓉多糖的毒性实验研究

按照我国<食品安全性毒理学评价程序和方法>的要求,采用急性毒性实验(LD50)、最大耐受量测定、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验及小鼠精子畸变实验,研究了草苁蓉多糖急性毒性及遗传毒性作用.结果表明,草苁蓉多糖LD50值大于24 g/kg,最大耐受量为30 g/kg;小鼠骨髓嗜多染红细胞微核数量、小鼠精子畸变数量与空白对照组比较无明显差异.草苁蓉多糖属一级无毒物,未见有致突变作用.     

三甲胺(TMA)的毒性研究

用大鼠和小鼠以霍恩法测定了三甲胺的急性经口LD50,并以蓄积系数法测定其对小鼠的K值。观察并记录了急性中毒的症状。最后,以小鼠骨髓细胞染色体畸变分析法检测了单独摄入三甲胺和同时摄入亚硝酸钠的致突性。结果是大鼠经口LD50.1236mg/kg(雌),797mg/kg雄);小鼠经口LD50.908mg/kg(雌),704mg/kg(雄)。蓄积系数K>5(指标为小鼠死亡率)。小鼠骨髓细胞染色体畸变分析阴性。     

室内装饰材料中甲醛的致突变作用研究

对不同浓度气态甲醛诱导昆明种小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率进行了统计分析.将40只小鼠随机分成对照组和4,12,36 mg/m3剂量组,采用静式呼吸道染毒,连续染毒4d,每天6h,染毒结束后将小鼠处死,测定微核率.结果表明,中、高剂量组的小鼠骨髓微核率与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.05);不同剂量组微核率经方差分析有显著性差异(P<0.01);经F检验,受试物剂量组之间无显著性差异(P>0.05),且雌雄两性微核率无显著性差异(P>0.05);环磷酰胺组(40 mg/kg Bw)微核率与阴性对照组同性别微核率相比,有显著性差异(P<0.01),且雌、雄两性微核率均无显著性差异.认为气态甲醛对小鼠有致突变作用.